綿(mian)羊(yang)鞭(bian)蟲探(tan)針(zhen)法(fa)熒(ying)光(guang)PCR檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)​技術的(de)*性(xing)

綿(mian)羊(yang)鞭(bian)蟲探(tan)針(zhen)法(fa)熒(ying)光(guang)PCR檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)技術的(de)*性(xing)：

（壹(yi)）靈敏度高(gao)

雖(sui)然(ran)酶(mei)活(huo)性(xing)調(tiao)節(jie)ELISA方法(fa)的(de)靈敏度目(mu)前並(bing)不(bu)十分理想，但(dan)在酶活(huo)性(xing)放(fang)大(da)ELISA中(zhong)，檢測的(de)靈敏度遠比(bi)RIA高(gao)。根據質(zhi)量(liang)作用(yong)定(ding)律(lv)。即(ji)免(mian)疫反應(ying)所形(xing)成(cheng)的(de)免(mian)疫復(fu)合(he)物量(liang)與反應(ying)物濃(nong)度成(cheng)正(zheng)比(bi)。推(tui)測所檢(jian)測(ce)的(de)待(dai)測(ce)物(wu)分子(zi)數為(wei)1。已知(zhi)1個(ge)摩爾(er)濃(nong)度含(han)6.02×1023個(ge)分子(zi)，那麽(me)理論(lun)推(tui)測酶(mei)活性(xing)放(fang)大(da)Elisa方(fang)法(fa)的(de)zui低(di)檢(jian)測(ce)限(xian)可(ke)達1.7×10-24mol/L。雖(sui)然(ran)在實(shi)際應(ying)用(yong)中(zhong)由於(yu)反(fan)應(ying)條件(jian)和試(shi)劑(ji)純度(du)以及儀(yi)器精度等因素(su)的(de)影(ying)響，往往達不(bu)到(dao)這個水(shui)平（大(da)於(yu)104個(ge)分子(zi)），但(dan)表(biao)明Elisa在靈敏度方面的(de)改(gai)進潛(qian)力(li)是很大(da)的(de)。

（二(er)）特異(yi)性(xing)強(qiang)

從免(mian)疫反應(ying)的(de)角(jiao)度(du)來說，Elisa與RIA的(de)特異(yi)性(xing)應(ying)該是。但(dan)在ELISA方法(fa)中(zhong)，由於(yu)作用(yong)檢(jian)測(ce)指示(shi)劑(ji)的(de)酶(mei)與其底(di)物的(de)反(fan)應(ying)有專(zhuan)壹(yi)性(xing)，從而增加(jia)了該方法(fa)的(de)特異(yi)性(xing)。

（三）對儀(yi)器設備要(yao)求不(bu)高(gao)，測(ce)定(ding)成(cheng)本(ben)低(di)

Elisa測(ce)定(ding)在普(pu)通實(shi)驗室便(bian)可(ke)進行，常(chang)用(yong)的(de)儀(yi)器設備包(bao)括(kuo)加(jia)樣(yang)器(qi)、培養(yang)箱(xiang)、酶(mei)標專(zhuan)用(yong)讀(du)數器(qi)等。按現有(you)價(jia)格折(zhe)算，酶標(biao)儀(yi)的(de)價(jia)格只及(ji)液(ye)閃(shan)儀(yi)的(de)1/6至(zhi)1/4，因此(ci)每(mei)測(ce)定(ding)壹(yi)個樣(yang)本(ben)所需(xu)成(cheng)本不(bu)及PIA的(de)1/10至(zhi)1/16。某些(xie)定(ding)性(xing)Elisa方(fang)法(fa)，還(hai)可(ke)在野外(wai)進行(xing)，操(cao)作十分方便。

（四）方法(fa)快速(su)、簡(jian)便

均(jun)質酶(mei)免(mian)疫測定(ding)方法(fa)操(cao)作時，所有(you)反(fan)應(ying)試劑(ji)均(jun)在同壹(yi)體系(xi)內(nei)進行，不(bu)需任何(he)分離(li)步驟(zhou)，操(cao)作十分簡便、快速(su)，數分鐘便能得(de)出(chu)結果(guo)。某些(xie)定(ding)性(xing)Elisa試(shi)劑(ji)盒(he)，如(ru)國外(wai)的(de)某些(xie)奶牛(niu)發(fa)情(qing)鑒(jian)定(ding)和(he)妊(ren)娠(shen)診(zhen)斷(duan)Elisa試(shi)劑(ji)盒(he)，數分鐘時間(jian)便能完(wan)成(cheng)壹(yi)次測定。

（五(wu)）試(shi)劑(ji)保存時(shi)間(jian)較長

作為檢(jian)測(ce)指示(shi)劑(ji)用(yong)的(de)酶(mei)和酶(mei)標(biao)記物，在低(di)溫或幹燥(zao)條(tiao)件(jian)下相對穩定，可(ke)保(bao)存半(ban)年至(zhi)數年(nian)之(zhi)久。

（六(liu)）自動(dong)化程度高(gao)

Elisa由於(yu)不(bu)存在放(fang)射(she)性(xing)同(tong)位素汙(wu)染，因此(ci)，除加(jia)待(dai)測(ce)樣(yang)本(ben)需要人工(gong)操(cao)作外(wai)，其他各(ge)步驟(zhou)均(jun)可用(yong)儀(yi)器自(zi)動(dong)化完成(cheng)。在這種(zhong)自動(dong)化條件(jian)下，平均(jun)每人每(mei)天(tian)可完(wan)成2000余個樣(yang)本(ben)的(de)檢(jian)測工(gong)作。

（七(qi)）方(fang)法(fa)種(zhong)類多

ELISA技術可以充分利用(yong)單(dan)克隆抗體的(de)優點(dian)，並(bing)能利用(yong)某些(xie)非(fei)免(mian)疫反應(ying)試劑(ji)（如SPA、凝(ning)集素等）的(de)作用(yong)，發(fa)展(zhan)成(cheng)為(wei)許多新(xin)方(fang)法(fa)。此(ci)外(wai)，發展(zhan)Elisa技術還(hai)可(ke)以從酶及其(qi)底(di)物(wu)兩方(fang)面著手。這是因為(wei)：*，用(yong)於(yu)ELISA技術的(de)酶(mei)其種(zhong)類遠遠多於(yu)可(ke)用(yong)作RIA檢測(ce)指示(shi)劑(ji)的(de)放(fang)射(she)性(xing)同(tong)位素。生物(wu)界(jie)的(de)酶(mei)多種(zhong)多樣(yang)，有(you)希望(wang)開(kai)發很多類(lei)型的(de)酶(mei)用(yong)於(yu)Elisa，並(bing)建(jian)立相應(ying)的(de)ELISA方(fang)法(fa)。相反，自然界(jie)的(de)化學元(yuan)素是有(you)限(xian)的(de)，放(fang)射(she)性(xing)同(tong)位素的(de)種(zhong)類更加(jia)有(you)限(xian)。*，由於(yu)酶(mei)的(de)多樣(yang)性(xing)，酶(mei)作用(yong)底(di)物(wu)也(ye)有(you)多種(zhong)多樣(yang)，與此(ci)相對應(ying)的(de)生色(se)源(yuan)或(huo)供氫體的(de)種(zhong)類也(ye)有(you)遠大(da)的(de)開(kai)發和發(fa)展(zhan)潛(qian)力(li)。

PCR技術的(de)定(ding)量(liang)原(yuan)理：

擴增曲線

在Real- qPCR中(zhong)，對整個PCR反應(ying)擴增過(guo)程進行了實(shi)時(shi)的(de)檢(jian)測並(bing)記錄(lu)其熒(ying)光(guang)信(xin)號，隨著(zhe)反(fan)應(ying)的(de)進(jin)行，監(jian)測(ce)到(dao)的(de)熒(ying)光(guang)信(xin)號可以繪(hui)制成(cheng)壹(yi)條曲線，即為擴(kuo)增曲線。熒光(guang)擴(kuo)增曲線壹(yi)般分為基(ji)線期、指數增長期和(he)平(ping)臺(tai)期。

在Real-time qPCR擴增早(zao)期，擴(kuo)增的(de)熒(ying)光(guang)信(xin)號被熒(ying)光(guang)背(bei)景信(xin)號所掩蓋，無法(fa)判(pan)斷(duan)產(chan)物量(liang)的(de)變(bian)化，此(ci)時(shi)即(ji)為(wei)基(ji)線期。

PCR反(fan)應(ying)過(guo)程中(zhong)產生的(de)DNA拷(kao)貝(bei)數是呈指數形(xing)式(shi)增加(jia)的(de)，隨著(zhe)反(fan)應(ying)循(xun)環數的(de)增加(jia)，終(zhong)PCR反應(ying)不(bu)再(zai)以指數形(xing)式(shi)生成(cheng)模(mo)板，從而進入(ru)“平(ping)臺(tai)期"。在該時期，擴(kuo)增產物已不(bu)再(zai)呈指數級(ji)的(de)增加(jia)，PCR的(de)終(zhong)產物(wu)量(liang)與起始模(mo)板量(liang)之(zhi)間(jian)無線性(xing)關(guan)系(xi)，所以根據終(zhong)的(de)PCR產(chan)物量(liang)不(bu)能計(ji)算出(chu)初始模(mo)板量(liang)。