熒光探(tan)針(zhen)pcr試(shi)劑(ji)盒使(shi)用時這些(xie)事(shi)項(xiang)可不能忽(hu)略

　　熒光探(tan)針(zhen)pcr試(shi)劑(ji)盒利用(yong)吸(xi)附(fu)柱(zhu)提(ti)取(qu)RNA作(zuo)為(wei)模板(ban)，在反(fan)轉(zhuan)錄酶的(de)作用(yong)下，以(yi)引物為(wei)起(qi)點(dian)合成(cheng)與RNA模板(ban)互補(bu)的(de)cDNA鏈；然(ran)後(hou)在(zai)DNA聚合酶的(de)作用(yong)下，經高(gao)溫(wen)變性、低(di)溫(wen)退火(huo)和中溫(wen)延伸的(de)多次(ci)循環(huan)，使(shi)特異DNA片段的(de)拷(kao)貝(bei)數放(fang)大數百(bai)萬倍。將(jiang)擴增(zeng)的(de)DNA片段進行(xing)電泳(yong)、染色(se)後(hou)，在(zai)紫(zi)外(wai)燈(deng)下，肉(rou)眼可見(jian)DNA片段的(de)擴增(zeng)帶。

　　熒光探(tan)針(zhen)pcr試(shi)劑(ji)盒儲存(cun)條件(jian)：

　　1.血清：使(shi)用不含熱(re)原(yuan)和內(nei)毒(du)素的(de)試管(guan)，操作過程(cheng)中避免(mian)任何細(xi)胞(bao)刺(ci)激(ji)，收集血(xue)液(ye)後(hou)，3000轉(zhuan)離(li)心(xin)10分(fen)鐘(zhong)將(jiang)血清和紅(hong)細(xi)胞(bao)迅(xun)速(su)小心(xin)地(di)分(fen)離(li)。

　　2.血漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬酸鹽或(huo)肝(gan)素(su)抗凝。3000轉離(li)心(xin)30分(fen)鐘(zhong)取(qu)上(shang)清。

　　3.細(xi)胞(bao)上(shang)清液(ye)：3000轉(zhuan)離(li)心(xin)10分(fen)鐘(zhong)去(qu)除顆粒(li)和聚合物。

　　4.組(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)：將(jiang)組(zu)織(zhi)加入(ru)適量(liang)生(sheng)理鹽(yan)水搗碎(sui)。3000轉(zhuan)離(li)心(xin)10分(fen)鐘(zhong)取(qu)上(shang)清。

　　5.保存(cun)：如(ru)果(guo)樣(yang)本收集後(hou)不及時檢(jian)測(ce)，請(qing)按壹(yi)次用量(liang)分裝(zhuang)，凍(dong)存(cun)於(yu)-20℃，避(bi)免(mian)反(fan)復凍(dong)融，在(zai)室(shi)溫(wen)下解凍(dong)並確保樣(yang)品(pin)均(jun)勻(yun)地(di)充分(fen)解(jie)凍(dong)。

　　熒光探(tan)針(zhen)pcr試(shi)劑(ji)盒的(de)註意事(shi)項(xiang)：

　　1.加入(ru)試劑(ji)的(de)順(shun)序(xu)應，以(yi)保證(zheng)所有(you)反(fan)應板(ban)孔溫(wen)育(yu)的(de)時間(jian)壹樣(yang)。

　　2.使(shi)用幹(gan)凈的(de)塑料(liao)容器配(pei)置洗滌(di)液(ye)。

　　3.按照雞血(xue)紅(hong)蛋(dan)白(bai)(HB)ELISA檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒說明書(shu)中標明的(de)時間(jian)、加液的(de)量(liang)及順(shun)序(xu)進行(xing)溫(wen)育(yu)操作。

　　4.底物A應揮發，避免(mian)長(chang)時間(jian)打(da)開蓋子。底物B對(dui)光(guang)敏感，避免(mian)長(chang)時間(jian)暴露於(yu)光(guang)下。避(bi)免(mian)用手(shou)接(jie)觸(chu)，有(you)毒(du)。實(shi)驗完(wan)成(cheng)後(hou)應立(li)即(ji)讀取OD值。

　　5.洗滌(di)酶(mei)標板(ban)時應充分(fen)拍幹(gan)，不要將(jiang)吸(xi)水紙直接(jie)放(fang)入(ru)酶標(biao)反(fan)應孔(kong)中吸(xi)水。

　　6.使(shi)用壹(yi)次(ci)性的(de)吸(xi)頭(tou)以(yi)免(mian)交叉汙(wu)染(ran)，吸(xi)取(qu)終止液(ye)和底物A、B液(ye)時，避免(mian)使(shi)用帶金屬(shu)部分的(de)加樣器。

　　7.實(shi)驗中不用的(de)板(ban)條應立(li)即(ji)放(fang)回包裝(zhuang)袋(dai)中，密封(feng)保存(cun)，以(yi)免(mian)變質。

　　8.試(shi)劑(ji)應按標(biao)簽說明書(shu)儲存(cun)，使(shi)用前(qian)恢復到(dao)室(shi)溫(wen)。稀(xi)稀(xi)過後(hou)的(de)標準(zhun)品應丟(diu)棄，不可保存(cun)。

　　9.不用的(de)其它(ta)試劑(ji)應包(bao)裝(zhuang)好(hao)或(huo)蓋好。不同批(pi)號(hao)的(de)試劑(ji)不要混用。保質前(qian)使(shi)用。