實(shi)時(shi)熒光(guang)PCR試(shi)劑(ji)盒(he)的(de)使用(yong)註意(yi)事項概(gai)述(shu)

　　實(shi)時(shi)熒光(guang)PCR試(shi)劑(ji)盒(he)，對(dui)PCR產(chan)物(wu)進行標(biao)記(ji)跟蹤(zong)，實(shi)時(shi)在(zai)線監(jian)控反應(ying)過程，結合(he)相應(ying)的(de)軟件可(ke)以(yi)對(dui)產物(wu)進行分析(xi)，計(ji)算待測樣品模(mo)板(ban)的(de)初(chu)始(shi)濃(nong)度(du)。熒光(guang)定(ding)量(liang)PCR技術是通過(guo)熒光(guang)染(ran)料(liao)或(huo)熒光(guang)標(biao)記(ji)的(de)特異性探針(zhen)，對(dui)PCR產物(wu)進行標(biao)記(ji)跟蹤(zong)，實(shi)時(shi)監(jian)控反應(ying)過程。隨著(zhe)PCR反應(ying)的(de)進行，反應(ying)產物(wu)不斷累積(ji)，熒光(guang)信(xin)號強(qiang)度(du)也(ye)等(deng)比例增(zeng)加。每(mei)經(jing)過(guo)壹(yi)個(ge)循(xun)環(huan)，收集(ji)壹(yi)次熒光(guang)強(qiang)度(du)信(xin)號，這樣(yang)就(jiu)可(ke)以(yi)通過(guo)熒光(guang)強(qiang)度(du)變(bian)化監(jian)測產物(wu)量(liang)的(de)變(bian)化，結合(he)相應(ying)的(de)軟件對產(chan)物(wu)進行分析(xi)，可(ke)以(yi)得(de)到熒光(guang)擴增(zeng)曲線(xian)，計(ji)算待測樣品初(chu)始(shi)模(mo)版(ban)的(de)量(liang)。實(shi)時(shi)熒光(guang)定(ding)量(liang)PCR技術是壹(yi)次由(you)定性技術向定(ding)量(liang)技術的(de)飛躍(yue)，運(yun)用(yong)該項技術，可(ke)以(yi)對(dui)DNA、RNA樣品進(jin)行相(xiang)對定(ding)量(liang)、定量(liang)和(he)定性分析(xi)。

　　實(shi)時(shi)熒光(guang)PCR試(shi)劑(ji)盒(he)概(gai)述(shu)：

　　1.是采(cai)用SYBRGreenI嵌(qian)合熒光(guang)法(fa)進(jin)行RealTimePCR的(de)試(shi)劑(ji)。產(chan)品中(zhong)含有RealTimePCR反應(ying)的(de)適(shi)濃(nong)度(du)SYBRGreenI，進行實(shi)驗時(shi)，PCR反應(ying)液(ye)的(de)配(pei)制十(shi)分方(fang)便(bian)簡單(dan)。

　　2.Buffer經過優化改良(liang)，可(ke)以(yi)抑(yi)制非特異性反應(ying)，能(neng)夠在(zai)更(geng)廣(guang)的(de)範圍內(nei)進(jin)行準(zhun)確定量(liang)。

　　3.可(ke)以(yi)在(zai)寬廣(guang)的(de)定量(liang)區(qu)域(yu)內(nei)得(de)到良(liang)好的(de)標準(zhun)曲(qu)線(xian)，對目的(de)基因進(jin)行準(zhun)確定量(liang)、檢(jian)測，重復性好，可(ke)信(xin)度高。

　　4.其中熒光(guang)定(ding)量(liang)MIX中已(yi)經(jing)添(tian)加合(he)適(shi)濃(nong)度(du)的(de)熒光(guang)定(ding)量(liang)ROX校正(zheng)染(ran)料(liao)，實(shi)驗時(shi)無(wu)需(xu)額(e)外添(tian)加，直接(jie)可(ke)以(yi)進(jin)行ROX校(xiao)正(zheng)實(shi)驗。

　　實(shi)時(shi)熒光(guang)PCR試(shi)劑(ji)盒(he)註意(yi)事項：

　　1.整(zheng)個(ge)檢(jian)測過(guo)程應嚴格(ge)按(an)照本(ben)說明書(shu)要求分別在(zai)試(shi)劑(ji)準(zhun)備區(qu)、樣(yang)本(ben)處理區(qu)和(he)PCR擴增(zeng)區(qu)進(jin)行操(cao)作(zuo)，各(ge)區(qu)實(shi)驗服、儀器、耗(hao)材(cai)應(ying)獨立使用(yong)，不(bu)能(neng)混用(yong)；實(shi)驗用吸(xi)頭采用(yong)帶濾(lv)芯(xin)吸(xi)頭；樣本(ben)處理區(qu)應(ying)配(pei)有生(sheng)物(wu)安全(quan)櫃，樣本(ben)處理在(zai)生(sheng)物(wu)安全(quan)櫃中進(jin)行操(cao)作(zuo)；三(san)個(ge)區(qu)應(ying)該配(pei)有紫外線殺菌(jun)裝(zhuang)置。

　　2.為避免RNA降(jiang)解，樣(yang)本處理過程應在(zai)0-4℃條件下(xia)操(cao)作(zuo)，且(qie)完成(cheng)實(shi)驗後(hou)立即(ji)上機(ji)檢(jian)測；樣(yang)本(ben)處理過程中使用(yong)的(de)器具耗(hao)材(cai)應(ying)經過(guo)無(wu)核酶處理。

　　3.每(mei)次實(shi)驗應該設置陰、陽性對照(zhao)。

　　4.試(shi)劑(ji)盒(he)所(suo)有試(shi)劑(ji)在(zai)使用(yong)前(qian)應(ying)該在(zai)常溫(wen)下(xia)充(chong)分融(rong)化(hua)混勻，並(bing)應瞬時(shi)離(li)心。

　　5.試(shi)劑(ji)盒(he)內(nei)所(suo)配(pei)陰性和(he)陽性對照(zhao)在(zai)*次使用(yong)前(qian)應(ying)全部轉(zhuan)移(yi)至標(biao)本準(zhun)備區(qu)，並(bing)單獨存放(fang)。

　　6.為防止(zhi)熒光(guang)幹(gan)擾，應(ying)避(bi)免(mian)裸(luo)手(shou)直接(jie)接(jie)觸PCR反應(ying)管，並(bing)應避(bi)免(mian)在(zai)PCR反應(ying)管上進(jin)行任何(he)標記(ji)。

　　7.儀器(qi)擴增(zeng)相關(guan)參數應(ying)按(an)照本(ben)說明書(shu)相關(guan)要求進行設置；不(bu)同(tong)批號試(shi)劑(ji)不(bu)能(neng)混用(yong)。

　　8.ABI系列熒光(guang)定(ding)量(liang)PCR儀參數設置中(zhong)不(bu)選ROX校正(zheng)，淬滅基(ji)因選擇None。

　　9.實(shi)驗過程中產(chan)品的(de)廢(fei)棄(qi)物(wu)應該進(jin)行無(wu)害(hai)化(hua)處理後(hou)方(fang)可(ke)丟棄(qi)。