兔ELISA試劑(ji)盒(he)的計算方(fang)式和(he)正確操(cao)作(zuo)步驟(zhou)

　　兔ELISA試劑(ji)盒(he)計算以(yi)標(biao)準(zhun)物(wu)的(de)濃度(du)為橫(heng)坐標（對(dui)數(shu)坐標），OD值為縱(zong)坐標（普通坐標），在(zai)半(ban)對數(shu)坐標紙(zhi)上(shang)繪出(chu)標(biao)準(zhun)曲線(xian)，根據樣(yang)品的OD值由標(biao)準(zhun)曲線(xian)查出(chu)相應的(de)濃(nong)度(du)；再(zai)乘以(yi)稀(xi)釋倍(bei)數；或用(yong)標(biao)準(zhun)物(wu)的(de)濃度(du)與OD值計算出(chu)標(biao)準(zhun)曲線(xian)的直線(xian)回歸方(fang)程(cheng)式，將(jiang)樣(yang)品的OD值代入(ru)方(fang)程(cheng)式，計(ji)算出(chu)樣(yang)品濃度(du)，再(zai)乘以(yi)稀(xi)釋倍(bei)數，即為樣(yang)品的實(shi)際濃(nong)度(du)。

　　兔ELISA試劑(ji)盒(he)操作步驟(zhou)：

　　1.使(shi)用(yong)前，將(jiang)所有(you)試劑(ji)充(chong)分(fen)混(hun)勻。不(bu)要使(shi)液(ye)體(ti)產(chan)生(sheng)大量的泡(pao)沫，以(yi)免(mian)加樣(yang)時(shi)加入大(da)量的(de)氣(qi)泡，產(chan)生(sheng)加樣(yang)上的誤(wu)差(cha)。

　　2.根(gen)據(ju)待(dai)測樣(yang)品數量(liang)加上標(biao)準(zhun)品的(de)數量決(jue)定所需的板條(tiao)數(shu)。每(mei)個標準(zhun)品和(he)空白孔(kong)建(jian)議做復孔(kong)。每個樣(yang)品根據(ju)自(zi)己(ji)的數(shu)量(liang)來定，能使(shi)用(yong)復(fu)孔(kong)的盡量做復孔(kong)。標本用(yong)標(biao)本稀(xi)釋液(ye)：稀(xi)釋後(hou)加入50ul於(yu)反(fan)應(ying)孔(kong)內(nei)。

　　3.加入稀(xi)釋好(hao)後的標(biao)準(zhun)品50ul於(yu)反(fan)應(ying)孔(kong)、加入待(dai)測樣(yang)品50ul於(yu)反(fan)應(ying)孔(kong)內(nei)。立(li)即加入50ul的(de)標記(ji)的抗體(ti)。蓋(gai)上(shang)膜板，輕輕振(zhen)蕩混(hun)勻，37℃溫育(yu)小(xiao)時(shi)。

　　4.甩(shuai)去孔(kong)內(nei)液(ye)體(ti)，每(mei)孔(kong)加滿洗(xi)滌液(ye)，振(zhen)蕩30秒(miao)，甩(shuai)去洗滌(di)液(ye)，用(yong)吸水(shui)紙(zhi)拍(pai)幹。重復(fu)此操作(zuo)3次(ci)。如果用(yong)洗(xi)板(ban)機洗滌(di)，洗滌次數增(zeng)加壹次(ci)。

　　5.每孔(kong)加入80ul的(de)親和(he)鏈(lian)酶素(su)-HRP，輕輕振(zhen)蕩混(hun)勻，37℃溫育(yu)30分鐘(zhong)。

　　6.甩(shuai)去孔(kong)內(nei)液(ye)體(ti)，每(mei)孔(kong)加滿洗(xi)滌液(ye)，振(zhen)蕩30秒(miao)，甩(shuai)去洗滌(di)液(ye)，用(yong)吸水(shui)紙(zhi)拍(pai)幹。重復(fu)此操作(zuo)3次(ci)。如果用(yong)洗(xi)板(ban)機洗滌(di)，洗滌次數增(zeng)加壹次(ci)。

　　7.每孔(kong)加入底物(wu)A、B各50ul，輕輕振(zhen)蕩混(hun)勻，37℃溫育(yu)0分鐘(zhong)。避免光(guang)照(zhao)。

　　8.取(qu)出(chu)酶(mei)標(biao)板(ban)，迅速加入50ul終止(zhi)液(ye)，加入終止(zhi)液(ye)後應(ying)立(li)即測定結(jie)果。

　　9.在(zai)450nm波長處(chu)測定各孔(kong)的OD值。