有關(guan)細(xi)胞(bao)和組(zu)織(zhi)學技術(shu)

　　有關(guan)細(xi)胞(bao)和組(zu)織(zhi)學技術(shu)

免(mian)疫(yi)組(zu)織(zhi)化(hua)學(xue)技術(shu)是(shi)用(yong)標(biao)記(ji)物或(huo)顯(xian)色物標(biao)記(ji)的抗(kang)體(ti)檢測細胞和(he)組(zu)織(zhi)內(nei)的抗(kang)原(yuan)，從而達(da)到(dao)診(zhen)斷和研(yan)究(jiu)疾病(bing)的目(mu)的。抗(kang)原(yuan)的準確(que)顯(xian)示(shi)和(he)定(ding)位(wei)與制備的細(xi)胞(bao)和組(zu)織(zhi)標(biao)本(ben)質(zhi)量(liang)的好壞有著密(mi)切(qie)的。由(you)於(yu)各種(zhong)抗(kang)原(yuan)的生(sheng)化(hua)、物(wu)理性質(zhi)不(bu)同，如(ru)溫(wen)度(du)高(gao)低、酸(suan)堿(jian)度(du)強(qiang)弱及(ji)各(ge)種(zhong)化(hua)學(xue)試劑(ji)的作用(yong)均可影響抗(kang)原(yuan)的免(mian)疫(yi)學活性(xing)，良(liang)好的細(xi)胞(bao)和組(zu)織(zhi)學結(jie)構(gou)將有助於(yu)抗原(yuan)的準確(que)定位(wei)。因此，細(xi)胞(bao)和組(zu)織(zhi)標(biao)本(ben)的采(cai)集制備在免(mian)疫組(zu)織(zhi)化(hua)學(xue)技術(shu)中(zhong)占有十分重要的位(wei)置。

　　（壹(yi)）細(xi)胞標(biao)本(ben)的取材(cai)

　　目前，免(mian)疫(yi)組(zu)化(hua)技術(shu)已經應用(yong)於(yu)細胞(bao)學(xue)診(zhen)斷，如(ru)鑒別(bie)低分化(hua)癌(ai)與(yu)惡性淋巴(ba)瘤、黑(hei)色素瘤、低分化(hua)肉瘤等(deng)。CEA應用(yong)於(yu)胸(xiong)腹(fu)水(shui)中(zhong)間皮瘤與(yu)癌(ai)的鑒(jian)別(bie)。McAb應用(yong)於(yu)淋巴(ba)白血病和(he)惡(e)性(xing)淋巴(ba)瘤的分類(lei)分型(xing)。近年(nian)來(lai)，培養細(xi)胞的免(mian)疫(yi)組(zu)化(hua)技術(shu)在(zai)鑒(jian)定細(xi)胞(bao)的種(zhong)類(lei)、分化(hua)程度(du)、表(biao)面抗原(yuan)特點(dian)以及(ji)腫(zhong)瘤結(jie)構(gou)成分改(gai)變(bian)等(deng)方面(mian)的研(yan)究(jiu)均起到(dao)了(le)積極作用(yong)。

　　細胞(bao)標(biao)本(ben)的取材(cai)有以下(xia)3種(zhong)方(fang)法(fa):

　　．印(yin)片法(fa)　　主(zhu)要應(ying)用(yong)於(yu)活組(zu)織(zhi)檢查(zha)標(biao)本(ben)和手術(shu)切(qie)除(chu)標(biao)本(ben)。新鮮(xian)標(biao)本(ben)以zui大面(mian)積剖開，充分暴露病變(bian)區(qu)，將載(zai)玻片輕輕壓於(yu)病變(bian)區(qu)，脫(tuo)落(luo)的細(xi)胞(bao)便粘(zhan)附(fu)在玻片上(shang)，立(li)即(ji)浸(jin)入細胞(bao)固(gu)定(ding)液內(nei)5-0min，取出(chu)後自然(ran)幹燥，低溫(wen)保(bao)存備用(yong)。

　　優點(dian)是(shi)簡(jian)便(bian)省時，細胞(bao)抗(kang)原(yuan)保(bao)存較好。缺(que)點(dian)是(shi)細(xi)胞(bao)分布(bu)不(bu)均勻(yun)，玻片上(shang)細胞(bao)重疊(die)，影響標(biao)記(ji)效果。

　　2．穿刺(ci)吸(xi)取塗(tu)片法(fa)　　主(zhu)要應(ying)用(yong)於(yu)實質(zhi)器(qi)官的病(bing)變(bian)區(qu)，如(ru)肝、腎(shen)、肺、淋巴(ba)結、軟組(zu)織(zhi)等(deng)。用(yong)細針穿刺(ci)吸(xi)取病(bing)變(bian)區(qu)內(nei)液體(ti)成分，如(ru)穿刺(ci)液較少，可直接(jie)塗抹(mo)在(zai)載(zai)玻片上(shang)，力求細胞分布(bu)均勻(yun)。如(ru)穿刺(ci)液較多，細(xi)胞豐(feng)富(fu)，可用(yong)洗滌(di)法(fa)：將穿刺(ci)液滴入盛有-2ml Hanks液（RPMi 640液）的試管(guan)內(nei)，輕輕攪(jiao)拌，以500rpm低速離(li)心(xin)5-0min後，棄上(shang)清(qing)液，將沈澱(dian)制成細(xi)胞(bao)懸液（濃(nong)度(du)約(yue)2×06細(xi)胞/ml），吸(xi)取滴於(yu)載(zai)玻片上(shang)，輕輕塗抹(mo)，待(dai)塗片略(lve)幹即(ji)可固(gu)定(ding)。

　　該法(fa)穿刺(ci)吸(xi)取直(zhi)接(jie)塗片的優點(dian)是(shi)操(cao)作簡便(bian)，細胞(bao)形態(tai)保(bao)持較好。缺(que)點(dian)是(shi)細(xi)胞(bao)分布(bu)不(bu)均勻(yun)。洗塗法(fa)片雖可彌(mi)補(bu)這壹(yi)缺(que)點(dian)，但(dan)操作復(fu)雜，細胞(bao)常常(chang)發生變(bian)形。

　　3．體(ti)液沈(chen)澱(dian)塗(tu)片法(fa)　　主(zhu)要用(yong)於(yu)胸(xiong)水(shui)、腹(fu)水(shui)、尿液、腦(nao)脊(ji)液等(deng)體(ti)液多、細(xi)胞少的標(biao)本(ben)。體(ti)液采(cai)取後，必須(xu)及(ji)時處理，更不(bu)宜加(jia)固(gu)定(ding)液。根(gen)據(ju)標(biao)本(ben)內(nei)細胞(bao)數量(liang)的多少(shao)選用(yong)不(bu)同的處(chu)理方法(fa)：①細(xi)胞數量(liang)極多者，可吸(xi)取少(shao)量液體(ti)直(zhi)接(jie)塗在(zai)玻片上(shang)。②細胞(bao)數量(liang)較少者，可將液體(ti)自(zi)然(ran)沈澱(dian)，然(ran)後吸(xi)取5ml左(zuo)右沈(chen)澱(dian)液，以(yi)500rpm離(li)心(xin)0min，棄上(shang)清(qing)液，將沈澱(dian)塗(tu)片，略(lve)幹後固(gu)定(ding)備用(yong)。

　　如(ru)用(yong)細胞(bao)離(li)心(xin)塗片器(qi)（Cytospin ），可將標(biao)本(ben)用(yong)上(shang)述離(li)心(xin)沈澱(dian)法(fa)制成2×06細(xi)胞(bao)/ml的細(xi)胞(bao)懸液，吸(xi)取50μl加(jia)入塗片器(qi)內(nei)，離(li)心(xin)後即(ji)制成分布(bu)均勻(yun)的細(xi)胞(bao)塗片，細胞(bao)分布(bu)在(zai)直徑(jing)約(yue)6mm的小(xiao)圓(yuan)圈(quan)內(nei)，每個圓(yuan)圈(quan)內(nei)的細(xi)胞(bao)數約(yue)05個（Danos,976）。

　　培養細(xi)胞標(biao)本(ben)的取材(cai)可根據培養的細(xi)胞(bao)特性分別(bie)采取不(bu)同的方(fang)法(fa)。某(mou)些(xie)細(xi)胞有貼(tie)壁生(sheng)長的特性，如(ru)纖維(wei)母細胞(bao)、粘(zhan)液癌(ai)細(xi)胞等(deng)，只(zhi)需(xu)將載(zai)玻片或蓋玻片插入培養液內(nei)即(ji)可收集到(dao)理想(xiang)的細(xi)胞(bao)標(biao)本(ben)。某些(xie)細(xi)胞只(zhi)能(neng)在(zai)培養液中(zhong)生長，可用(yong)上(shang)述體(ti)液沈(chen)澱(dian)離(li)心(xin)塗片法(fa)處(chu)理。

　　制備細胞(bao)塗片應註(zhu)意(yi)：①標(biao)本(ben)反復(fu)離(li)心(xin)洗滌(di)，細(xi)胞(bao)的粘(zhan)附(fu)性降(jiang)低，在(zai)免疫(yi)組(zu)化(hua)染(ran)色過(guo)程中(zhong)容易脫(tuo)片，因此，在(zai)制備塗片前載(zai)玻片上(shang)應塗(tu)粘(zhan)附(fu)劑。②為節　省(sheng)試劑(ji)和(he)便(bian)於(yu)鏡下(xia)觀察(cha)和(he)記(ji)數，應(ying)將細胞(bao)集中(zhong)到直徑(jing)0.6-.0cm的圓(yuan)圈(quan)內(nei)，細胞(bao)總數以(yi)05個為宜。③粘(zhan)液豐(feng)富(fu)的標(biao)本(ben)，如(ru)痰液，胃(wei)液等(deng)，未經特殊(shu)處理，壹(yi)般(ban)不(bu)宜作免疫(yi)組(zu)化(hua)標(biao)記(ji)。

　　（二）組(zu)織(zhi)標(biao)本(ben)的取材(cai)

　　組(zu)織(zhi)標(biao)本(ben)主要取之於(yu)活組(zu)織(zhi)檢查(zha)標(biao)本(ben)、手術(shu)切(qie)除(chu)標(biao)本(ben)、動物模(mo)型(xing)標(biao)本(ben)以及(ji)屍(shi)體(ti)解(jie)剖標(biao)本(ben)等(deng)。前三(san)者均為新鮮(xian)組(zu)織(zhi)，後者是(shi)機體(ti)死亡(wang)2h以(yi)上(shang)的組(zu)織(zhi)，可能有不(bu)同程度(du)的自(zi)溶(rong)，其抗原(yuan)可能有變(bian)性(xing)消(xiao)失，嚴(yan)重(zhong)彌(mi)散(san)現象(xiang)，因此，屍(shi)檢組(zu)織(zhi)應盡(jin)快(kuai)固(gu)定(ding)處理，以免影響(xiang)免(mian)疫(yi)組(zu)化(hua)標(biao)記(ji)效果。但(dan)有些(xie)較穩定(ding)性抗(kang)原(yuan)，如(ru)HBsAg、HBcAg等(deng)在屍(shi)檢標(biao)本(ben)中(zhong)，抗原(yuan)顯(xian)示(shi)仍(reng)較好。

　　組(zu)織(zhi)標(biao)本(ben)的取材(cai)常常(chang)受(shou)到(dao)各種(zhong)因素的影(ying)響(xiang)，如(ru)各種(zhong)內(nei)窺(kui)鏡鉗(qian)取的組(zu)織(zhi)，常因過(guo)度(du)擠(ji)壓而變(bian)形，嚴(yan)重(zhong)者組(zu)織(zhi)結構(gou)被(bei)破(po)壞。大組(zu)織(zhi)標(biao)本(ben)病變(bian)分布(bu)廣(guang)泛(fan)，抗(kang)原(yuan)在組(zu)織(zhi)中(zhong)分布(bu)不(bu)均壹(yi)，常(chang)出現人(ren)為的組(zu)織(zhi)取材(cai)不(bu)準確(que)。為了(le)避(bi)免(mian)上(shang)述缺(que)點(dian)，組(zu)織(zhi)取材(cai)時應註(zhu)意(yi)：①活檢鉗的刃口(kou)必(bi)須(xu)鋒利(li)，以免(mian)組(zu)織(zhi)受擠(ji)壓；②取材(cai)部(bu)位(wei)必須(xu)是(shi)主(zhu)要病(bing)變(bian)區(qu)；③必(bi)須(xu)取病(bing)竈與正常(chang)組(zu)織(zhi)交(jiao)界區(qu)；④必(bi)要時取遠(yuan)距病竈區(qu)的正(zheng)常(chang)組(zu)織(zhi)作對照(zhao)。

　　為充分保(bao)存組(zu)織(zhi)的抗(kang)原(yuan)性，標(biao)本(ben)離(li)體(ti)後慶立(li)即(ji)作處理，或立(li)即(ji)速凍成凍塊(kuai)進行(xing)冰凍切(qie)片，或立(li)即(ji)用(yong)固(gu)定(ding)液固(gu)定(ding)進行(xing)脫(tuo)水(shui)、浸(jin)蠟、包(bao)埋(mai)、石(shi)蠟(la)切(qie)片。如(ru)不(bu)能(neng)迅速制片，可貯存於(yu)液氮罐(guan)內(nei)或-70。C冰(bing)箱(xiang)內(nei)備用(yong)。

有關(guan)細(xi)胞(bao)和組(zu)織(zhi)學技術(shu)