兔(tu)基質金屬(shu)蛋白酶抑(yi)制(zhi)因子(zi)1elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒洗(xi)滌方(fang)法

兔(tu)基質金屬(shu)蛋白酶抑(yi)制(zhi)因子(zi)1elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒洗(xi)滌方(fang)法：

1. 自動(dong)洗板機：每(mei)孔加入洗滌(di)液(ye)350μl，註入與吸(xi)出間(jian)隔(ge)60秒。洗(xi)板5次(ci)。

2. 手工(gong)洗板：甩盡(jin)孔內液(ye)體(ti)，在(zai)潔凈(jing)的(de)吸(xi)水(shui)紙上(shang)拍(pai)幹(gan)，每(mei)孔加洗(xi)滌液(ye)350μl，浸(jin)泡(pao)1-2分(fen)鐘(zhong)，吸(xi)去(qu)(不(bu)可(ke)觸及板壁)或甩(shuai)掉(diao)酶標板內的(de)液(ye)體(ti)，在(zai)厚(hou)的(de)吸水(shui)紙上(shang)拍(pai)幹(gan)。洗(xi)板5次(ci)。

實驗(yan)開始前(qian)，各(ge)試劑均(jun)應(ying)平(ping)衡至室(shi)溫(wen)；試(shi)劑或樣(yang)品配(pei)制(zhi)時，均(jun)需充(chong)分(fen)混(hun)勻，並盡(jin)量(liang)避免(mian)起(qi)泡。

1.加樣(yang)：分(fen)別(bie)設空白(bai)孔、標準(zhun)孔、待測(ce)樣(yang)品孔。空白(bai)孔加樣(yang)品稀(xi)釋(shi)液(ye)100μl，余孔分(fen)別(bie)加標(biao)準品(pin)或待測(ce)樣(yang)品100μl，註意不(bu)要有氣泡(pao)，加樣(yang)時將(jiang)樣(yang)品加於酶標板底(di)部(bu)，盡(jin)量(liang)不觸及孔壁，輕(qing)輕晃(huang)動(dong)混勻(yun)。給酶標板覆膜(mo)，37℃孵(fu)育(yu)2小時(shi)。為保證實驗結果有效性，每(mei)次(ci)實驗(yan)請使用新(xin)的標準品(pin)溶(rong)液。

2.棄(qi)去(qu)液(ye)體(ti)，甩幹，每(mei)個孔中(zhong)加入Detection Ab工(gong)作(zuo)液 100μl(在(zai)使用前(qian)15分(fen)鐘(zhong)內(nei)配(pei)制(zhi))，酶標板加上(shang)覆(fu)膜(mo)，37℃溫(wen)育(yu)1小時(shi)。

3.棄去(qu)孔內液(ye)體(ti)，甩幹，洗(xi)板 3次(ci)，每(mei)次(ci)浸泡(pao)1-2分(fen)鐘(zhong)，大(da)約350μl /每(mei)孔，甩並(bing)在(zai)吸水(shui)紙上(shang)輕(qing)拍(pai)將(jiang)孔內液(ye)體(ti)拍幹。

幹(gan)4.每(mei)孔加HRP Conjugate工(gong)作(zuo)液(臨(lin)用前(qian)15分(fen)鐘(zhong)內(nei)配(pei)制(zhi))100μl，加上(shang)覆(fu)膜(mo)，37℃溫(wen)育(yu)1小時(shi)。

5.棄去(qu)孔內液(ye)體(ti)，甩幹，洗(xi)板5次(ci)，方法(fa)同步驟(zhou)3。

6.每(mei)孔加底(di)物溶(rong)液100μl，酶標板加上(shang)覆(fu)膜(mo)37℃避光(guang)孵育(yu)15分(fen)鐘(zhong)左右(you)(根據實際(ji)顯(xian)色(se)情況酌情縮短或延(yan)長，但(dan)不可超過30分(fen)鐘(zhong)。當標準(zhun)孔出現(xian)明顯(xian)梯(ti)度(du)時(shi)，即可終止(zhi))。

7.每(mei)孔加終止(zhi)液(ye)50μl，終止(zhi)反應(ying)，此(ci)時(shi)藍(lan)色(se)立轉(zhuan)黃色(se)。終止(zhi)液(ye)的加入順序應(ying)盡(jin)量(liang)與底(di)物液(ye)的(de)加入順序相同。

8.立即用酶標儀在(zai)450nm波長測(ce)量(liang)各(ge)孔的光(guang)密度(du)(OD值)。應(ying)提前(qian)打(da)開酶標儀電源(yuan)，預熱儀器，設置(zhi)好(hao)檢(jian)測(ce)程序。

9.實驗(yan)完畢(bi)後(hou)將(jiang)未(wei)用完的(de)試劑(ji)按規定(ding)的保存溫(wen)度(du)放(fang)回(hui)冰箱(xiang)保存至(zhi)有效期(qi)結束。