小(xiao)鼠抗酒(jiu)石(shi)酸(suan)酸(suan)性磷酸(suan)酶5belisa檢測試劑(ji)盒​操作(zuo)步(bu)驟(zhou)

小(xiao)鼠抗酒(jiu)石(shi)酸(suan)酸(suan)性磷酸(suan)酶5belisa檢測試劑(ji)盒操作(zuo)步(bu)驟(zhou):

1. 標(biao)準(zhun)品的(de)稀釋(shi)與(yu)加樣：在酶(mei)標(biao)包(bao)被(bei)板(ban)上設標(biao)準(zhun)品孔(kong)10孔(kong)，在di壹(yi)、第(di)二孔(kong)中分別加標(biao)準(zhun)品100μl，然(ran)後在di壹(yi)、第(di)二孔(kong)中加標(biao)準(zhun)品稀釋(shi)液(ye)50μl，混勻；然(ran)後從(cong)di壹(yi)孔(kong)、第(di)二孔(kong)中各(ge)取(qu)100μl分別加到第(di)三孔(kong)和(he)第四孔(kong)，再(zai)在第(di)三、第四(si)孔(kong)分別加標(biao)準(zhun)品稀釋(shi)液(ye)50μl，混勻；然(ran)後在第(di)三孔(kong)和(he)第四孔(kong)中先各取50μl棄掉，再各(ge)取50μl分別取(qu)50μl分別加到第(di)七(qi)、第八(ba)孔(kong)中，再(zai)在第(di)七(qi)、第八(ba)孔(kong)中分別加標(biao)準(zhun)品稀釋(shi)液(ye)50μl，混勻後從(cong)第(di)七(qi)、第八(ba)孔(kong)中加到第(di)五(wu)、第六(liu)孔(kong)中，再(zai)在第(di)五(wu)、第六(liu)孔(kong)中分別加標(biao)準(zhun)品稀釋(shi)液(ye)50ul，混勻；混(hun)勻後從(cong)第(di)五(wu)、第六(liu)孔(kong)中各(ge)分別取(qu)50μl加到第(di)九、第十(shi)孔(kong)中，再(zai)在第(di)九第十(shi)孔(kong)分別加標(biao)準(zhun)品稀釋(shi)液(ye)50μl，混勻後從(cong)第(di)九第十(shi)孔(kong)中各(ge)取(qu)50μl棄掉。（稀釋(shi)後各(ge)孔(kong)加樣量都(dou)為(wei)50μl，濃度分別為(wei)180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。

2. 加樣：分別設(she)空白孔(kong)（空(kong)白對照孔(kong)不(bu)加樣品及(ji)酶標(biao)試劑(ji)，其(qi)余(yu)各(ge)步操作(zuo)相同）、待(dai)測(ce)樣品孔(kong)。在酶(mei)標(biao)包(bao)被(bei)板(ban)上待(dai)測(ce)樣品孔(kong)中先加樣品稀釋(shi)液(ye)40μl，然(ran)後再(zai)加待(dai)測(ce)樣品10μl（樣品最終稀釋(shi)度為(wei)5倍(bei)）。加樣將樣品加於(yu)酶標(biao)板孔(kong)底(di)部，盡(jin)量不(bu)觸(chu)及(ji)孔(kong)壁(bi)，輕(qing)輕(qing)晃動(dong)混勻。

3. 溫育(yu)：用(yong)封(feng)板膜封(feng)板後置(zhi)37℃溫育(yu)30分鐘。

4. 配液(ye)：將30（48T的(de)20倍(bei)）倍(bei)濃縮(suo)洗滌液(ye)用蒸(zheng)餾(liu)水(shui)30（48T的(de)20倍(bei)）倍(bei)稀釋(shi)後備(bei)用(yong)。

5. 洗滌：小(xiao)心(xin)揭掉封(feng)板膜，棄去液(ye)體，甩(shuai)幹(gan)，每(mei)孔(kong)加滿洗滌液(ye)，靜置30秒後棄(qi)去(qu)，如此(ci)重復5次，拍(pai)幹(gan)。

6. 加酶：每(mei)孔(kong)加入酶(mei)標(biao)試劑(ji)50μl，空白孔(kong)除(chu)外(wai)。

7. 溫育(yu)：操作(zuo)同(tong)3。

8. 洗滌：操作(zuo)同(tong)5。

9. 顯(xian)色：每孔(kong)先加入顯(xian)色劑A50μl，再加入顯(xian)色劑B50μl，輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩(dang)混勻，37℃避光(guang)顯(xian)色15分鐘.

10. 終止：每(mei)孔(kong)加終止液(ye)50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuan)黃(huang)色）。

11. 測定(ding)：以(yi)空白空調(tiao)零(ling)，450nm波(bo)長(chang)依序測量(liang)各(ge)孔(kong)的(de)吸(xi)光(guang)度（OD值(zhi)）。測定(ding)應(ying)在加終止液(ye)後15分鐘。