大(da)鼠雪(xue)旺(wang)氏(shi)細胞(bao)實(shi)驗(yan)步驟(zhou)

大(da)鼠雪(xue)旺(wang)氏(shi)細胞(bao)實(shi)驗(yan)步驟(zhou)

準(zhun)備工(gong)作(zuo)

1. 實(shi)驗(yan)器(qi)材(cai)準(zhun)備：準(zhun)備無菌的(de)培(pei)養(yang)皿、培(pei)養(yang)瓶、移(yi)液管(guan)、離(li)心(xin)管(guan)、手(shou)術器械(xie)等，並進行(xing)高壓滅(mie)菌或(huo)其他合(he)適的消毒處(chu)理。

2. 試劑準(zhun)備：配制(zhi)或購買(mai)合(he)適的培(pei)養(yang)基(ji)、消化酶（如、膠(jiao)原酶等）、胎(tai)牛血清(qing)、雙(shuang)抗(kang)等試劑，確(que)保(bao)其無菌且(qie)在(zai)有(you)效期內。

3. 實(shi)驗(yan)動(dong)物或組織來源準(zhun)備：根(gen)據實(shi)驗(yan)需(xu)求，選擇合(he)適的動物並進行(xing)相應(ying)的(de)麻醉(zui)或(huo)處(chu)死(si)，獲取所(suo)需(xu)組織；或從已有的組(zu)織樣本(ben)庫中(zhong)獲取組織。

取材(cai)與(yu)處(chu)理

1. 取材(cai)：在(zai)無菌條件下，迅速(su)取出目(mu)標(biao)組(zu)織，盡量(liang)減(jian)少對組(zu)織的損傷，並去(qu)除多(duo)余(yu)的(de)脂(zhi)肪、結締組(zu)織等非目(mu)的組(zu)織。

2. 清洗：將(jiang)取出的(de)組(zu)織用(yong)預(yu)冷的無菌PBS沖洗數(shu)次(ci)，以去(qu)除血(xue)液和(he)雜質(zhi)。

3. 剪(jian)切(qie)：將(jiang)組(zu)織剪(jian)成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊(kuai)，以便(bian)後(hou)續(xu)消(xiao)化。

細(xi)胞分(fen)離(li)

1. 消(xiao)化：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的組(zu)織塊(kuai)放(fang)入(ru)含有(you)適量(liang)消(xiao)化酶的離(li)心管(guan)中(zhong)，在(zai)37℃恒溫搖(yao)床(chuang)或培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化壹段時(shi)間(jian)。期間(jian)可(ke)輕(qing)輕搖晃(huang)離心(xin)管(guan)，使(shi)消(xiao)化更均勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消化：當(dang)組織塊(kuai)大(da)部(bu)分(fen)被消(xiao)化成(cheng)單細(xi)胞(bao)懸(xuan)液或(huo)小(xiao)細(xi)胞團(tuan)時(shi)，加入(ru)含血(xue)清的(de)培(pei)養(yang)基(ji)終止(zhi)消化。

3. 過(guo)濾與(yu)離心(xin)：用(yong)細胞(bao)篩過(guo)濾(lv)細胞(bao)懸液，去(qu)除未(wei)消化的(de)組織碎(sui)片，然(ran)後將(jiang)濾(lv)液以(yi)適當的轉(zhuan)速離心，收(shou)集(ji)細胞(bao)沈(chen)澱。

細(xi)胞觀(guan)察與(yu)檢測

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察：每(mei)天(tian)用(yong)倒置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)觀(guan)察細(xi)胞的(de)形(xing)態(tai)、生長(chang)狀態(tai)、密(mi)度(du)等，記錄細胞(bao)的(de)變化情(qing)況(kuang)，如發現細(xi)胞(bao)汙(wu)染(ran)或異(yi)常(chang)，及(ji)時(shi)采(cai)取相應(ying)措施(shi)。

2. 細(xi)胞計數與(yu)活(huo)力檢測：在(zai)需(xu)要時(shi)，可采(cai)用(yong)臺盼(pan)藍(lan)染色(se)等(deng)方(fang)法對(dui)細(xi)胞進行(xing)計數和(he)活(huo)力檢測，以了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)的生長(chang)情(qing)況(kuang)和健(jian)康(kang)狀態(tai)。