貓(mao)科(ke)研(yan)PCR檢(jian)測試(shi)劑盒使(shi)用(yong)方法(fa)

貓(mao)科研(yan)PCR檢(jian)測試(shi)劑盒使(shi)用(yong)方法(fa)

1. 樣(yang)品(pin)處(chu)理(li)（樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)區(qu)）

1.1 樣本(ben)前(qian)處(chu)理(li)

按(an)照(zhao)試劑盒操(cao)作(zuo)說(shuo)明(ming)或者微生物樣品(pin)處(chu)理(li)方法(fa)做(zuo)好樣(yang)品(pin)前(qian)處(chu)理(li)。

1.2 DNA 提取

根(gen)據您(nin)實(shi)驗(yan)室(shi)的具體情(qing)況和(he)樣品(pin)類(lei)型(xing)，選(xuan)擇(ze)適當(dang)的(de)提取策(ce)略方法(fa)。為(wei)了使(shi)實驗結(jie)果穩(wen)定(ding)、有(you)效(xiao)、可靠，我們(men)建(jian)議使用(yong)商(shang)品(pin)化(hua)的(de)試(shi)劑(ji)盒進行提取，嚴(yan)格按(an)照對(dui)應(ying)試劑(ji)盒說(shuo)明(ming)書(shu)進行操作(zuo)，樣(yang)本(ben)核(he)酸(suan)提取過程(cheng)中應(ying)避免(mian)汙(wu)染(ran)，提取好的(de)模板(ban)樣(yang)品(pin)如(ru)不(bu)能(neng)立(li)即(ji)檢(jian)測，建(jian)議-15℃以下保(bao)存(cun)。

推(tui)薦采用(yong)我們(men)公(gong)司(si)研(yan)發(fa)生產(chan)的(de)試劑(ji)盒：Hypure 病(bing)毒基因(yin)組(zu) DNA 提取試劑(ji)盒

2. 試(shi)劑配(pei)制（試(shi)劑(ji)準(zhun)備區(qu)）

2.1 從(cong)-15℃以下冰(bing)箱(xiang)中取出(chu)試(shi)劑盒平衡(heng)到(dao)室(shi)溫(wen)（20～25℃），註(zhu)意(yi)避免(mian)強(qiang)光(guang)照(zhao)射(she)，待(dai)溶解後振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)並(bing)低(di)速(su)離(li)心 10 s，使用(yong)低(di)吸(xi)附(fu)吸(xi)頭(tou)分(fen)液(ye)取樣，避免(mian)試(shi)劑(ji)損(sun)失(shi)和浪費。

2.2 根(gen)據待(dai)檢(jian)測樣(yang)本(ben)總(zong)數(shu)，設(she)所需要的 PCR 反應管管數(shu)為(wei) N(N=樣本(ben)數(shu)+1 管(guan)陰(yin)性對(dui)照(zhao)+1 管陽(yang)性對(dui)照(zhao)；樣品(pin)每(mei)滿 7 份，多配(pei)制 1 份(fen))，每(mei)測試(shi)反應體系配(pei)制如(ru)下表：

試(shi)劑

煙(yan)曲黴(mei)反應液

煙(yan)曲黴(mei)擴(kuo)增(zeng)液(ye)

用(yong)量(liang)（樣(yang)本(ben)數(shu)為(wei)N）

19.5μL

0.5μL

2.3 在適(shi)當(dang)容(rong)積的(de)無菌離(li)心管中加(jia)入(ru)上述(shu)試(shi)劑，充(chong)分振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)後(hou) 2000 rpm 離(li)心 10 s，按照(zhao) 20 μL/管(guan)分裝(zhuang)量(liang)將(jiang)試(shi)劑(ji)分裝(zhuang)至(zhi)八(ba)聯(lian) PCR 反應管中。

2.4 蓋(gai)緊(jin)八(ba)聯(lian) PCR 反應管蓋, 並(bing)註意(yi)做(zuo)好相(xiang)應標識(shi)（請(qing)標記(ji)在八(ba)聯(lian) PCR 反應管蓋兩端(duan)突(tu)出(chu)部(bu)位，切(qie)勿(wu)標記(ji)在八(ba)聯(lian) PCR 反應管蓋中間(jian)，以免(mian)影(ying)響信(xin)號采集(ji)）。將(jiang) PCR 反應管轉(zhuan)移(yi)至(zhi)樣(yang)本(ben)準(zhun)備區(qu)，剩余(yu)試(shi)劑放回(hui)-15℃以下冰(bing)箱(xiang)冷(leng)凍(dong)保(bao)存(cun)。

3. 加(jia)樣(yang)（樣本(ben)處(chu)理(li)區(qu)）

將(jiang)步驟(zhou) 1.2 提取的 DNA、陽(yang)性質控(kong)品(pin)、陰(yin)性質控(kong)品(pin)各取 5μL，分別(bie)加(jia)入(ru)相(xiang)應(ying)的(de)反應管中，蓋(gai)好管(guan)蓋，混(hun)勻(yun)，短(duan)暫(zan)離(li)心，核酸(suan)加(jia)樣過程(cheng)中應(ying)避免(mian)汙(wu)染(ran)。