牛(niu)β防禦素elisa檢測試劑盒(he)操(cao)作(zuo)步(bu)驟

牛(niu)β防禦素elisa檢測試劑盒(he)操(cao)作(zuo)步(bu)驟

1. 標準(zhun)品(pin)的稀釋(shi)與(yu)加(jia)樣(yang)：在酶標(biao)包被(bei)板(ban)上(shang)設(she)標準(zhun)品(pin)孔10孔(kong)，在di壹(yi)、第二孔中分別(bie)加(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)100μl，然(ran)後在di壹(yi)、第二孔中加(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液(ye)50μl，混勻；然(ran)後從di壹(yi)孔、第(di)二孔中各取(qu)100μl分別(bie)加(jia)到(dao)第三孔和第(di)四孔，再(zai)在第(di)三、第四孔分別(bie)加(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液(ye)50μl，混勻；然(ran)後在第三孔和第(di)四孔中先各取(qu)50μl棄掉，再(zai)各取(qu)50μl分別(bie)取(qu)50μl分別(bie)加(jia)到(dao)第七(qi)、第(di)八(ba)孔(kong)中，再(zai)在第(di)七(qi)、第(di)八(ba)孔(kong)中分別(bie)加(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液(ye)50μl，混勻後從第七(qi)、第(di)八(ba)孔(kong)中加(jia)到(dao)第五(wu)、第(di)六孔中，再(zai)在第(di)五(wu)、第(di)六孔中分別(bie)加(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液(ye)50ul，混勻；混勻(yun)後從第五(wu)、第(di)六孔中各分別(bie)取(qu)50μl加(jia)到(dao)第九(jiu)、第(di)十(shi)孔(kong)中，再(zai)在第(di)九(jiu)第十孔分別(bie)加(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液(ye)50μl，混勻後從第九(jiu)第(di)十孔中各取(qu)50μl棄掉。（稀釋(shi)後各孔加(jia)樣(yang)量都為(wei)50μl，濃度(du)分別(bie)為180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。

2. 加(jia)樣(yang)：分別(bie)設(she)空(kong)白(bai)孔(kong)（空(kong)白(bai)對(dui)照孔不加(jia)樣(yang)品(pin)及(ji)酶標(biao)試劑，其余各(ge)步(bu)操(cao)作(zuo)相同(tong)）、待測樣(yang)品(pin)孔。在(zai)酶標包被(bei)板(ban)上(shang)待測樣(yang)品(pin)孔中先加(jia)樣(yang)品(pin)稀釋(shi)液(ye)40μl，然(ran)後再(zai)加(jia)待測樣(yang)品(pin)10μl（樣(yang)品(pin)最(zui)終(zhong)稀釋(shi)度(du)為5倍）。加(jia)樣(yang)將樣(yang)品(pin)加(jia)於(yu)酶(mei)標板(ban)孔底部，盡(jin)量(liang)不觸及(ji)孔壁，輕輕晃(huang)動混(hun)勻(yun)。

3. 溫(wen)育：用封(feng)板(ban)膜封(feng)板(ban)後置37℃溫(wen)育30分鐘(zhong)。

4. 配液(ye)：將30（48T的(de)20倍）倍濃縮洗滌液(ye)用蒸餾(liu)水30（48T的20倍）倍稀釋(shi)後備用。

5. 洗滌：小(xiao)心(xin)揭(jie)掉(diao)封(feng)板(ban)膜，棄去液(ye)體，甩幹(gan)，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗滌液(ye)，靜置30秒後棄去，如(ru)此重(zhong)復(fu)5次(ci)，拍幹(gan)。

6. 加(jia)酶(mei)：每(mei)孔(kong)加(jia)入(ru)酶標(biao)試劑50μl，空(kong)白(bai)孔(kong)除外。

7. 溫(wen)育：操(cao)作(zuo)同(tong)3。

8. 洗滌：操(cao)作(zuo)同(tong)5。

9. 顯色：每(mei)孔(kong)先加(jia)入(ru)顯色劑A50μl，再(zai)加(jia)入(ru)顯色劑B50μl，輕輕震蕩(dang)混(hun)勻，37℃避(bi)光(guang)顯色15分鐘(zhong).

10. 終(zhong)止：每(mei)孔(kong)加(jia)終(zhong)止液(ye)50μl，終(zhong)止反(fan)應（此(ci)時(shi)藍(lan)色立轉黃(huang)色）。

11. 測定(ding)：以空(kong)白(bai)空(kong)調(tiao)零(ling)，450nm波長依(yi)序測量(liang)各(ge)孔的吸光(guang)度（OD值(zhi)）。 測定(ding)應在加(jia)終(zhong)止液(ye)後15分鐘(zhong)。