Zeranol（玉米赤黴醇(chun)）elisa試(shi)劑盒操(cao)作步(bu)驟(zhou)

Zeranol（玉米赤黴醇(chun)）elisa試(shi)劑盒操(cao)作步(bu)驟(zhou)

1. 標(biao)準品的稀釋(shi)與加樣：在酶標(biao)包(bao)被(bei)板上設標(biao)準品孔(kong)10孔(kong)，在di壹(yi)、第(di)二(er)孔(kong)中(zhong)分(fen)別加標(biao)準品100μl，然(ran)後在(zai)di壹(yi)、第(di)二(er)孔(kong)中(zhong)加標(biao)準品稀釋(shi)液50μl，混勻(yun)；然後從(cong)di壹(yi)孔(kong)、第(di)二(er)孔(kong)中(zhong)各(ge)取100μl分別加到第(di)三孔(kong)和第(di)四(si)孔(kong)，再在(zai)第(di)三、第(di)四(si)孔(kong)分別加標(biao)準品稀釋(shi)液50μl，混勻(yun)；然後在(zai)第(di)三孔(kong)和第(di)四(si)孔(kong)中(zhong)先各(ge)取50μl棄掉，再(zai)各(ge)取50μl分別取50μl分別加到第(di)七(qi)、第(di)八(ba)孔(kong)中(zhong)，再(zai)在(zai)第(di)七(qi)、第(di)八(ba)孔(kong)中(zhong)分(fen)別加標(biao)準品稀釋(shi)液50μl，混勻(yun)後從(cong)第(di)七(qi)、第(di)八(ba)孔(kong)中(zhong)加到第(di)五(wu)、第(di)六(liu)孔(kong)中(zhong)，再(zai)在(zai)第(di)五(wu)、第(di)六(liu)孔(kong)中(zhong)分(fen)別加標(biao)準品稀釋(shi)液50ul，混勻(yun)；混勻(yun)後從(cong)第(di)五(wu)、第(di)六(liu)孔(kong)中(zhong)各(ge)分(fen)別取50μl加到第(di)九、第(di)十(shi)孔(kong)中(zhong)，再(zai)在(zai)第(di)九第(di)十(shi)孔(kong)分別加標(biao)準品稀釋(shi)液50μl，混勻(yun)後從(cong)第(di)九第(di)十(shi)孔(kong)中(zhong)各(ge)取50μl棄掉。（稀釋(shi)後各(ge)孔(kong)加樣量都為50μl，濃度(du)分別為(wei)180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。

2. 加樣：分別設空白(bai)孔(kong)（空白(bai)對(dui)照(zhao)孔(kong)不加樣品及酶(mei)標(biao)試(shi)劑，其余(yu)各(ge)步(bu)操(cao)作相(xiang)同）、待測樣品孔(kong)。在酶(mei)標(biao)包(bao)被(bei)板上待測樣品孔(kong)中(zhong)先加樣品稀釋(shi)液40μl，然後再(zai)加待測樣品10μl（樣(yang)品最(zui)終稀釋(shi)度(du)為5倍）。加樣將(jiang)樣品加於(yu)酶標(biao)板孔(kong)底部(bu)，盡(jin)量(liang)不(bu)觸(chu)及孔(kong)壁，輕輕晃(huang)動(dong)混(hun)勻(yun)。

3. 溫(wen)育：用(yong)封板膜封板後置(zhi)37℃溫(wen)育30分(fen)鐘。

4. 配(pei)液：將(jiang)30（48T的20倍(bei)）倍濃縮(suo)洗(xi)滌液用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)30（48T的20倍(bei)）倍稀釋(shi)後備用(yong)。

5. 洗(xi)滌：小心揭掉封(feng)板膜，棄去(qu)液體，甩幹，每孔(kong)加滿洗(xi)滌液，靜(jing)置(zhi)30秒(miao)後棄(qi)去(qu)，如(ru)此重(zhong)復5次，拍幹(gan)。

6. 加酶：每孔(kong)加入酶標(biao)試(shi)劑50μl，空白(bai)孔(kong)除外。

7. 溫(wen)育：操(cao)作同3。

8. 洗(xi)滌：操作同5。

9. 顯色：每孔(kong)先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕(qing)震(zhen)蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃避光(guang)顯色15分鐘.

10. 終(zhong)止(zhi)：每孔(kong)加終止液50μl，終止(zhi)反(fan)應（此時(shi)藍(lan)色立轉(zhuan)黃色）。

11. 測定(ding)：以空白(bai)空調零，450nm波(bo)長依(yi)序(xu)測量各(ge)孔(kong)的吸光(guang)度(du)（OD值(zhi)）。 測定(ding)應在(zai)加終止液後15分(fen)鐘。