谷(gu)研試(shi)劑-酶(mei)聯(lian)接免疫(yi)吸附(fu)劑測定[ELISA]的(de)原(yuan)理(li)和(he)類型(xing)

酶聯(lian)接免疫(yi)吸附(fu)劑測定[ELISA]的(de)原(yuan)理(li)和(he)類型(xing)
摘(zhai)要：
.. ELISA的原(yuan)理(li) ELISA的基(ji)礎(chu)是(shi)抗(kang)原(yuan)或(huo)抗(kang)體(ti)的(de)固(gu)相化及抗(kang)原(yuan)或(huo)抗(kang)體(ti)的(de)酶(mei)標(biao)記(ji)。結(jie)合在固(gu)相載體(ti)表面(mian)的(de)抗(kang)原(yuan)或(huo)抗(kang)體(ti)仍(reng)保持其(qi)免疫(yi)學活(huo)性，酶標(biao)記(ji)的(de)抗(kang)原(yuan)或(huo)抗(kang)體(ti)既(ji)保留(liu)其(qi)免疫(yi)學活(huo)性，又保留(liu)酶(mei)的(de)活(huo)性。在測定時(shi)，受(shou)檢(jian)標(biao)本（測定其(qi)中的(de)抗(kang)體(ti)或(huo)抗(kang)原(yuan)）與(yu)固(gu)相載體(ti)表面(mian)的(de)抗(kang)原(yuan)或(huo)抗(kang)體(ti)起反應(ying)。用洗(xi)滌(di)的方(fang)法(fa)使固(gu)相載體(ti)上形成(cheng)的(de)抗(kang)原(yuan)抗(kang)體(ti)復(fu)合物與(yu)液(ye)體(ti)中的(de)其(qi)他(ta)物(wu)質分(fen)開。再(zai)加(jia)入(ru)酶(mei)標(biao)記(ji)的(de)抗(kang)原(yuan)或(huo)抗(kang)

相關專(zhuan)題ELISA免疫(yi)實(shi)驗技術
.. elisa的原(yuan)理(li)
ELISA的基(ji)礎(chu)是(shi)抗(kang)原(yuan)或(huo)抗(kang)體(ti)的(de)固(gu)相化及抗(kang)原(yuan)或(huo)抗(kang)體(ti)的(de)酶(mei)標(biao)記(ji)。結(jie)合在固(gu)相載體(ti)表面(mian)的(de)抗(kang)原(yuan)或(huo)抗(kang)體(ti)仍(reng)保持其(qi)免疫(yi)學活(huo)性，酶標(biao)記(ji)的(de)抗(kang)原(yuan)或(huo)抗(kang)體(ti)既(ji)保留(liu)其(qi)免疫(yi)學活(huo)性，又保留(liu)酶(mei)的(de)活(huo)性。在測定時(shi)，受(shou)檢(jian)標(biao)本(測定其(qi)中的(de)抗(kang)體(ti)或(huo)抗(kang)原(yuan))與(yu)固(gu)相載體(ti)表面(mian)的(de)抗(kang)原(yuan)或(huo)抗(kang)體(ti)起反應(ying)。用洗(xi)滌(di)的方(fang)法(fa)使固(gu)相載體(ti)上形成(cheng)的(de)抗(kang)原(yuan)抗(kang)體(ti)復(fu)合物與(yu)液(ye)體(ti)中的(de)其(qi)他(ta)物(wu)質分(fen)開。再(zai)加(jia)入(ru)酶(mei)標(biao)記(ji)的(de)抗(kang)原(yuan)或(huo)抗(kang)體(ti)，也通過(guo)反應(ying)而(er)結(jie)合在固(gu)相載體(ti)上。此(ci)時(shi)固相上的酶(mei)量(liang)與(yu)標(biao)本中受(shou)檢(jian)物質的量(liang)呈壹定的(de)比(bi)例(li)。加(jia)入(ru)酶(mei)反應(ying)的(de)底(di)物(wu)後(hou)，底(di)物(wu)被(bei)酶(mei)催(cui)化成(cheng)為有(you)色產物，產物的(de)量(liang)與(yu)標(biao)本中受(shou)檢(jian)物質的量(liang)直(zhi)接相關，故可根據呈色的深(shen)淺進(jin)行(xing)定性或(huo)定量(liang)分(fen)析(xi)。由(you)於(yu)酶的催(cui)化效(xiao)率(lv)很(hen)高，間接地放(fang)大(da)了免疫(yi)反應(ying)的(de)結(jie)果，使測定方(fang)法(fa)達(da)到(dao)很高的敏(min)感(gan)度(du)。
.2. ELISA的類(lei)型(xing)
ELISA可用於測定抗(kang)原(yuan)，也可用於測定抗(kang)體(ti)。在(zai)這(zhe)種測定方(fang)法(fa)中有(you)三(san)個必要的試(shi)劑：()固(gu)相的抗(kang)原(yuan)或(huo)抗(kang)體(ti)，即(ji)"免疫(yi)吸附(fu)劑"(immunosorbent);(2)酶(mei)標(biao)記(ji)的(de)抗(kang)原(yuan)或(huo)抗(kang)體(ti)，稱(cheng)為“酶(mei)聯(lian)物(wu)”、“結(jie)合物”(conjugate);(3)酶(mei)反應(ying)的(de)底(di)物(wu)。根據試(shi)劑的(de)來(lai)源和(he)標(biao)本的情況以(yi)及檢(jian)測的具(ju)體(ti)條(tiao)件(jian)，可設計(ji)出(chu)各(ge)種(zhong)不同(tong)類(lei)型(xing)的(de)檢(jian)測方(fang)法(fa)。用於臨(lin)床檢(jian)驗的ELISA主(zhu)要有(you)以下(xia)幾種類型(xing)：
.2. 雙(shuang)抗(kang)體(ti)夾(jia)心(xin)法(fa)測抗(kang)原(yuan)
酶(mei)聯接(jie)免疫(yi)吸附(fu)劑測定[ELISA]的(de)原(yuan)理(li)和(he)類型(xing)
雙(shuang)抗(kang)體(ti)夾(jia)心(xin)法(fa)是(shi)檢(jian)測抗(kang)原(yuan)zui常(chang)用的方(fang)法(fa)，操(cao)作步驟如下(xia)：
) 將特異(yi)性抗(kang)體(ti)與(yu)固(gu)相載體(ti)聯(lian)結(jie)，形成(cheng)固(gu)相抗(kang)體(ti)。洗(xi)滌(di)除去未結(jie)合的抗(kang)體(ti)及雜(za)質。
2) 加(jia)受(shou)檢(jian)標(biao)本，保溫(wen)反應(ying)。標(biao)本中的(de)抗(kang)原(yuan)與(yu)固(gu)相抗(kang)體(ti)結(jie)合，形成(cheng)固(gu)相抗(kang)原(yuan)抗(kang)體(ti)復(fu)合物。洗(xi)滌(di)除去其(qi)他(ta)未(wei)結(jie)合物質(zhi)。
3) 加(jia)酶(mei)標(biao)抗(kang)體(ti)，保溫(wen)反應(ying)。固(gu)相免疫(yi)復合物上的抗(kang)原(yuan)與(yu)酶(mei)標(biao)抗(kang)體(ti)結(jie)合。*洗(xi)滌(di)未結(jie)合的酶(mei)標(biao)抗(kang)體(ti)。此(ci)時(shi)固相載體(ti)上帶(dai)有(you)的酶(mei)量與(yu)標(biao)本中受(shou)檢(jian)抗(kang)原(yuan)的(de)量相關。
4) 加(jia)底(di)物(wu)顯(xian)色。固相上的酶(mei)催(cui)化底(di)物(wu)成(cheng)為有(you)色產物。通過(guo)比(bi)色，測知(zhi)標(biao)本中抗(kang)原(yuan)的(de)量。
在(zai)臨(lin)床檢(jian)驗中，此(ci)法(fa)適(shi)用於檢(jian)驗各(ge)種(zhong)蛋(dan)白(bai)質(zhi)等(deng)大(da)分子(zi)抗(kang)原(yuan)，例(li)如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等(deng)。只要獲得(de)針(zhen)對受(shou)檢(jian)抗(kang)原(yuan)的(de)異性抗(kang)體(ti)，就(jiu)可用於包(bao)被(bei)固相載體(ti)和(he)制備(bei)酶結(jie)合物而(er)建(jian)立此(ci)法(fa)。如抗(kang)體(ti)的(de)來(lai)源為抗(kang)血(xue)清(qing)，包(bao)被(bei)和(he)酶標(biao)用的抗(kang)體(ti)分(fen)別(bie)取(qu)自不同(tong)種(zhong)屬的動(dong)物。如應(ying)用單克(ke)隆抗(kang)體(ti)，壹(yi)般(ban)選(xuan)擇(ze)兩(liang)個針對抗(kang)原(yuan)上不同(tong)決定簇(cu)的(de)單(dan)抗(kang)，分(fen)別(bie)用於包(bao)被(bei)固相載體(ti)和(he)制備(bei)酶結(jie)合物。這(zhe)種雙(shuang)位點夾(jia)心(xin)法(fa)具(ju)有(you)很高的特(te)異性，而且(qie)可以將受(shou)檢(jian)標(biao)本和(he)酶標(biao)抗(kang)體(ti)壹(yi)起保溫(wen)反應(ying)，作壹步法檢(jian)測。