谷(gu)研(yan)試劑(ji)-人肥大(da)細(xi)胞類(lei)（MCT） ELISA試(shi)劑(ji)盒說(shuo)明書(shu)

         谷(gu)研(yan)試劑(ji)-人肥大(da)細(xi)胞類(lei)（MCT） ELISA試(shi)劑(ji)盒說(shuo)明書(shu)

人(ren)肥大(da)細(xi)胞類(lei)(MCT) ELISA試(shi)劑(ji)盒試(shi)驗原(yuan)理：
MCT試劑(ji)盒是(shi)固相(xiang)夾心法(fa)酶(mei)聯(lian)免(mian)疫吸附(fu)實(shi)驗（ELISA）.已(yi)知MCT濃度(du)的標(biao)準品、未(wei)知(zhi)濃(nong)度的樣(yang)品加(jia)入(ru)微孔酶(mei)標(biao)板(ban)內進行檢測。先將MCT和標記(ji)的抗(kang)體同(tong)時(shi)溫(wen)育(yu)。洗(xi)滌(di)後(hou)，加(jia)入(ru)親(qin)和素標(biao)記(ji)過(guo)的HRP。再(zai)經過(guo)溫(wen)育(yu)和洗滌(di)，去除未結合的酶(mei)結合物，然後加入(ru)底物A、B，和酶(mei)結合物同時(shi)作用(yong)。產(chan)生顏(yan)色(se)。顏色(se)的深淺和樣(yang)品中(zhong)MCT的濃(nong)度呈(cheng)比(bi)例關系。
自(zi)備材(cai)料
蒸餾水(shui)。
加樣(yang)器：5ul、0ul、50ul、00ul、200ul、500ul、000ul。
振(zhen)蕩器及(ji)磁(ci)力攪(jiao)拌器等。
人肥大(da)細(xi)胞類(lei)(MCT) ELISA試(shi)劑(ji)盒安(an)全(quan)性(xing)
避免(mian)直(zhi)接接觸(chu)終止(zhi)液和底物A、B。壹旦接觸(chu)到這些液體，請(qing)盡快(kuai)用(yong)水(shui)沖洗(xi)。
實(shi)驗中(zhong)不要(yao)吃喝(he)、抽煙或使(shi)用(yong)化妝(zhuang)品。
不要(yao)用(yong)嘴(zui)吸取試(shi)劑(ji)盒裏(li)的任(ren)何成(cheng)份。
操(cao)作註(zhu)意(yi)事項(xiang)
試劑(ji)應按(an)標簽(qian)說(shuo)明書(shu)儲(chu)存(cun)，使用(yong)前(qian)恢(hui)復(fu)到(dao)室溫(wen)。稀(xi)稀(xi)過(guo)後(hou)的標(biao)準品應(ying)丟(diu)棄(qi)，不可保(bao)存(cun)。
實(shi)驗中(zhong)不用(yong)的板(ban)條應(ying)立(li)即放(fang)回(hui)包裝(zhuang)袋中，密封保(bao)存(cun)，以免(mian)變質。
不用(yong)的其(qi)它試(shi)劑(ji)應包(bao)裝(zhuang)好(hao)或(huo)蓋好(hao)。不同(tong)批號(hao)的試(shi)劑(ji)不要(yao)混用(yong)。保(bao)質前(qian)使(shi)用(yong)。
使(shi)用(yong)壹(yi)次(ci)性(xing)的吸(xi)頭以免(mian)交叉汙(wu)染，吸(xi)取(qu)終(zhong)止(zhi)液和底物A、B液時(shi)，避(bi)免(mian)使用(yong)帶(dai)金屬部(bu)分的加(jia)樣(yang)器。
使用(yong)幹(gan)凈(jing)的塑(su)料容(rong)器配置洗滌(di)液。使用(yong)前(qian)充(chong)分混(hun)勻(yun)試劑(ji)盒裏(li)的各(ge)種(zhong)成(cheng)份及(ji)樣(yang)品。
洗(xi)滌(di)酶(mei)標(biao)板(ban)時(shi)應(ying)充(chong)分拍幹(gan)，不要(yao)將吸(xi)水(shui)紙(zhi)直(zhi)接放(fang)入(ru)酶(mei)標(biao)反應孔中吸(xi)水(shui)。
底物A應揮發(fa)，避免(mian)長(chang)時(shi)間(jian)打(da)開(kai)蓋子。底物B對光敏(min)感，避免(mian)長(chang)時(shi)間(jian)暴(bao)露於(yu)光(guang)下(xia)。避(bi)免(mian)用(yong)手接(jie)觸(chu)，有毒(du)。實(shi)驗完(wan)成(cheng)後(hou)應(ying)立(li)即讀(du)取(qu)OD值(zhi)。
加(jia)入(ru)試(shi)劑(ji)的順序應壹致(zhi)，以保證(zheng)所有反應板(ban)孔溫(wen)育(yu)的時(shi)間(jian)壹(yi)樣(yang)。
按(an)照說明書(shu)中(zhong)標(biao)明的時(shi)間(jian)、加(jia)液的量(liang)及(ji)順序進行溫(wen)育(yu)操(cao)作。
樣(yang)品收集、處(chu)理及(ji)保存(cun)方法(fa)
血清(qing)-----操作過(guo)程(cheng)中(zhong)避(bi)免(mian)任(ren)何細(xi)胞刺(ci)激。使用(yong)不含(han)熱原(yuan)和內毒(du)素的試(shi)管。收集血液後，000×g離心0分鐘(zhong)將血清(qing)和紅細(xi)胞迅(xun)速小(xiao)心地分離(li)。
血漿-----EDTA、檸(ning)檬(meng)酸鹽(yan)、肝(gan)素(su)血漿可用(yong)於(yu)檢測。000×g離(li)心30分鐘(zhong)去(qu)除顆粒。
細(xi)胞上清(qing)液---000×g離心0分鐘(zhong)去(qu)除顆粒和聚(ju)合(he)物。
保存(cun)------如果樣(yang)品不立(li)即使(shi)用(yong)，應(ying)將其(qi)分成(cheng)小(xiao)部(bu)分-70 ℃保(bao)存(cun)，避免(mian)反復(fu)冷(leng)凍。盡可能的不要(yao)使用(yong)溶(rong)血或高(gao)血脂(zhi)血。如果血清(qing)中大(da)量(liang)顆粒，檢測前(qian)先離(li)心或過(guo)濾(lv)。不要(yao)在37℃或(huo)更(geng)高(gao)的溫(wen)度(du)加(jia)熱解凍。應在室溫(wen)下(xia)解(jie)凍並確保(bao)樣(yang)品均(jun)勻(yun)地充(chong)分解(jie)凍。
操作步(bu)驟(zhou)
使(shi)用(yong)前(qian)，將所有試(shi)劑(ji)充(chong)分混(hun)勻(yun)。不要(yao)使液體產(chan)生大(da)量(liang)的泡(pao)沫，以免(mian)加樣(yang)時(shi)加(jia)入(ru)大(da)量(liang)的氣(qi)泡，產(chan)生加(jia)樣(yang)上的誤差。
根據待測(ce)樣(yang)品數(shu)量(liang)加(jia)上標(biao)準品的數(shu)量決(jue)定所需的板(ban)條數(shu)。每個(ge)標(biao)準品和空白(bai)孔(kong)建議做復(fu)孔(kong)。每個(ge)樣(yang)品根據自(zi)己的數(shu)量來(lai)定，能使(shi)用(yong)復(fu)孔(kong)的盡(jin)量做(zuo)復(fu)孔(kong)。
加入(ru)稀(xi)釋好(hao)後(hou)的標(biao)準品50ul於(yu)反應孔、加入(ru)待(dai)測樣(yang)品50ul於(yu)反應孔內。立(li)即加(jia)入(ru)50ul的標(biao)記(ji)的抗(kang)體。蓋上膜(mo)板(ban)，輕輕(qing)振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育(yu)小(xiao)時(shi)。
甩(shuai)去(qu)孔(kong)內液體，每孔(kong)加滿(man)洗(xi)滌(di)液，振(zhen)蕩30秒(miao)，甩(shuai)去洗(xi)滌(di)液，用(yong)吸(xi)水(shui)紙(zhi)拍幹(gan)。重(zhong)復(fu)此操作3次(ci)。如(ru)果用(yong)洗(xi)板(ban)機洗滌(di)，洗滌次(ci)數(shu)增(zeng)加(jia)壹(yi)次(ci)。
每孔(kong)加入(ru)80ul的親(qin)和鏈(lian)酶(mei)素(su)-HRP，輕輕振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育(yu)30分鐘(zhong)。
甩(shuai)去(qu)孔內液體，每孔(kong)加滿(man)洗(xi)滌(di)液，振(zhen)蕩30秒(miao)，甩(shuai)去洗(xi)滌(di)液，用(yong)吸(xi)水(shui)紙(zhi)拍幹(gan)。重(zhong)復(fu)此操作3次(ci)。如(ru)果用(yong)洗(xi)板(ban)機洗滌(di)，洗滌次(ci)數(shu)增(zeng)加(jia)壹(yi)次(ci)。
每孔(kong)加入(ru)底物A、B各(ge)50ul，輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育(yu)0分鐘(zhong)。避(bi)免(mian)光照。
取出酶(mei)標(biao)板(ban)，迅速加(jia)入(ru)50ul終(zhong)止(zhi)液，加入(ru)終(zhong)止(zhi)液後應立即測(ce)定結果。
在(zai)450nm波(bo)長(chang)處(chu)測定各(ge)孔(kong)的OD值(zhi)。
局限(xian)
6號(hao)標準品以上的結果為(wei)非線性(xing)的，根據此標準曲線無法(fa)得(de)到(dao)的結果。
試(shi)劑(ji)盒性(xing)能
. 靈敏(min)度：zui小(xiao)的檢測濃(nong)度小(xiao)於(yu)號(hao)標準品。稀(xi)釋(shi)度(du)的線性(xing)。樣(yang)品線性(xing)回(hui)歸(gui)與預期(qi)濃(nong)度相(xiang)關系數(shu)R值為(wei)0.990。
2. 特異性(xing)：不與(yu)其(qi)它細(xi)胞因子(zi)反應。
3. 重復(fu)性(xing)：板(ban)內、板(ban)間變(bian)異系數(shu)均(jun)小(xiao)於(yu)0%。
人(ren)肥大(da)細(xi)胞類(lei)(MCT) ELISA試(shi)劑(ji)盒結 果 判(pan) 斷 與(yu) 分 析(xi)
、儀(yi)器值：於(yu)波(bo)長(chang)450nm的酶(mei)標(biao)儀上讀(du)取(qu)各(ge)孔(kong)的OD值(zhi)
2、以吸光(guang)度(du)OD值(zhi)為縱坐標（Y），相(xiang)應的MCT標(biao)準品濃(nong)度(du)為(wei)橫坐標（X），做(zuo)得(de)相(xiang)應的曲線，樣(yang)品的MCT含(han)量可根據其(qi)OD值由(you)標(biao)準曲線換算(suan)出(chu)相(xiang)應的濃(nong)度。
3、檢測值(zhi)範圍(wei)：0-4.0ng/ml
4、敏感度： 0.0 ng/ml