組織培養(yang)基(ji)細(xi)胞的(de)壹代生存(cun)期研(yan)究(jiu)

組織培養(yang)基(ji)細(xi)胞的(de)壹代生存(cun)期研(yan)究(jiu)

　　所有體(ti)外(wai)培養(yang)基(ji)細(xi)胞，包括初(chu)代培養(yang)及(ji)各種細(xi)胞系，當(dang)生長達到(dao)壹定(ding)密(mi)度後，都(dou)需(xu)做傳(chuan)代處理(li)。傳(chuan)代的(de)頻率或(huo)間(jian)隔(ge)與(yu)培養(yang)液(ye)的(de)性質、接種(zhong)細(xi)胞數(shu)量和(he)細(xi)胞增(zeng)殖速(su)度等(deng)有關(guan)。接種(zhong)細(xi)胞數(shu)量大、細(xi)胞基(ji)數(shu)大、相同增(zeng)殖速(su)度條(tiao)件下(xia)，細(xi)胞數(shu)量增(zeng)加(jia)與(yu)飽和(he)速(su)度相對(dui)要快(kuai)（實際上(shang)細(xi)胞接種(zhong)數(shu)量大時細(xi)胞增(zeng)殖速(su)度比(bi)時(shi)要(yao)快(kuai)）。連續(xu)細(xi)胞系和(he)腫(zhong)瘤細(xi)胞系比(bi)初(chu)代培養(yang)細(xi)胞增(zeng)殖快(kuai)，培養(yang)液(ye)中(zhong)血(xue)清(qing)含(han)量多時細(xi)胞增(zeng)殖比(bi)少時(shi)快(kuai)。以上情(qing)況(kuang)都(dou)會縮(suo)短傳(chuan)代時(shi)間(jian)。

　　細(xi)胞傳(chuan)壹代後，壹般要(yao)經(jing)過以下三個階段：

　　．潛(qian)伏期(qi)（Latent Phase）：

　　細(xi)胞接種(zhong)培養(yang)基(ji)後，先經過(guo)壹個在(zai)培養(yang)液(ye)中(zhong)呈(cheng)懸(xuan)浮狀態(tai)的懸(xuan)浮期。此時(shi)細(xi)胞胞質(zhi)回(hui)縮(suo)，胞體(ti)呈(cheng)圓(yuan)球(qiu)形(xing)。接著是(shi)細(xi)胞附著或(huo)貼(tie)附於底物(wu)表面(mian)上，稱(cheng)貼(tie)壁，懸浮期結束(shu)。各種細(xi)胞貼(tie)附速(su)度不同，這(zhe)與(yu)細(xi)胞的(de)種(zhong)類(lei)、培養(yang)基(ji)成分和(he)底物(wu)的理(li)化(hua)性質等(deng)密(mi)切相關(guan)。初(chu)代培養(yang)細(xi)胞貼(tie)附慢，可(ke)長達0～24小時或(huo)更多(duo)；連(lian)續(xu)細(xi)胞系和(he)惡(e)性細(xi)胞系快(kuai)，0～30分鐘(zhong)即(ji)可(ke)貼(tie)附。細(xi)胞貼(tie)附現象是壹個非常(chang)復(fu)雜(za)和(he)與(yu)多種(zhong)因(yin)素相關(guan)的過(guo)程(cheng)。支(zhi)持物(wu)能(neng)影響細(xi)胞培養(yang)基(ji)的(de)貼(tie)附；底物(wu)表面(mian)不潔不利貼(tie)附，底物(wu)表面(mian)帶有陽(yang)性電荷利(li)於貼(tie)附。另外在(zai)貼(tie)附過程(cheng)中(zhong)，有壹些特(te)殊物(wu)質如(ru)纖維連(lian)接素，又(you)稱(cheng)LETS，細(xi)胞表(biao)面(mian)蛋(dan)白等(deng)也(ye)參與(yu)貼(tie)附過程(cheng)。這(zhe)些物(wu)質都(dou)是蛋(dan)白類(lei)成分，它們有的(de)存(cun)在(zai)於(yu)細(xi)胞膜(mo)的(de)表(biao)面(mian)，有的(de)則來自培養(yang)基(ji)中(zhong)的(de)血(xue)清(qing)。近(jin)年(nian)又(you)從(cong)各種不同組(zu)織和(he)生物(wu)成分中(zhong)提取(qu)出了很(hen)多(duo)促貼(tie)附物(wu)質。貼(tie)附是貼(tie)附類(lei)細(xi)胞生長增(zeng)殖條(tiao)件之壹。

　　細(xi)胞培養(yang)基(ji)貼(tie)附於支(zhi)持物(wu)後，除(chu)先經過(guo)前述(shu)延展(zhan)過程變(bian)成極性細(xi)胞，還(hai)要(yao)經(jing)過(guo)壹個潛(qian)伏階段，才進入(ru)生長和(he)增(zeng)殖期。細(xi)胞處在(zai)潛(qian)伏期(qi)時(shi)，可(ke)有運(yun)動活動，基本無(wu)增(zeng)殖，少見(jian)分裂(lie)相(xiang)。細(xi)胞潛(qian)伏期(qi)與(yu)細(xi)胞接種(zhong)密(mi)度、細(xi)胞種(zhong)類(lei)和(he)培養(yang)基(ji)性質等(deng)密(mi)切相關(guan)。初(chu)代培養(yang)細(xi)胞潛(qian)伏期(qi)長，約24～96小時或(huo)更長，連續細(xi)胞系和(he)腫(zhong)瘤細(xi)胞潛(qian)伏期(qi)短，僅(jin)6～24小時；細(xi)胞接種(zhong)密(mi)度大時潛(qian)伏期(qi)短。當(dang)細(xi)胞分裂(lie)相(xiang)開始(shi)出現並逐(zhu)漸(jian)增(zeng)多(duo)時，標(biao)誌(zhi)細(xi)胞已進入(ru)指(zhi)數(shu)增(zeng)生期(qi)。

　　2．指數(shu)增(zeng)生期(qi)：

　　這(zhe)是細(xi)胞培養(yang)基(ji)增(zeng)值(zhi)zui旺盛(sheng)的(de)階段，細(xi)胞分裂(lie)相(xiang)增(zeng)多(duo)。指數(shu)增(zeng)生期(qi)細(xi)胞分裂(lie)相(xiang)數(shu)量可(ke)作為(wei)判定(ding)細(xi)胞生長旺盛與(yu)否的壹個重要(yao)標(biao)誌(zhi)。壹般以細(xi)胞分裂(lie)表(biao)示，即(ji)細(xi)胞群(qun)中(zhong)每(mei)000個細(xi)胞中(zhong)的(de)分裂(lie)相(xiang)數(shu)。體(ti)外培養(yang)細(xi)胞分裂(lie)指(zhi)數(shu)受(shou)細(xi)胞種(zhong)類(lei)、培養(yang)液(ye)成分、pH、培養(yang)箱(xiang)溫(wen)度等(deng)多(duo)種因素的影響。壹般細(xi)胞的(de)分裂(lie)指(zhi)數(shu)介(jie)於0.%～0.5%，初(chu)代細(xi)胞分裂(lie)指(zhi)數(shu)低(di)，連續細(xi)胞和(he)腫(zhong)瘤細(xi)胞分裂(lie)指(zhi)數(shu)可(ke)高達3%～5%。pH和(he)培養(yang)液(ye)血(xue)清含(han)量變(bian)動對細(xi)胞培養(yang)基(ji)分裂(lie)指(zhi)數(shu)有很(hen)大影響。指(zhi)數(shu)增(zeng)生期(qi)是細(xi)胞壹代中(zhong)活(huo)力(li)的(de)時期(qi)，因(yin)此是(shi)進行(xing)各種實驗的和(he)zui主(zhu)要(yao)的(de)階段。在(zai)接種(zhong)細(xi)胞數(shu)量適宜情況(kuang)下(xia)，指數(shu)增(zeng)生期(qi)持續3～5天(tian)後，隨細(xi)胞數(shu)量不斷增(zeng)多(duo)、生長空間(jian)漸(jian)趨(qu)減(jian)少、zui後細(xi)胞相(xiang)互接觸(chu)匯合(he)成片。細(xi)胞培養(yang)基(ji)相(xiang)互接觸(chu)後，如培養(yang)的(de)是(shi)正常(chang)細(xi)胞，由於細(xi)胞的(de)相(xiang)互接觸(chu)能(neng)抑(yi)制(zhi)細(xi)胞的(de)運(yun)動，這(zhe)種現象稱(cheng)接觸(chu)抑(yi)制。而(er)惡(e)性細(xi)胞則無(wu)接觸(chu)抑(yi)制現象，因此接觸(chu)抑(yi)制可(ke)作為(wei)區(qu)別(bie)正常(chang)與(yu)癌(ai)細(xi)胞標(biao)誌(zhi)之壹。腫(zhong)瘤細(xi)胞由於無(wu)接觸(chu)抑(yi)制能(neng)繼(ji)續(xu)移動和(he)增(zeng)殖，導(dao)致(zhi)細(xi)胞向三維空(kong)間(jian)擴展(zhan)，使細(xi)胞發生堆積。細(xi)胞接觸(chu)匯合(he)成片後，雖(sui)發生接觸(chu)抑(yi)制，只(zhi)要營養充分，細(xi)胞仍(reng)然(ran)能(neng)夠進行(xing)增(zeng)殖分裂(lie)，因(yin)此細(xi)胞數(shu)量仍在(zai)增(zeng)多(duo)。但當(dang)細(xi)胞密(mi)度進壹步增(zeng)大，培養(yang)基(ji)液(ye)中(zhong)營(ying)養(yang)成分減(jian)少，代謝(xie)產物(wu)增(zeng)多(duo)時，細(xi)胞因(yin)營(ying)養(yang)的(de)枯(ku)竭(jie)和(he)代謝(xie)物(wu)的影響，則發生密(mi)度抑制(zhi)，導(dao)致(zhi)細(xi)胞分裂(lie)停(ting)止(zhi)。因此(ci)細(xi)胞接觸(chu)抑(yi)制和(he)密(mi)度抑制(zhi)是兩(liang)個不同的(de)概(gai)念，不應混(hun)淆。

　　3．停(ting)滯(zhi)期(qi)：

　　細(xi)胞數(shu)量達飽(bao)和(he)密(mi)度後，細(xi)胞培養(yang)基(ji)遂(sui)停(ting)止(zhi)增(zeng)殖，進入(ru)停(ting)滯(zhi)期(qi)。此(ci)時細(xi)胞數(shu)量不再(zai)增(zeng)加(jia)，故也稱(cheng)平(ping)頂(ding)期。停滯(zhi)期細(xi)胞雖(sui)不增(zeng)殖，但仍(reng)有代謝(xie)活動，繼而培養(yang)液(ye)中(zhong)營(ying)養(yang)漸(jian)趨(qu)耗(hao)盡，代謝(xie)產物(wu)積累、pH降(jiang)低(di)。此時需(xu)做分離培養(yang)即(ji)傳(chuan)代，否則細(xi)胞會(hui)中(zhong)毒，發生形(xing)態改變(bian)，重則從(cong)底物(wu)脫落(luo)死亡(wang)，故傳(chuan)代應(ying)越早越好(hao)。傳(chuan)代過(guo)晚（已有中(zhong)毒跡(ji)象）能(neng)影響下(xia)壹代細(xi)胞的(de)機能(neng)狀態(tai)。在(zai)這(zhe)種情(qing)況下(xia)，雖(sui)進行(xing)了傳(chuan)代，因(yin)細(xi)胞已受(shou)損，需(xu)要恢復(fu)，至(zhi)少還(hai)要(yao)再(zai)傳(chuan)～2兩(liang)代，通(tong)過(guo)換液淘(tao)汰(tai)掉死細(xi)胞和(he)使(shi)受(shou)損輕(qing)微的(de)細(xi)胞培養(yang)基(ji)得以恢復(fu)後，才能(neng)再(zai)用(yong)。結果反而耽(dan)誤(wu)了(le)時(shi)間(jian)，這(zhe)是在(zai)實驗中(zhong)應(ying)特(te)別(bie)註(zhu)意(yi)的(de)。