豚(tun)鼠(shu)白介素4（IL-4）ELISA試劑(ji)盒(he)檢(jian)測說(shuo)明(ming)書

豚鼠(shu)白介素4（IL-4）ELISA試(shi)劑盒(he)檢(jian)測說(shuo)明(ming)書

試驗原(yuan)理：

豚(tun)鼠(shu)白介素4（IL-4）ELISA試(shi)劑盒(he)是(shi)固(gu)相(xiang)夾(jia)心(xin)法(fa)酶(mei)聯免(mian)疫吸附(fu)實驗（ELISA）.已知(zhi)IL-4濃度(du)的標(biao)準(zhun)品(pin)、未(wei)知濃(nong)度(du)的樣(yang)品(pin) 加入微(wei)孔(kong)酶標(biao)板內(nei)進(jin)行(xing)檢測。先(xian)將IL-4和標(biao)記的(de)抗(kang)體同時(shi)溫(wen)育。洗(xi)滌(di)後，加入親和素標(biao)記過的HRP。再(zai)經(jing)過溫(wen)育和(he)洗(xi)滌(di)，去(qu)除未(wei)結合(he)的(de)酶(mei)結合(he)物(wu)，然(ran)後加入底(di)物(wu)A、B，和酶(mei)結合(he)物(wu)同(tong)時(shi)作用。產(chan)生顏(yan)色。顏色的深淺和樣(yang)品(pin)中IL-4的(de)濃度(du)呈比例關系(xi)。

試(shi)劑(ji)盒內(nei)容及其(qi)配制：

自(zi)備材料：

.  蒸餾水。

2.  加樣(yang)器：5ul、0ul、50ul、00ul、200ul、500ul、000ul。

3.  豚(tun)鼠(shu)白介素4（IL-4）ELISA試(shi)劑盒(he)振(zhen)蕩器(qi)及磁(ci)力攪(jiao)拌器(qi)等。

樣(yang)品(pin)收集、處理及保存方法(fa)：

、 血清……操(cao)作過程(cheng)中(zhong)避(bi)免(mian)任何(he)細胞刺激(ji)。使用不含熱(re)原(yuan)和(he)內(nei)毒(du)素的試(shi)管(guan)。收(shou)集血液後(hou)，000×g離心(xin)0分(fen)鐘(zhong)將血紅(hong)細胞迅速(su)小(xiao)心(xin)地分(fen)離(li)。

2、 血漿……EDTA、檸檬(meng)酸鹽(yan)、肝(gan)素血漿可用於(yu)檢測。000×g離心(xin)30分(fen)鐘(zhong)去(qu)除顆粒。

3、 細胞上(shang)清液……000×g離心(xin)0分(fen)鐘(zhong)去(qu)除顆粒和聚(ju)合(he)物(wu)。

4、 組織勻(yun)漿……將組織加入適量生(sheng)理鹽(yan)水搗碎(sui)。000×g離(li)心(xin)0分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清液。

5、 保存……如果(guo)樣(yang)品(pin)不立即使用，應(ying)將其(qi)分(fen)成(cheng)小部(bu)分(fen)-70℃保存，避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)冷凍。盡可能的(de)不要(yao)使用溶(rong)血或高血脂(zhi)血。如果(guo)血清中(zhong)大量顆粒，檢測前(qian)先(xian)離心(xin)或過濾。不要(yao)在37℃或更高的溫(wen)度(du)加熱(re)解(jie)凍(dong)。應在室溫(wen)下(xia)解(jie)凍(dong)並(bing)確(que)保樣(yang)品(pin)均勻(yun)地充(chong)分(fen)解(jie)凍(dong)。

操(cao)作註(zhu)意(yi)事(shi)項：

●   豚鼠(shu)白介素4（IL-4）ELISA試(shi)劑盒(he)應按(an)標(biao)簽說(shuo)明(ming)書儲(chu)存，使用前(qian)恢(hui)復(fu)到室(shi)溫(wen)。稀(xi)稀(xi)過後的(de)標(biao)準(zhun)品(pin)應丟棄(qi)，不可保存。

●   實驗中(zhong)不用的(de)板條(tiao)應(ying)立即放回(hui)包裝(zhuang)袋中，密封保存，以(yi)免(mian)變質。

●   不用的(de)其(qi)它(ta)試劑(ji)應包(bao)裝好(hao)或蓋好(hao)。不同批(pi)號(hao)的試(shi)劑(ji)不要(yao)混用。保質前(qian)使(shi)用。

●   使(shi)用壹次(ci)性(xing)的吸頭(tou)以(yi)免(mian)交叉汙染，吸取(qu)終止(zhi)液(ye)和(he)底(di)物(wu)A、B液時(shi)，避免(mian)使用帶金(jin)屬部分(fen)的(de)加樣(yang)器。

●   使(shi)用幹(gan)凈的(de)塑料容器(qi)配置洗(xi)滌(di)液。使用前(qian)充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)試(shi)劑(ji)盒裏(li)的各(ge)種(zhong)成(cheng)份(fen)及樣(yang)品(pin)。

●   底(di)物(wu)A應揮(hui)發，避免(mian)長時(shi)間打(da)開(kai)蓋子(zi)。底(di)物(wu)B對光敏感，避免(mian)長時(shi)間暴(bao)露於(yu)光下(xia)。避(bi)免(mian)用手(shou)接(jie)觸(chu)，有毒。實(shi)驗完成(cheng)後應(ying)立即讀取(qu)OD值。

●   加入試劑的(de)順(shun)序(xu)應壹致(zhi)，以(yi)保證所有反(fan)應板孔(kong)溫(wen)育的(de)時(shi)間壹樣(yang)。

●   按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書中(zhong)標(biao)明(ming)的時(shi)間、加液的(de)量及順序(xu)進行(xing)溫(wen)育操(cao)作。

安全(quan)性(xing)：

.   避免(mian)直接(jie)接(jie)觸(chu)終(zhong)止液和(he)底(di)物(wu)A、B，壹旦(dan)接(jie)觸(chu)到(dao)這些(xie)液體(ti)，請(qing)盡(jin)快用水沖(chong)洗(xi)。

2.   實(shi)難(nan)中不要(yao)吃喝(he)、抽煙(yan)或使用化(hua)妝品(pin)。

3.   豚(tun)鼠(shu)白介素4（IL-4）ELISA試(shi)劑盒(he)不要(yao)用嘴吸取(qu)試劑(ji)盒(he)裏(li)的任(ren)何(he)成(cheng)份(fen)。

試(shi)劑(ji)的準(zhun)備：

.   標(biao)準(zhun)品(pin)：標(biao)準(zhun)品(pin)的系(xi)列稀(xi)釋應(ying)在實(shi)驗時(shi)準(zhun)備，不能儲存。稀(xi)釋前(qian)將標(biao)準(zhun)品(pin)振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)。稀(xi)釋比例按(an)下(xia)表(biao)中進(jin)行(xing)：

2.   洗(xi)滌(di)緩(huan)沖(chong)液(ye)（50×）的稀(xi)釋：蒸餾水50倍稀(xi)釋。

試(shi)劑盒性(xing)能：

.   靈敏度(du)：zui小的檢(jian)測濃(nong)度(du)小於(yu)號(hao)標(biao)準(zhun)品(pin)。稀(xi)釋度(du)的線性(xing)。樣(yang)品(pin)線性(xing)回(hui)歸與(yu)預期濃度(du)相關系(xi)數(shu)R值為(wei)0.990。

2.   特異(yi)性(xing)：不與(yu)其(qi)它(ta)細胞因(yin)子(zi)反(fan)應。

3.   重復(fu)性(xing)：板內(nei)、板間變異(yi)系(xi)數(shu)均小於(yu)0%。

操(cao)作步(bu)驟：

.   豚(tun)鼠(shu)白介素4（IL-4）ELISA試(shi)劑盒(he)使用前(qian)，將所有試劑(ji)充分(fen)混(hun)勻(yun)。不要(yao)使液(ye)體產(chan)生大量的(de)泡沫(mo)，以(yi)免(mian)加樣(yang)時(shi)加入大量的(de)氣(qi)泡，產生(sheng)加樣(yang)上(shang)的誤差。

2.   根(gen)據(ju)待(dai)測樣(yang)品(pin)數(shu)量加上(shang)標(biao)準(zhun)品(pin)的數(shu)量決(jue)定(ding)所需的板條(tiao)數(shu)。每(mei)個(ge)標(biao)準(zhun)品(pin)和空(kong)白孔(kong)建議(yi)做復(fu)孔(kong)。每(mei)個(ge)樣(yang)品(pin)根據(ju)自(zi)己(ji)的數(shu)量來(lai)定(ding)，能(neng)使(shi)用復(fu)孔(kong)的盡量做復(fu)孔(kong)。

3.   加入稀(xi)釋好(hao)後的標(biao)準(zhun)品(pin)50ul於(yu)反(fan)應孔(kong)、加入待測樣(yang)品(pin)50ul於(yu)反(fan)應孔(kong)內(nei)。立(li)即加入50ul的(de)標(biao)記的(de)抗(kang)體。蓋上(shang)膜板，輕輕振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育45分(fen)鐘(zhong)。

4.   甩去(qu)孔(kong)內(nei)液(ye)體，每(mei)孔(kong)加滿洗(xi)滌(di)液，振(zhen)蕩30秒(miao)，甩去(qu)洗(xi)滌(di)液，用吸水紙(zhi)拍幹(gan)。重復(fu)此操(cao)作4次(ci)。如果(guo)用洗(xi)板機洗(xi)滌(di)，洗(xi)滌(di)次數(shu)增加壹次(ci)。

5.   每(mei)孔(kong)加入00ul的親和(he)鏈(lian)酶(mei)素-HRP，輕輕振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育30分(fen)鐘(zhong)。

6.   甩去(qu)孔(kong)內(nei)液(ye)體，每(mei)孔(kong)加滿洗(xi)滌(di)液，振(zhen)蕩30秒(miao)，甩去(qu)洗(xi)滌(di)液，用吸水紙(zhi)拍幹(gan)。重復(fu)此操(cao)作4次(ci)。如果(guo)用洗(xi)板機洗(xi)滌(di)，洗(xi)滌(di)次數(shu)增加壹次(ci)。

7.   每(mei)孔(kong)加入底(di)物(wu)A、B各(ge)50ul，輕輕振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育5分(fen)鐘(zhong)。避(bi)免(mian)光照。

8.   取出(chu)酶(mei)標(biao)板，迅速(su)加入50ul終(zhong)止(zhi)液(ye)，加入終止液(ye)後(hou)應(ying)立(li)即測定(ding)結果(guo)。

9.   在450nm波(bo)長(chang)處測定(ding)各(ge)孔(kong)的OD值。