研(yan)究揭示(shi)單(dan)克(ke)隆抗(kang)體時(shi)動物(wu)的(de)選擇(ze)與(yu)免疫

研(yan)究揭示(shi)單(dan)克(ke)隆抗(kang)體時(shi)動物(wu)的(de)選擇(ze)與(yu)免疫

壹、動(dong)物(wu)的(de)選擇(ze)
    目前(qian)應(ying)用(yong)zui廣的是(shi)小白鼠(shu)和(he)大白鼠(shu)，尤以小(xiao)白鼠(shu)為(wei)好。就品系(xi)而(er)言以(yi)Balb/c小白鼠(shu)應用(yong)zui廣，因為(wei)所有(you)的小(xiao)白鼠(shu)骨髓瘤系(xi)均(jun)從Balb/c小(xiao)白鼠(shu)系(xi)誘(you)導出來。Balb/c系(xi)小(xiao)白鼠(shu)必須(xu)用(yong)純系(xi)的(de)，雌(ci)雄均(jun)可，以8~2周齡為(wei)宜(yi)。大白鼠(shu)也可，能產生較(jiao)多量(liang)的單(dan)抗體。現在已經在小鼠雜(za)交(jiao)瘤的(de)基(ji)礎上，發展(zhan)了(le)小(xiao)鼠－大鼠(shu)，小(xiao)鼠－人(ren)以(yi)及人(ren)－人(ren)雜(za)交(jiao)瘤技術。
二、免疫
    壹般(ban)而言，抗(kang)原的純度(du)不(bu)很(hen)重要(yao)，特(te)別(bie)是(shi)免疫原性(xing)較(jiao)強(qiang)的(de)抗(kang)原。免疫程(cheng)序、劑量和(he)方(fang)法是(shi)關系(xi)到(dao)是(shi)否能得到(dao)所需(xu)要的(de)單(dan)抗體的關(guan)鍵(jian)之(zhi)壹(yi)。正(zheng)常(chang)小(xiao)鼠脾臟含(han)有(you)能產生各(ge)種(zhong)不(bu)同(tong)抗(kang)體的B淋巴細(xi)胞，壹(yi)只純種(zhong)小白鼠(shu)估計(ji)能產生.0×07~5.0×07種(zhong)不同(tong)的抗(kang)體(ti)。因此(ci)壹只(zhi)正常(chang)的(de)小白鼠(shu)的脾細(xi)胞與(yu)小(xiao)鼠(shu)骨髓瘤融(rong)合，只能有(you)千萬(wan)分之壹的機會獲得某(mou)壹(yi)種特定(ding)抗(kang)體。所以為(wei)了(le)提高得(de)到(dao)某(mou)種(zhong)雜(za)交(jiao)瘤的(de)機會，必須(xu)加(jia)強(qiang)免疫，使產(chan)生特(te)異性(xing)抗(kang)體(ti)的(de)B淋巴細(xi)胞大量(liang)增(zeng)加(jia)。B淋巴細(xi)胞的(de)不同(tong)發(fa)育(yu)階段對(dui)獲得陽性(xing)雜(za)交(jiao)瘤也(ye)有(you)很(hen)大影(ying)響。有(you)人(ren)認(ren)為(wei)處在轉化時(shi)期(qi)的(de)B淋巴細(xi)胞可(ke)能更易(yi)於融合，而免疫以後(hou)7~8天，雖(sui)然是(shi)抗體(ti)產生的(de)高峰(feng)時(shi)期(qi)，但(dan)形成有(you)活力(li)的(de)雜(za)交(jiao)瘤細(xi)胞的(de)可能反(fan)而(er)減(jian)少(shao)。故壹般(ban)認為(wei)加(jia)強(qiang)免疫後(hou)的第三(san)天(tian)應殺(sha)鼠(shu)取(qu)脾(pi)做(zuo)細(xi)胞融(rong)合。 
    . 可溶(rong)性(xing)抗(kang)原(yuan)（蛋(dan)白質） 以mg/ml～5mg/ml的溶液(ye)加(jia)等(deng)量(liang)的(de)弗氏*佐劑乳化，分(fen)多(duo)點(dian)小(xiao)鼠(shu)皮下註射，總量(liang)為(wei)0.3ml～0.6ml，間(jian)隔3-5周(zhou)再(zai)同(tong)樣(yang)註射壹(yi)次(ci)，0天(tian)後(hou)，斷尾(wei)取血(xue)壹滴(di)，測(ce)抗體效(xiao)價(jia)，選滴(di)度(du)高(gao)的(de)小鼠(shu)做(zuo)融(rong)合試驗(yan)。壹個(ge)月(yue)後(hou)可以(yi)經靜(jing)脈(mai)（尾靜(jing)脈(mai)）給予無(wu)佐(zuo)劑抗原(yuan)0.2ml～0.4ml，3～4天後(hou)，殺(sha)死小鼠取(qu)脾(pi)做(zuo)融(rong)合用(yong)。
    2. 顆粒(li)性(xing)抗(kang)原(yuan) 如(ru)抗原來源(yuan)方(fang)便，可(ke)以(yi)不(bu)加(jia)佐(zuo)劑而增(zeng)加(jia)免疫次(ci)數(shu)，縮短間(jian)隔時(shi)間(jian)。例如(ru)用(yong)羊紅(hong)血(xue)球免疫小白鼠(shu)，以%濃度(du)每(mei)只(zhi)皮下註射0.2ml，每(mei)周(zhou)2次(ci)，共(gong)免疫5-8次(ci)，取(qu)脾前(qian)3天(tian)，再(zai)免疫壹次(ci)即(ji)可(ke)。有(you)人(ren)認(ren)為(wei)zui後(hou)壹次(ci)免疫劑量要(yao)大，大到(dao)近(jin)於免疫耐受(shou)的程(cheng)度(du)更好。

BTC     Protein    Human    重(zhong)組(zu)人(ren) BTC / Betacellulin 蛋(dan)白
EGF     Protein    Mouse    重(zhong)組(zu)小鼠(shu) EGF / Epidermal Growth Factor 蛋(dan)白
BTC     Protein    Cynomolgus    重(zhong)組(zu)食蟹(xie)猴(hou) BTC / Betacellulin 蛋白 (Fc 標(biao)簽(qian))
BTC     Protein    Human    重(zhong)組(zu)人(ren) BTC / Betacellulin 蛋(dan)白 (Fc 標(biao)簽(qian))
NRG     Protein    Human    重(zhong)組(zu)人(ren) NRG-beta 蛋(dan)白 (ECD)
NRG     Protein    Human    重(zhong)組(zu)人(ren) NRG-beta 蛋(dan)白 (ECD, Fc 標(biao)簽(qian))
NRG     Protein    Human    重(zhong)組(zu)人(ren) NRG-alpha 蛋(dan)白 (ECD, His 標(biao)簽(qian))
NRG     Protein    Human    重(zhong)組(zu)人(ren) NRG-alpha 蛋(dan)白 (ECD, Fc 標(biao)簽(qian))
NRG     Protein    Human    重(zhong)組(zu)人(ren) NRG-alpha 蛋(dan)白 (EGF Domain, Fc 標(biao)簽(qian))
NRG4     Protein    Human    重(zhong)組(zu)人(ren) NRG4 蛋(dan)白
NRG     Protein    Human    重(zhong)組(zu)人(ren) NRG-beta 蛋(dan)白 (ECD, Fc 標(biao)簽(qian))
NRG     Protein    Human    重(zhong)組(zu)人(ren) NRG-beta 蛋(dan)白 (EGF Domain, Fc 標(biao)簽(qian))
EGF     Protein    Canine    重(zhong)組(zu)狗(gou) EGF / Epidermal Growth Facto 蛋白 (His 標(biao)簽(qian))
EGF     Protein    Mouse    重(zhong)組(zu)小鼠(shu) EGF / Epidermal Growth Factor 蛋(dan)白 (Fc 標(biao)簽(qian))
LRIG     Protein    Mouse    重(zhong)組(zu)小鼠(shu) LRIG / LIG- 蛋(dan)白 (His 標(biao)簽(qian))
HBEGF     Protein    Human    重(zhong)組(zu)人(ren) HBEGF / DTR 蛋(dan)白
EGFL7     Protein    Mouse    重(zhong)組(zu)小鼠(shu) EGFL7 / VE-statin 蛋(dan)白 (His 標(biao)簽(qian))
EREG     Protein    Human    重(zhong)組(zu)人(ren) Epiregulin / EREG 蛋(dan)白 (Fc 標(biao)簽(qian))
EREG     Protein    Mouse    重(zhong)組(zu)小鼠(shu) Epiregulin / EREG 蛋(dan)白 (Fc 標(biao)簽(qian))
EGFL7     Protein    Human    重(zhong)組(zu)人(ren) EGFL7 / VE-statin 蛋(dan)白 (His 標(biao)簽(qian))
EGF     Protein    Human    重(zhong)組(zu)人(ren) EGF / Epidermal Growth Factor 蛋(dan)白
BTC     Protein    Mouse    重(zhong)組(zu)小鼠(shu) BTC / Betacellulin 蛋(dan)白 (His & Fc 標(biao)簽(qian))
EGF     Protein    Human    重(zhong)組(zu)人(ren) EGF / Epidermal Growth Factor 蛋(dan)白 (Fc 標(biao)簽(qian))