豚鼠白介素(su)受(shou)體(ti)拮抗劑（ILRa）試劑盒(he)使(shi)用說(shuo)明

豚(tun)鼠白介素(su)受(shou)體(ti)拮抗劑（ILRa）試劑盒(he)使(shi)用說(shuo)明

本試劑僅(jin)供研究(jiu)使用(yong)

目(mu)的(de)：本豚鼠(shu)白介素(su)受(shou)體(ti)拮抗劑試劑盒(he)用(yong)於(yu)測定(ding)豚鼠(shu)血清(qing)，血漿及(ji)相(xiang)關液體(ti)樣(yang)本中(zhong)白介素(su)受(shou)體(ti)拮抗劑（ILRa）的(de)含(han)量。

實(shi)驗原理：

本豚(tun)鼠(shu)白介素(su)受(shou)體(ti)拮抗劑試劑盒(he)應用雙抗體(ti)夾(jia)心法(fa)測定(ding)標本中(zhong)豚鼠白介素(su)受(shou)體(ti)拮抗劑（ILRa）水平(ping)。用純(chun)化(hua)的(de)豚鼠白介素(su)受(shou)體(ti)拮抗劑（ILRa）抗體(ti)包(bao)被微孔(kong)板(ban)，制(zhi)成(cheng)固相抗體(ti)，往(wang)包被單抗的(de)微孔中(zhong)依次(ci)加入白介素(su)受(shou)體(ti)拮抗劑（ILRa），再(zai)與HRP標記的(de)ILRa抗體(ti)結合，形成(cheng)抗體(ti)-抗原-酶(mei)標抗體(ti)復(fu)合物，經過*洗(xi)滌後加底(di)物TMB顯(xian)色(se)。TMB在HRP酶(mei)的(de)催(cui)化(hua)下(xia)轉化(hua)成(cheng)藍(lan)色(se)，並在酸(suan)的(de)作用下(xia)轉化(hua)成(cheng)zui終的(de)黃色(se)。顏(yan)色(se)的(de)深淺(qian)和樣(yang)品中(zhong)的(de)白介素(su)受(shou)體(ti)拮抗劑（ILRa）呈(cheng)正(zheng)相關。用酶(mei)標儀(yi)在450nm波長下測定(ding)吸(xi)光度(du)（OD值(zhi)），通(tong)過(guo)標準(zhun)曲(qu)線計算樣(yang)品中(zhong)豚鼠白介素(su)受(shou)體(ti)拮抗劑（ILRa）濃(nong)度(du)。

樣(yang)本處理及要(yao)求：

. 血清(qing)：室溫(wen)血液自(zi)然凝(ning)固0-20分鐘(zhong)，離(li)心20分鐘(zhong)左右(you)（2000-3000轉(zhuan)/分(fen)）。仔(zai)細(xi)收集上清(qing)，保(bao)存過程中(zhong)如出(chu)現(xian)沈(chen)澱，應再次離(li)心。

2. 血漿：應根(gen)據(ju)標本的(de)要(yao)求選(xuan)擇(ze)EDTA或檸檬(meng)酸(suan)鈉作為抗凝(ning)劑，混(hun)合0-20分鐘(zhong)後，離(li)心20分鐘(zhong)左右(you)（2000-3000轉(zhuan)/分(fen)）。仔(zai)細(xi)收集上清(qing)，保(bao)存過程中(zhong)如有(you)沈(chen)澱形成(cheng)，應該再次(ci)離(li)心。

3. 尿(niao)液：豚(tun)鼠白介素(su)受(shou)體(ti)拮抗劑用(yong)無(wu)菌管(guan)收集，離(li)心20分鐘(zhong)左右(you)（2000-3000轉(zhuan)/分(fen)）。仔(zai)細(xi)收集上清(qing)，保(bao)存過程中(zhong)如有(you)沈(chen)澱形成(cheng)，應再次離(li)心。胸腹水、腦脊(ji)液參照(zhao)實(shi)行。

操(cao)作步驟(zhou)：

. 標準(zhun)品的(de)稀釋與加樣(yang)：在酶(mei)標包被板(ban)上(shang)設標準(zhun)品孔(kong)0孔(kong)，在*、第二(er)孔中(zhong)分別加標準(zhun)品00μl，然(ran)後(hou)在*、第二(er)孔中(zhong)加標準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液(ye)50μl，混勻(yun)；然(ran)後(hou)從(cong)*孔、第二(er)孔中(zhong)各取00μl分(fen)別(bie)加(jia)到第三(san)孔(kong)和第四(si)孔(kong)，再(zai)在第三(san)、第四(si)孔(kong)分(fen)別(bie)加標準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液(ye)50μl，混勻(yun)；然(ran)後(hou)在第三(san)孔和第四(si)孔(kong)中(zhong)先(xian)各(ge)取50μl棄(qi)掉(diao)，再(zai)各(ge)取50μl分(fen)別(bie)加(jia)到第五(wu)、第(di)六孔中(zhong)，再在第五(wu)、第六(liu)孔中(zhong)分別加標準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液(ye)50ul，混勻(yun)；混(hun)勻(yun)後(hou)從(cong)第(di)五、第六孔中(zhong)各取50μl分(fen)別(bie)加(jia)到第七(qi)、第(di)八孔中(zhong)，再在第七(qi)、第八孔中(zhong)分別加標準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液(ye)50μl，混勻(yun)後(hou)從(cong)第(di)七、第八孔中(zhong)分別取50μl加(jia)到第九、第(di)十孔(kong)中(zhong)，再在第九第(di)十孔(kong)分別(bie)加標準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液(ye)50μl，混勻(yun)後(hou)從(cong)第(di)九第(di)十孔(kong)中(zhong)各取50μl棄(qi)掉(diao)。（稀(xi)釋(shi)後(hou)各(ge)孔加樣(yang)量都(dou)為50μl，濃(nong)度(du)分(fen)別為60ng/L，40ng/L ，20ng/L，0ng/L，5 ng/L）。

2. 加樣(yang)：分別設空白孔(kong)（空白對(dui)照(zhao)孔(kong)不加(jia)樣(yang)品及(ji)酶(mei)標試劑，其(qi)余(yu)各(ge)步(bu)操(cao)作相同）、待(dai)測樣(yang)品孔(kong)。在酶(mei)標包被板(ban)上(shang)待(dai)測樣(yang)品孔(kong)中(zhong)先(xian)加(jia)樣(yang)品稀(xi)釋(shi)液(ye)40μl，然後再(zai)加待(dai)測樣(yang)品0μl（樣(yang)品zui終(zhong)稀(xi)釋(shi)度(du)為(wei)5倍(bei)）。加樣(yang)將(jiang)樣(yang)品加(jia)於(yu)酶(mei)標板(ban)孔(kong)底(di)部，盡(jin)量不(bu)觸(chu)及(ji)孔(kong)壁(bi)，輕輕(qing)晃動(dong)混(hun)勻(yun)。

3. 溫(wen)育(yu)：豚(tun)鼠白介素(su)受(shou)體(ti)拮抗劑用(yong)封板(ban)膜(mo)封板(ban)後(hou)置(zhi)37℃溫(wen)育(yu)30分(fen)鐘(zhong)。

4. 配液(ye)：將(jiang)30（48T的(de)20倍(bei)）倍(bei)濃縮洗(xi)滌液用蒸(zheng)餾(liu)水30（48T的(de)20倍(bei)）倍(bei)稀釋(shi)後備(bei)用(yong)。

5. 洗(xi)滌：小心揭(jie)掉(diao)封(feng)板(ban)膜(mo)，棄去(qu)液(ye)體(ti)，甩(shuai)幹(gan)，每孔加滿(man)洗(xi)滌液，靜置(zhi)30秒(miao)後棄去(qu)，如此(ci)重(zhong)復5次，拍幹(gan)。

6. 加酶(mei)：每孔加入(ru)酶(mei)標試劑50μl，空白孔(kong)除外。

註意(yi)事(shi)項(xiang)：

． 試劑盒(he)從(cong)冷藏(zang)環境(jing)中(zhong)取出(chu)應在室溫(wen)平(ping)衡5-30分(fen)鐘(zhong)後方(fang)可(ke)使(shi)用(yong)，酶(mei)標包被板(ban)開封後(hou)如未(wei)用(yong)完(wan)，板(ban)條應裝入密封袋(dai)中(zhong)保存。

2． 濃洗(xi)滌液可能會(hui)有(you)結晶(jing)析(xi)出(chu)，稀(xi)釋時可(ke)在水浴中(zhong)加溫(wen)助(zhu)溶，洗(xi)滌時不(bu)影(ying)響(xiang)結果。

3． 各步(bu)加(jia)樣(yang)均應使用加(jia)樣(yang)器，並經常校(xiao)對(dui)其(qi)準(zhun)確(que)性，以(yi)避(bi)免(mian)試驗誤(wu)差。壹(yi)次(ci)加(jia)樣(yang)時間(jian)控(kong)制在5分鐘(zhong)內(nei)，如標本數(shu)量多(duo)，使用(yong)排(pai)槍加(jia)樣(yang)。

4． 豚鼠白介素(su)受(shou)體(ti)拮抗劑請每次測定(ding)的(de)同時做標準(zhun)曲(qu)線，做復(fu)孔。如標本中(zhong)待(dai)測物質含(han)量過(guo)高（樣(yang)本OD值大(da)於(yu)標準(zhun)品孔(kong)*孔(kong)的(de)OD值），請先(xian)用(yong)樣(yang)品稀(xi)釋(shi)液(ye)稀釋壹(yi)定(ding)倍(bei)數(shu)（n倍(bei)）後再(zai)測定(ding)，計算時請zui後(hou)乘(cheng)以總(zong)稀釋倍(bei)數(shu)（×n×5）。

5． 封板(ban)膜(mo)只限(xian)壹(yi)次性使用，以避(bi)免(mian)交(jiao)叉(cha)汙染(ran)。

6． 底(di)物請避(bi)光(guang)保(bao)存(cun)。

7． 嚴格(ge)按(an)照(zhao)說(shuo)明書的(de)操(cao)作進行，試驗結果判定(ding)必須以酶(mei)標儀(yi)讀數(shu)為準(zhun).

8． 所(suo)有(you)樣(yang)品，洗(xi)滌液和各種廢棄物都(dou)應按傳染物處(chu)理。

9． 本試劑不(bu)同批(pi)號組分不(bu)得(de)混(hun)用。