現(xian)貨大鼠骨(gu)鈣(gai)素（OC）試劑盒使用說明(ming)書

現貨大鼠骨(gu)鈣(gai)素（OC）試劑盒使用說明(ming)書

本(ben)試劑盒僅(jin)供研(yan)究使(shi)用。

檢測範圍(wei)： 48T
50ng/L - 600 ng/L

使用目的(de)：
本(ben)大鼠骨(gu)鈣(gai)素OC試劑盒用於(yu)測定大鼠血(xue)清、血(xue)漿及相關(guan)液體(ti)樣本(ben)中(zhong)骨(gu)鈣(gai)素（OC）含(han)量。

實(shi)驗原理(li)
本(ben)大鼠骨(gu)鈣(gai)素OC試劑盒應用雙抗體(ti)夾心(xin)法測定標(biao)本中(zhong)大鼠骨(gu)鈣(gai)素（OC）水平。用純(chun)化的大鼠骨(gu)鈣(gai)素（OC）抗(kang)體包被微(wei)孔板(ban)，制成(cheng)固(gu)相抗體(ti)，往包(bao)被單(dan)抗的微(wei)孔中依(yi)次(ci)加(jia)入(ru)骨(gu)鈣(gai)素（OC），再(zai)與HRP標(biao)記(ji)的骨(gu)鈣(gai)素（OC）抗(kang)體結(jie)合，形(xing)成(cheng)抗體-抗原-酶標(biao)抗體(ti)復合(he)物(wu)，經(jing)過*洗(xi)滌(di)後(hou)加(jia)底物(wu)TMB顯(xian)色(se)。TMB在HRP酶的催化下(xia)轉(zhuan)化成(cheng)藍色(se)，並在(zai)酸(suan)的作用下(xia)轉(zhuan)化成(cheng)zui終的黃(huang)色(se)。顏色(se)的深(shen)淺和樣品(pin)中(zhong)的(de)大鼠骨(gu)鈣(gai)素（OC）呈(cheng)正相關(guan)。用酶標(biao)儀在450nm波長下(xia)測定吸(xi)光度（OD值(zhi)），通(tong)過標(biao)準曲線(xian)計(ji)算樣品(pin)中(zhong)大鼠骨(gu)鈣(gai)素（OC）濃(nong)度。 

試劑盒組(zu)成(cheng) 
20倍(bei)濃(nong)縮洗(xi)滌(di)液 20ml×瓶(ping) 7 終止(zhi)液 3ml×瓶(ping)
2 酶標(biao)試劑 3ml×瓶(ping) 8 標(biao)準品(pin)（3200ng/L） 0.5ml×瓶(ping)
3 酶標(biao)包被板(ban) 2孔×4條(tiao) 9 標(biao)準品(pin)稀釋(shi)液 .5ml×瓶(ping)
4 樣品(pin)稀(xi)釋(shi)液 3ml×瓶(ping) 0 說明(ming)書 份(fen)
5 顯(xian)色(se)劑A液 3ml×瓶(ping) 封板(ban)膜 2張 
6 顯(xian)色(se)劑B液 3ml×/瓶(ping) 2 密封袋 個(ge)

大鼠骨(gu)鈣(gai)素OC標(biao)本要(yao)求 
．標(biao)本采(cai)集(ji)後(hou)盡(jin)早進(jin)行(xing)提(ti)取，提取按相關(guan)文(wen)獻(xian)進(jin)行(xing)，提(ti)取後應(ying)盡快(kuai)進(jin)行(xing)實(shi)驗。若(ruo)不(bu)能馬(ma)上(shang)進行(xing)試驗，可(ke)將(jiang)標(biao)本放於(yu)-20℃保(bao)存(cun)，但應避(bi)免反復(fu)凍(dong)融(rong)
2．不能檢測含NaN3的(de)樣品(pin)，因NaN3抑(yi)制辣根(gen)過氧(yang)化物(wu)酶的（HRP）活(huo)性(xing)。

操(cao)作步(bu)驟(zhou)
. 標(biao)準品(pin)的稀(xi)釋(shi)：本試劑盒提供原倍(bei)標(biao)準品(pin)壹支(zhi)，用戶可(ke)按照(zhao)下(xia)列(lie)圖(tu)表(biao)在小試管中進(jin)行(xing)稀(xi)釋(shi)。
600ng/L 5號(hao)標(biao)準品(pin) 50μl的原倍(bei)標(biao)準品(pin)加(jia)入(ru)50μl標(biao)準品(pin)稀釋(shi)液
800ng/L 4號(hao)標(biao)準品(pin) 50μl的5號(hao)標(biao)準品(pin)加(jia)入(ru)50μl標(biao)準品(pin)稀釋(shi)液
400ng/L 3號(hao)標(biao)準品(pin) 50μl的4號(hao)標(biao)準品(pin)加(jia)入(ru)50μl標(biao)準品(pin)稀釋(shi)液
200ng/L 2號(hao)標(biao)準品(pin) 50μl的3號(hao)標(biao)準品(pin)加(jia)入(ru)50μl標(biao)準品(pin)稀釋(shi)液
00ng/L 號(hao)標(biao)準品(pin) 50μl的2號(hao)標(biao)準品(pin)加(jia)入(ru)50μl標(biao)準品(pin)稀釋(shi)液

2. 加(jia)樣：分(fen)別(bie)設空(kong)白孔(kong)（空(kong)白對(dui)照孔(kong)不加(jia)樣品(pin)及酶標(biao)試劑，其余(yu)各步(bu)操(cao)作相同）、標(biao)準孔(kong)、待測樣品(pin)孔(kong)。在(zai)酶標(biao)包被板(ban)上(shang)標(biao)準品(pin)準確(que)加(jia)樣50μl，待(dai)測樣品(pin)孔(kong)中(zhong)先加(jia)樣品(pin)稀(xi)釋(shi)液40μl，然後(hou)再(zai)加(jia)待(dai)測樣品(pin)0μl（樣品(pin)zui終(zhong)稀(xi)釋(shi)度為5倍(bei)）。加(jia)樣將(jiang)樣品(pin)加(jia)於(yu)酶標(biao)板(ban)孔底部(bu)，盡(jin)量不觸及孔(kong)壁，輕(qing)輕(qing)晃動(dong)混勻。
3. 溫(wen)育(yu)：用封板(ban)膜封板(ban)後置37℃溫(wen)育(yu)30分(fen)鐘(zhong)。 
4. 配液：將(jiang)20倍(bei)濃(nong)縮洗(xi)滌(di)液用蒸餾水20倍(bei)稀(xi)釋(shi)後備(bei)用
5. 洗(xi)滌(di)：小(xiao)心(xin)揭掉(diao)封板(ban)膜，棄(qi)去液體(ti)，甩幹(gan)，每孔加(jia)滿洗(xi)滌(di)液，靜置30秒後棄(qi)去，如此(ci)重(zhong)復5次(ci)，拍幹(gan)。
6. 加(jia)酶：大鼠骨(gu)鈣(gai)素OC每孔加(jia)入(ru)酶標(biao)試劑50μl，空(kong)白孔(kong)除外。 
7. 溫(wen)育(yu)：操(cao)作同3。
8. 洗(xi)滌(di)：操(cao)作同5。
9. 顯(xian)色(se)：每孔先加(jia)入(ru)顯(xian)色(se)劑A50μl，再加(jia)入(ru)顯(xian)色(se)劑B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩混勻，37℃避(bi)光顯(xian)色(se)5分鐘(zhong).
0. 終止(zhi)：每孔加(jia)終(zhong)止(zhi)液50μl，終(zhong)止反應(ying)（此(ci)時(shi)藍色(se)立(li)轉(zhuan)黃(huang)色(se)）。
. 測定：以(yi)空(kong)白空(kong)調零，450nm波長依(yi)序(xu)測量各孔的(de)吸(xi)光度（OD值(zhi)）。 測定應(ying)在加(jia)終(zhong)止(zhi)液後(hou)5分鐘(zhong)以內進行(xing)。

操(cao)作程(cheng)序(xu)總(zong)結(jie)：

計算
以(yi)標(biao)準物(wu)的(de)濃(nong)度為橫坐(zuo)標(biao)，OD值(zhi)為縱坐(zuo)標(biao)，在坐(zuo)標(biao)紙(zhi)上(shang)繪出(chu)標(biao)準曲線(xian)，根(gen)據樣品(pin)的(de)OD值(zhi)由標(biao)準曲線(xian)查(zha)出(chu)相應的(de)濃度；再(zai)乘以稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)；或(huo)用標(biao)準物(wu)的(de)濃(nong)度與OD值(zhi)計(ji)算出(chu)標(biao)準曲線(xian)的(de)直線回歸(gui)方程(cheng)式(shi)，將(jiang)樣品(pin)的(de)OD值(zhi)代(dai)入(ru)方程(cheng)式(shi)，計(ji)算出(chu)樣品(pin)濃(nong)度，再(zai)乘以稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)，即為樣品(pin)的(de)實(shi)際(ji)濃(nong)度。 

大鼠骨(gu)鈣(gai)素OC註(zhu)意事項(xiang)
．試劑盒從冷(leng)藏(zang)環(huan)境(jing)中(zhong)取出(chu)應(ying)在室溫(wen)平(ping)衡5-30分鐘後(hou)方可(ke)使用，酶標(biao)包被板(ban)開(kai)封後(hou)如(ru)未用完(wan)，板(ban)條應(ying)裝(zhuang)入(ru)密封袋中(zhong)保(bao)存(cun)。
2．濃洗(xi)滌(di)液可(ke)能會有(you)結(jie)晶析出(chu)，稀(xi)釋(shi)時(shi)可(ke)在水浴中加(jia)溫(wen)助(zhu)溶，洗(xi)滌(di)時(shi)不影(ying)響(xiang)結(jie)果。
3．各步(bu)加(jia)樣均(jun)應(ying)使(shi)用加(jia)樣器(qi)，並(bing)經(jing)常校(xiao)對其(qi)準確性(xing)，以避(bi)免試驗誤(wu)差。壹次(ci)加(jia)樣時(shi)間控(kong)制在5分(fen)鐘(zhong)內，如標(biao)本數(shu)量多(duo)，使用排槍(qiang)加(jia)樣。
4．請每次測定的(de)同時(shi)做標(biao)準曲線(xian)，做復(fu)孔(kong)。如標(biao)本中(zhong)待測物(wu)質含(han)量過高（樣本(ben)OD值(zhi)大於(yu)標(biao)準品(pin)孔*孔(kong)的OD值(zhi)），請先用樣品(pin)稀(xi)釋(shi)液稀(xi)釋(shi)壹定(ding)倍(bei)數(shu)（n倍(bei)）後(hou)再測定，計(ji)算時(shi)請zui後乘以總(zong)稀釋(shi)倍(bei)數(shu)（×n×5）。
5．封板(ban)膜只限(xian)壹次(ci)性(xing)使用，以避(bi)免交叉(cha)汙(wu)染。
6．底物(wu)請避光(guang)保(bao)存(cun)。
7．嚴格(ge)按照(zhao)說明(ming)書的(de)操(cao)作進行(xing)，試驗結(jie)果判(pan)定必須以(yi)酶標(biao)儀讀(du)數(shu)為準.
8．所(suo)有(you)樣品(pin)，洗(xi)滌(di)液和(he)各種廢(fei)棄(qi)物(wu)都(dou)應(ying)按(an)傳染物(wu)處理(li)。
9．本(ben)試劑不同批(pi)號(hao)組(zu)分不(bu)得(de)混用。
0.如與英(ying)文(wen)說明(ming)書有(you)異(yi)，以英(ying)文(wen)說明(ming)書為準。