人(ren)Bcl-2相關(guan)X蛋白ELISA試(shi)劑盒(he)使(shi)用(yong)方(fang)法(fa)

人(ren)Bcl-2相關(guan)X蛋白ELISA試(shi)劑盒(he)使(shi)用(yong)方(fang)法(fa)

本人(ren)Bcl-2相關(guan)X蛋白試(shi)劑盒(he)僅供研(yan)究使(shi)用(yong)。

檢(jian)測(ce)範(fan)圍(wei)：48T

0.75μg/L -24μg/L

使(shi)用(yong)目(mu)的：

本人(ren)Bcl-2相關(guan)X蛋白試(shi)劑盒(he)用於測(ce)定人(ren)血(xue)清(qing)、血(xue)漿及相關(guan)液體樣本中(zhong)Bcl-2相(xiang)關X蛋白（BAX）含(han)量。

人(ren)Bcl-2相關(guan)X蛋白操(cao)作(zuo)步驟

.標準(zhun)品的稀釋：本試(shi)劑盒(he)提(ti)供原倍標準(zhun)品壹(yi)支(zhi)，用(yong)戶可(ke)按照(zhao)下列(lie)圖表(biao)在小(xiao)試(shi)管中(zhong)進(jin)行(xing)稀釋。

2.加(jia)樣：分(fen)別(bie)設空白孔(kong)（空白對(dui)照(zhao)孔(kong)不加(jia)樣品及酶(mei)標試(shi)劑，其(qi)余(yu)各(ge)步操(cao)作(zuo)相(xiang)同）、標準(zhun)孔(kong)、待測(ce)樣(yang)品(pin)孔(kong)。在酶(mei)標包(bao)被(bei)板上(shang)標準(zhun)品準(zhun)確加(jia)樣50μl，待測(ce)樣(yang)品(pin)孔(kong)中(zhong)先加(jia)樣品稀釋液40μl，然(ran)後再加(jia)待測(ce)樣(yang)品(pin)0μl（樣品zui終(zhong)稀釋度(du)為5倍）。加(jia)樣將樣(yang)品加(jia)於酶(mei)標板孔(kong)底部，盡量不觸(chu)及孔(kong)壁(bi)，輕(qing)輕晃動(dong)混勻。

3.溫育(yu)：用(yong)封(feng)板膜封(feng)板後置37℃溫(wen)育(yu)30分(fen)鐘(zhong)。  

4.配(pei)液：將20倍濃縮洗(xi)滌(di)液用蒸餾(liu)水20倍稀釋後備用(yong)

5.洗(xi)滌(di)：小(xiao)心(xin)揭掉封(feng)板膜，棄去液體，甩(shuai)幹(gan)，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗滌(di)液，靜(jing)置30秒後棄去，如此重(zhong)復(fu)5次(ci)，拍(pai)幹。

6.加(jia)酶(mei)：每孔(kong)加(jia)入酶(mei)標試(shi)劑50μl，空白孔(kong)除外。

7.溫育：操(cao)作(zuo)同3。

8.洗滌(di)：操(cao)作(zuo)同5。

9.顯色：每孔(kong)先加(jia)入顯色劑A50μl，再加(jia)入顯色劑B50μl，輕(qing)輕震(zhen)蕩(dang)混勻，37℃避光(guang)顯色5分(fen)鐘(zhong).

0.終(zhong)止：每(mei)孔(kong)加(jia)終(zhong)止液50μl，終(zhong)止反(fan)應(ying)（此時(shi)藍色立(li)轉(zhuan)黃色）。

.測(ce)定：以(yi)空白空調零，450nm波長依序測(ce)量各(ge)孔(kong)的吸光(guang)度（OD值(zhi)）。 測(ce)定應(ying)在加(jia)終(zhong)止液後5分(fen)鐘(zhong)以內(nei)進(jin)行(xing)。

人(ren)Bcl-2相關(guan)X蛋白操(cao)作(zuo)程(cheng)序(xu)總結：

.準備試(shi)劑，樣(yang)品和標準(zhun)品

2.加(jia)入準備好(hao)的樣品和標準(zhun)品，37℃反(fan)應30分(fen)鐘(zhong)

3.洗板5次(ci)，加(jia)入酶(mei)標試(shi)劑，37℃反(fan)應30分(fen)鐘(zhong)

4.洗板5次(ci)，加(jia)入顯色液A、B，37℃反應0分(fen)鐘(zhong)

5.加(jia)入終(zhong)止液

6.5分(fen)鐘(zhong)之(zhi)內(nei)度(du)OD值(zhi)

7.計算

計(ji)算

以(yi)標準(zhun)物的濃度為橫坐標，OD值(zhi)為縱(zong)坐(zuo)標，在坐(zuo)標紙上繪出(chu)標準(zhun)曲線，根據樣品(pin)的OD值由標準(zhun)曲線查出(chu)相應(ying)的濃度；再乘(cheng)以(yi)稀釋倍(bei)數；或用標準(zhun)物的濃度與(yu)OD值計(ji)算出(chu)標準(zhun)曲線的直線回歸方(fang)程式，將樣(yang)品的OD值代入方(fang)程式，計算出(chu)樣品濃度，再乘(cheng)以(yi)稀釋倍(bei)數，即為樣品的實際濃度。