人(ren)內(nei)皮素-（ET-）免疫(yi)試(shi)劑盒(he)使用說(shuo)明(ming)書(shu)

人(ren)內(nei)皮素-（ET-）免疫(yi)試(shi)劑盒(he)使用說(shuo)明(ming)書(shu)

本(ben)試(shi)劑盒(he)僅(jin)供(gong)研究(jiu)使(shi)用。

檢(jian)測(ce)範圍：96T

8pg/ml-200pg/ml

使用目(mu)的(de)：

本(ben)人(ren)內(nei)皮素ET-試劑盒(he)用於(yu)測定(ding)人(ren)血(xue)清(qing)、血(xue)漿(jiang)及(ji)相關液(ye)體(ti)樣本(ben)中(zhong)內皮(pi)素(su)-（ET-）含量。

實驗原理

本(ben)試(shi)劑盒(he)應用雙抗(kang)體夾(jia)心(xin)法測(ce)定(ding)標本(ben)中(zhong)人(ren)內(nei)皮素-（ET-）水平。用純化(hua)的人(ren)內(nei)皮素-（ET-）抗體(ti)包被微孔(kong)板(ban)，制成固(gu)相抗體(ti)，往(wang)包被單(dan)抗的(de)微(wei)孔(kong)中(zhong)依次加(jia)入內皮素(su)-（ET-），再(zai)與(yu)HRP標記的(de)內(nei)皮素-（ET-）抗(kang)體結(jie)合(he)，形(xing)成(cheng)抗體-抗原-酶標抗體(ti)復(fu)合物，經(jing)過*洗(xi)滌後加(jia)底物TMB顯(xian)色(se)。TMB在HRP酶的催化(hua)下轉(zhuan)化(hua)成藍(lan)色，並(bing)在酸(suan)的(de)作用下轉(zhuan)化(hua)成zui終(zhong)的黃(huang)色(se)。顏色(se)的(de)深淺(qian)和樣(yang)品中(zhong)的內(nei)皮(pi)素(su)-（ET-）呈(cheng)正相關。用酶標儀(yi)在450nm波(bo)長下測(ce)定(ding)吸光度（OD值），通過標準曲線計(ji)算(suan)樣(yang)品中(zhong)人(ren)內(nei)皮素-（ET-）濃度。

人(ren)內(nei)皮素ET-試劑盒(he)組成(cheng)

標本(ben)要(yao)求(qiu)

．標本(ben)采(cai)集後盡(jin)早(zao)進(jin)行(xing)提取(qu)，提取(qu)按(an)相關文獻進(jin)行(xing)，提取(qu)後(hou)應盡快(kuai)進(jin)行實驗。若不(bu)能(neng)馬上進行試(shi)驗，可將(jiang)標本(ben)放(fang)於(yu)-20℃保存，但(dan)應(ying)避免反復(fu)凍(dong)融

2．不(bu)能(neng)檢(jian)測(ce)含NaN3的樣(yang)品，因NaN3抑(yi)制辣根(gen)過氧化(hua)物酶(mei)的(de)（HRP）活(huo)性(xing)。

操作步(bu)驟(zhou)

.標準品的(de)稀(xi)釋(shi)：本(ben)人(ren)內(nei)皮素ET-試劑盒(he)提供(gong)原倍(bei)標準品壹支，用戶可(ke)按(an)照(zhao)下(xia)列(lie)圖表(biao)在(zai)小(xiao)試(shi)管中(zhong)進行(xing)稀(xi)釋(shi)。

2.加(jia)樣：分別設空白孔（空(kong)白對照(zhao)孔(kong)不(bu)加(jia)樣品及(ji)酶標試劑，其余(yu)各(ge)步操作相同）、標準孔、待(dai)測樣(yang)品(pin)孔。在(zai)酶(mei)標包被板上(shang)標準品準確(que)加(jia)樣50μl，待(dai)測樣(yang)品(pin)孔中(zhong)先加(jia)樣品稀(xi)釋(shi)液(ye)40μl，然(ran)後(hou)再(zai)加(jia)待(dai)測樣(yang)品(pin)0μl（樣品(pin)zui終(zhong)稀(xi)釋(shi)度(du)為5倍(bei)）。加(jia)樣將(jiang)樣品(pin)加(jia)於(yu)酶標板孔(kong)底(di)部，盡量(liang)不(bu)觸及(ji)孔壁，輕輕(qing)晃(huang)動(dong)混(hun)勻。

3.溫育(yu)：用封(feng)板膜封(feng)板後(hou)置(zhi)37℃溫(wen)育30分鐘(zhong)。  

4.配(pei)液：將(jiang)30倍(bei)濃縮洗(xi)滌液用蒸(zheng)餾水30倍(bei)稀(xi)釋(shi)後(hou)備用

5.洗(xi)滌：小(xiao)心(xin)揭(jie)掉(diao)封(feng)板膜，棄(qi)去(qu)液(ye)體(ti)，甩幹，每(mei)孔(kong)加(jia)滿(man)洗(xi)滌液，靜置30秒後棄(qi)去，如此重(zhong)復(fu)5次，拍幹(gan)。

6.加(jia)酶：人(ren)內(nei)皮素ET-每(mei)孔(kong)加(jia)入酶標試劑50μl，空(kong)白孔除(chu)外。

7.溫(wen)育：操作同(tong)3。

8.洗(xi)滌：操作同(tong)5。

9.顯(xian)色(se)：每(mei)孔(kong)先(xian)加(jia)入顯(xian)色(se)劑A50μl，再(zai)加(jia)入顯(xian)色(se)劑B50μl，輕(qing)輕震(zhen)蕩(dang)混(hun)勻，37℃避光(guang)顯(xian)色(se)5分鐘(zhong).

0.終(zhong)止：每(mei)孔(kong)加(jia)終止液50μl，終(zhong)止反應(ying)（此(ci)時(shi)藍(lan)色(se)立(li)轉(zhuan)黃(huang)色(se)）。

.測定(ding)：以(yi)空(kong)白空調零，450nm波(bo)長依序測(ce)量各(ge)孔的吸光度（OD值）。 測(ce)定(ding)應在(zai)加(jia)終止液後(hou)5分鐘(zhong)以(yi)內(nei)進行(xing)。

計(ji)算(suan)

以(yi)標準物的(de)濃度為橫(heng)坐標，OD值為縱(zong)坐標，在坐標紙上(shang)繪(hui)出(chu)標準曲線，根(gen)據樣(yang)品(pin)的OD值(zhi)由標準曲線查(zha)出(chu)相應的(de)濃度；再(zai)乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數；或(huo)用標準物的(de)濃度與(yu)OD值(zhi)計(ji)算(suan)出(chu)標準曲線的(de)直(zhi)線回(hui)歸(gui)方程(cheng)式，將(jiang)樣品(pin)的(de)OD值(zhi)代(dai)入方程(cheng)式，計(ji)算(suan)出(chu)樣(yang)品(pin)濃度，再(zai)乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數，即(ji)為樣(yang)品(pin)的實際濃度。

註(zhu)意(yi)事項

．人(ren)內(nei)皮素ET-試劑盒(he)從冷(leng)藏(zang)環(huan)境中(zhong)取(qu)出(chu)應(ying)在(zai)室(shi)溫平衡5-30分鐘(zhong)後(hou)方可使用，酶標包被板開(kai)封(feng)後如未用完，板(ban)條應(ying)裝入密(mi)封(feng)袋(dai)中(zhong)保存。

2．濃洗(xi)滌液可(ke)能(neng)會有(you)結(jie)晶析(xi)出(chu)，稀(xi)釋(shi)時(shi)可(ke)在(zai)水浴(yu)中(zhong)加(jia)溫助(zhu)溶，洗(xi)滌時(shi)不(bu)影響(xiang)結(jie)果。

3．各(ge)步加(jia)樣均(jun)應使(shi)用加(jia)樣器，並經(jing)常(chang)校對其準確(que)性，以(yi)避(bi)免試(shi)驗誤差(cha)。壹次加(jia)樣時(shi)間(jian)控(kong)制在5分鐘(zhong)內(nei)，如標本(ben)數量(liang)多(duo)，使用排(pai)槍加(jia)樣。

4．請每(mei)次測定(ding)的同(tong)時(shi)做(zuo)標準曲線，做(zuo)復孔(kong)。如標本(ben)中(zhong)待(dai)測物質(zhi)含量過高（樣(yang)本(ben)OD值(zhi)大於(yu)標準品孔(kong)*孔的(de)OD值(zhi)），請(qing)先(xian)用樣品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)稀(xi)釋(shi)壹定(ding)倍(bei)數（n倍(bei)）後(hou)再測(ce)定(ding)，計(ji)算(suan)時(shi)請(qing)zui後(hou)乘(cheng)以(yi)總(zong)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數（×n×5）。

5．封(feng)板膜只限(xian)壹次性使(shi)用，以(yi)避(bi)免交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)。

6．底(di)物請(qing)避(bi)光保存。

7．嚴(yan)格按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)的(de)操作進(jin)行(xing)，試驗結(jie)果判定(ding)必(bi)須(xu)以(yi)酶(mei)標儀(yi)讀數為準.

8．所(suo)有(you)樣品(pin)，洗(xi)滌液和(he)各(ge)種廢(fei)棄物都(dou)應(ying)按(an)傳染物處(chu)理(li)。

9．本(ben)試(shi)劑不(bu)同(tong)批(pi)號(hao)組分不(bu)得混(hun)用。

0.如與(yu)英(ying)文說(shuo)明(ming)書(shu)有(you)異，以(yi)英(ying)文說(shuo)明(ming)書(shu)為準。

保存條件及(ji)有(you)效期(qi)

．試(shi)劑盒(he)保存：；2-8℃。

2．有(you)效期(qi)：6個(ge)月(yue)