小鼠(shu)8-羥(qiang)基脫氧（8-OHdG）試劑盒說(shuo)明(ming)

小(xiao)鼠(shu)8-羥(qiang)基脫氧（8-OHdG）試劑盒說(shuo)明(ming)

本試劑僅供(gong)研究使用      標(biao)本：血清(qing)或(huo)血(xue)漿

試驗原理(li)：
小鼠(shu)8-羥(qiang)基脫氧8-OHdG試劑盒是(shi)固(gu)相(xiang)夾心法酶聯(lian)免疫(yi)吸(xi)附(fu)實(shi)驗(yan)（ELISA）.已知(zhi)8-OHdG濃(nong)度的(de)標(biao)準品(pin)、未知(zhi)濃(nong)度的(de)樣品(pin)加(jia)入微(wei)孔(kong)酶標(biao)板內(nei)進(jin)行(xing)檢(jian)測。先(xian)將8-OHdG和(he)標(biao)記的(de)抗(kang)體(ti)同時溫育。洗滌(di)後，加入親和素(su)標(biao)記過(guo)的(de)HRP。再(zai)經(jing)過(guo)溫(wen)育和洗滌(di)，去(qu)除未結(jie)合(he)的(de)酶(mei)結(jie)合物，然(ran)後加入底物A、B，和酶(mei)結合物(wu)同時作(zuo)用(yong)。產(chan)生(sheng)顏(yan)色(se)。顏(yan)色(se)的(de)深淺(qian)和樣品(pin)中8-OHdG的(de)濃(nong)度呈比(bi)例(li)關系。

試劑盒內(nei)容及其配(pei)制
試劑盒成份（2-8℃保存） 96孔(kong)配(pei)置(zhi) 48孔(kong)配(pei)置(zhi) 配(pei)制
96/48人(ren)份(fen)酶標(biao)板 塊板(ban)（96T） 半(ban)塊板(ban)（48T） 即(ji)用型(xing)
小(xiao)鼠8-羥(qiang)基脫氧8-OHdG塑料膜(mo)板(ban)蓋 塊 半(ban)塊 即(ji)用(yong)型(xing)
標(biao)準品(pin)：80ng/ml 瓶(ping)（0.6ml） 瓶（0.3ml） 按(an)說(shuo)明(ming)書進(jin)行(xing)稀稀
空白(bai)對照(zhao) 瓶（.0ml） 瓶(ping)（0.5ml） 即(ji)用型(xing)
標(biao)準品(pin)稀釋緩(huan)沖液(ye) 瓶（5ml） 瓶(ping)（2.5ml） 即(ji)用(yong)型(xing)
標(biao)記的(de)抗(kang)8-OHdG抗(kang)體 瓶（6ml） 瓶(ping)（3.0ml） 即(ji)用型(xing)
親和鏈(lian)酶(mei)素(su)-HRP 瓶(ping)（0ml） 瓶(ping)（5.0ml） 即(ji)用型(xing)
洗(xi)滌(di)緩(huan)沖液(ye) 瓶（20ml） 瓶(ping)（0ml） 按(an)說(shuo)明(ming)書進(jin)行(xing)稀釋
底物A 瓶（6.0ml） 瓶(ping)（3.0ml） 即用型(xing)
底物B 瓶（6.0ml） 瓶(ping)（3.0ml） 即用型(xing)
終止(zhi)液(ye) 瓶(ping)（6.0ml） 瓶(ping)（3.0ml） 即(ji)用型(xing)
標(biao)本稀釋液 瓶（2ml） 瓶(ping)（6.0ml） 即(ji)用(yong)型(xing)

自備材(cai)料
蒸(zheng)餾水。
加樣器：5ul、0ul、50ul、00ul、200ul、500ul、000ul。
振(zhen)蕩(dang)器及磁力(li)攪拌(ban)器等(deng)。

小鼠(shu)8-羥(qiang)基脫氧8-OHdG安全性
避免直接接觸(chu)終止(zhi)液(ye)和(he)底物A、B。壹旦(dan)接觸(chu)到(dao)這(zhe)些(xie)液體(ti)，請盡快(kuai)用(yong)水沖洗(xi)。
實(shi)驗(yan)中不(bu)要(yao)吃(chi)喝(he)、抽煙或使用化(hua)妝(zhuang)品(pin)。
不(bu)要用(yong)嘴(zui)吸(xi)取試劑盒裏的(de)任(ren)何(he)成(cheng)份(fen)。

操作(zuo)註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)
試劑應(ying)按(an)標(biao)簽說(shuo)明(ming)書儲(chu)存(cun)，使用前恢復(fu)到室(shi)溫。稀稀過(guo)後的(de)標(biao)準品(pin)應(ying)丟(diu)棄(qi)，不(bu)可保存。
實(shi)驗(yan)中不(bu)用(yong)的(de)板(ban)條應(ying)立(li)即放(fang)回(hui)包(bao)裝(zhuang)袋(dai)中，密封(feng)保存，以(yi)免(mian)變(bian)質(zhi)。
不用的(de)其(qi)它試劑應(ying)包(bao)裝(zhuang)好或蓋好(hao)。不(bu)同(tong)批號的(de)試劑不(bu)要混用。保質前使用。
使用壹次性的(de)吸(xi)頭以免(mian)交叉(cha)汙染，吸(xi)取終止(zhi)液(ye)和(he)底物A、B液時，避免使用帶(dai)金屬(shu)部(bu)分(fen)的(de)加(jia)樣器。
使用幹(gan)凈的(de)塑料容(rong)器配(pei)置(zhi)洗(xi)滌(di)液(ye)。使用前充(chong)分(fen)混勻試劑盒裏的(de)各種(zhong)成(cheng)份及樣品(pin)。
洗(xi)滌(di)酶(mei)標(biao)板時應充(chong)分(fen)拍(pai)幹，不(bu)要將吸(xi)水紙直(zhi)接放(fang)入酶標(biao)反(fan)應(ying)孔(kong)中吸(xi)水。
底物A應揮(hui)發(fa)，避免長時間打開蓋(gai)子。底物B對光敏感(gan)，避免長時間暴(bao)露(lu)於光(guang)下。避免用手(shou)接觸(chu)，有(you)毒。實(shi)驗(yan)完(wan)成(cheng)後應立(li)即讀(du)取OD值(zhi)。
加(jia)入試劑的(de)順(shun)序應壹致(zhi)，以(yi)保證所有反(fan)應(ying)板孔(kong)溫育的(de)時間壹樣。
按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書中標(biao)明(ming)的(de)時間、加(jia)液的(de)量(liang)及順(shun)序進(jin)行(xing)溫(wen)育操作(zuo)。

小(xiao)鼠8-羥(qiang)基脫氧8-OHdG樣品(pin)收(shou)集、處(chu)理(li)及保存方(fang)法
血清(qing)-----操作(zuo)過(guo)程(cheng)中避免任(ren)何(he)細(xi)胞(bao)刺激。使用不(bu)含(han)熱原和內(nei)毒素(su)的(de)試管。收集(ji)血液(ye)後，000×g離心0分(fen)鐘(zhong)將血(xue)清(qing)和(he)紅(hong)細胞(bao)迅速小(xiao)心地(di)分離(li)。
血漿-----EDTA、檸(ning)檬(meng)酸(suan)鹽、肝(gan)素(su)血(xue)漿可(ke)用於檢(jian)測。000×g離(li)心30分(fen)鐘(zhong)去(qu)除顆(ke)粒。
細(xi)胞(bao)上(shang)清(qing)液(ye)---000×g離(li)心0分(fen)鐘(zhong)去(qu)除顆(ke)粒和(he)聚(ju)合物。
組(zu)織勻(yun)漿-----將(jiang)組(zu)織加(jia)入適(shi)量(liang)生(sheng)理(li)鹽水搗(dao)碎(sui)。000×g離(li)心0分(fen)鐘(zhong)，取上(shang)清(qing)液(ye)
保存------如果樣品(pin)不(bu)立(li)即使用，應(ying)將其(qi)分成(cheng)小(xiao)部(bu)分(fen)-70 ℃保存，避免反(fan)復(fu)冷凍(dong)。盡可能的(de)不(bu)要(yao)使用溶(rong)血或(huo)高血脂(zhi)血(xue)。如果血(xue)清(qing)中大(da)量(liang)顆(ke)粒，檢(jian)測前先(xian)離心或(huo)過(guo)濾(lv)。不要在37℃或(huo)更(geng)高的(de)溫(wen)度(du)加熱解凍(dong)。應(ying)在室(shi)溫(wen)下解(jie)凍並確保樣品(pin)均(jun)勻(yun)地(di)充(chong)分(fen)解(jie)凍。

試劑的(de)準(zhun)備(bei)
標(biao)準品(pin)：小(xiao)鼠8-羥(qiang)基脫氧8-OHdG標(biao)準品(pin)的(de)系列(lie)稀釋應在實(shi)驗(yan)時準備(bei)，不能儲(chu)存(cun)。稀釋前將標(biao)準品(pin)振(zhen)蕩(dang)混勻。稀釋比(bi)例(li)按(an)下(xia)表中進(jin)行(xing)：
80 ng/ml （6號標(biao)準品(pin)） 原倍濃(nong)度不(bu)用(yong)稀釋直接加(jia)入(ru)50ul。
40 ng/ml （5號標(biao)準品(pin)） 00ul的(de)原倍標(biao)準品(pin)加(jia)入00ul的(de)標(biao)準品(pin)稀釋液
20 ng/ml （4號標(biao)準品(pin)） 00ul的(de)5號標(biao)準品(pin)加(jia)入00ul的(de)標(biao)準品(pin)稀釋液
0 ng/ml （3號標(biao)準品(pin)） 00ul的(de)4號標(biao)準品(pin)加(jia)入00ul的(de)標(biao)準品(pin)稀釋液
5.0 ng/ml （2號標(biao)準品(pin)） 00ul的(de)3號標(biao)準品(pin)加(jia)入00ul的(de)標(biao)準品(pin)稀釋液
2.5 ng/ml （號標(biao)準品(pin)） 00ul的(de)2號標(biao)準品(pin)加(jia)入00ul的(de)標(biao)準品(pin)稀釋液
0 ng/ml （空白(bai)對照(zhao)） 原始濃(nong)度不(bu)用(yong)稀釋直接加(jia)入(ru)50ul。

洗(xi)滌(di)緩(huan)沖液(ye)（50×）的(de)稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作(zuo)步(bu)驟
小鼠(shu)8-羥(qiang)基脫氧8-OHdG使用前，將所有試劑充(chong)分(fen)混勻。不(bu)要(yao)使液體(ti)產(chan)生(sheng)大量(liang)的(de)泡(pao)沫(mo)，以免(mian)加(jia)樣時加入(ru)大量(liang)的(de)氣(qi)泡，產(chan)生(sheng)加樣上(shang)的(de)誤差。
根(gen)據(ju)待測樣品(pin)數量(liang)加(jia)上(shang)標(biao)準品(pin)的(de)數量(liang)決(jue)定所需(xu)的(de)板(ban)條數。每(mei)個標(biao)準品(pin)和(he)空白(bai)孔(kong)建(jian)議做復(fu)孔(kong)。每(mei)個樣品(pin)根(gen)據(ju)自己的(de)數量(liang)來(lai)定(ding)，能使用復(fu)孔(kong)的(de)盡量(liang)做(zuo)復(fu)孔(kong)。標(biao)本用標(biao)本稀釋液：稀釋後加入50ul於反(fan)應(ying)孔(kong)內(nei)。
加入(ru)稀釋好後的(de)標(biao)準品(pin)50ul於反(fan)應(ying)孔(kong)、加入待測樣品(pin)50ul於反(fan)應(ying)孔(kong)內(nei)。立(li)即加入(ru)50ul的(de)標(biao)記的(de)抗(kang)體(ti)。蓋上(shang)膜(mo)板(ban)，輕輕振蕩(dang)混勻，37℃溫(wen)育小時。
甩去(qu)孔(kong)內(nei)液體(ti)，每(mei)孔(kong)加滿(man)洗滌(di)液(ye)，振(zhen)蕩(dang)30秒(miao)，甩去(qu)洗滌(di)液(ye)，用(yong)吸(xi)水紙拍(pai)幹(gan)。重復(fu)此(ci)操作(zuo)3次。如果用(yong)洗(xi)板機(ji)洗滌(di)，洗(xi)滌(di)次數增加壹次。
每(mei)孔(kong)加入80ul的(de)親和鏈(lian)酶(mei)素(su)-HRP，輕輕振蕩(dang)混勻，37℃溫(wen)育30分鐘(zhong)。
甩去(qu)孔(kong)內(nei)液體(ti)，每(mei)孔(kong)加滿(man)洗滌(di)液(ye)，振(zhen)蕩(dang)30秒(miao)，甩去(qu)洗滌(di)液(ye)，用(yong)吸(xi)水紙拍(pai)幹(gan)。重復(fu)此(ci)操作(zuo)3次。如果用(yong)洗(xi)板機(ji)洗滌(di)，洗(xi)滌(di)次數增加壹次。
每(mei)孔(kong)加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩(dang)混勻，37℃溫(wen)育0分鐘(zhong)。避免光照(zhao)。
取出(chu)酶標(biao)板，迅(xun)速加(jia)入(ru)50ul終止(zhi)液(ye)，加(jia)入(ru)終止(zhi)液(ye)後應立(li)即測定(ding)結(jie)果。
在450nm波(bo)長(chang)處(chu)測定(ding)各孔(kong)的(de)OD值(zhi)。

試劑盒性能
. 靈(ling)敏度(du)：zui小的(de)檢(jian)測濃(nong)度小(xiao)於號標(biao)準品(pin)。稀釋度的(de)線(xian)性。樣品(pin)線(xian)性回(hui)歸(gui)與(yu)預(yu)期濃(nong)度相(xiang)關(guan)系數R值(zhi)為(wei)0.990。
2. 特(te)異(yi)性：不與(yu)其(qi)它細(xi)胞(bao)因子反(fan)應(ying)。
3. 重復(fu)性：板內(nei)、板間變(bian)異(yi)系數均(jun)小(xiao)於0%。

結(jie) 果 判 斷 與(yu) 分(fen) 析
、儀(yi)器值(zhi)：於波(bo)長450nm的(de)酶(mei)標(biao)儀上(shang)讀(du)取各孔(kong)的(de)OD值(zhi)

2、以(yi)吸(xi)光(guang)度(du)OD值(zhi)為(wei)縱(zong)坐(zuo)標(biao)（Y），相應(ying)的(de)8-OHdG標(biao)準品(pin)濃(nong)度為(wei)橫(heng)坐(zuo)標(biao)（X），做得(de)相(xiang)應(ying)的(de)曲(qu)線(xian)，樣品(pin)的(de)8-OHdG含(han)量(liang)可(ke)根(gen)據(ju)其OD值(zhi)由標(biao)準曲(qu)線(xian)換(huan)算出(chu)相應(ying)的(de)濃(nong)度。

3、檢(jian)測值(zhi)範(fan)圍(wei)：0-80ng/ml

4、敏感(gan)度： 0. ng/ml