人白(bai)細(xi)胞(bao)介(jie)素(su)（IL-）試劑盒(he)實(shi)驗原理

人白(bai)細(xi)胞(bao)介(jie)素(su)（IL-）試劑盒(he)實(shi)驗原理

使用目的：本人白(bai)細(xi)胞(bao)介(jie)素(su)IL-試劑盒(he)用於測定人血(xue)清、血(xue)漿及(ji)相(xiang)關液體(ti)樣本中(zhong)白(bai)細(xi)胞(bao)介(jie)素(su)（IL-）含量。

實(shi)驗原理
本(ben)試劑盒(he)應用雙抗體夾心(xin)法(fa)測定標本(ben)中(zhong)人白(bai)細(xi)胞(bao)介(jie)素(su)IL-水平。用純(chun)化(hua)的人白(bai)細(xi)胞(bao)介(jie)素(su)（IL-）抗體包(bao)被(bei)微(wei)孔(kong)板(ban)，制(zhi)成固相(xiang)抗體，往包被(bei)單(dan)抗的微(wei)孔(kong)中(zhong)依(yi)次(ci)加入(ru)白(bai)細(xi)胞(bao)介(jie)素(su)（IL-），再與HRP 標(biao)記的白(bai)細(xi)胞(bao)介(jie)素(su)（IL-）抗體結合(he)，形(xing)成抗(kang)體-抗(kang)原-酶標(biao)抗(kang)體復合(he)物(wu)，經過*洗滌(di)後加底物(wu)TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化(hua)下轉化成(cheng)藍(lan)色(se)，並(bing)在酸的作(zuo)用下轉化成(cheng)zui終(zhong)的黃(huang)色。顏(yan)色的深淺和樣品中(zhong)的白(bai)細(xi)胞(bao)介(jie)素(su)（IL-）呈(cheng)正相(xiang)關。用酶標儀(yi)在450nm波(bo)長(chang)下測(ce)定吸光度（OD 值(zhi)），通(tong)過標準曲線(xian)計算樣(yang)品中(zhong)人白(bai)細(xi)胞(bao)介(jie)素(su)（IL-）濃度(du)。

人白(bai)細(xi)胞(bao)介(jie)素(su)IL-試劑盒(he)組成

30 倍濃縮(suo)洗滌(di)液20ml× 瓶7 終(zhong)止(zhi)液6ml× 瓶

2 酶(mei)標(biao)試劑6ml× 瓶8 標(biao)準(zhun)品（240 ng/L） 0.5ml× 瓶

3 酶(mei)標(biao)包(bao)被(bei)板(ban)2 孔×8 條(tiao)9 標準(zhun)品稀釋液.5ml× 瓶

4 樣(yang)品稀釋液6ml× 瓶0 說(shuo)明(ming)書(shu) 份(fen)

5 顯色劑A 液(ye)6ml× 瓶 封板(ban)膜2 張(zhang)

6 顯色劑B 液(ye)6ml×/瓶2 密封袋(dai) 個(ge)

標本要求(qiu)

．標(biao)本采集後盡早進(jin)行提取(qu)，提取(qu)按(an)相(xiang)關文獻(xian)進(jin)行，提取(qu)後應盡快(kuai)進(jin)行實(shi)驗。若不能(neng)馬上進(jin)行試驗，可(ke)將(jiang)標本(ben)放於-20℃保存(cun)，但(dan)應避(bi)免反(fan)復(fu)凍融

2．人白(bai)細(xi)胞(bao)介(jie)素(su)IL-不能(neng)檢測(ce)含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制(zhi)辣根(gen)過氧(yang)化(hua)物(wu)酶的（HRP）活性。

操作(zuo)步驟(zhou)

. 標(biao)準品的稀釋(shi)：本(ben)試劑盒(he)提(ti)供原倍標(biao)準(zhun)品壹(yi)支(zhi)，用戶可按(an)照下列圖(tu)表(biao)在小試管(guan)中(zhong)進(jin)行稀釋(shi)。

20 ng/L 5 號(hao)標準(zhun)品50μl 的原倍標(biao)準(zhun)品加入(ru)50μl 標準(zhun)品稀釋液

60 ng/L 4 號(hao)標準(zhun)品50μl 的5 號(hao)標準(zhun)品加入(ru)50μl 標準(zhun)品稀釋液

30 ng/L 3 號(hao)標準(zhun)品50μl 的4 號(hao)標準(zhun)品加入(ru)50μl 標準(zhun)品稀釋液

5 ng/L 2 號(hao)標準(zhun)品50μl 的3 號(hao)標準(zhun)品加入(ru)50μl 標準(zhun)品稀釋液

7.5 ng/L 號(hao)標準(zhun)品50μl 的2 號(hao)標準(zhun)品加入(ru)50μl 標準(zhun)品稀釋液

2. 加樣：分別(bie)設(she)空白(bai)孔(kong)（空(kong)白(bai)對(dui)照孔不加樣品及(ji)酶(mei)標(biao)試劑，其(qi)余(yu)各(ge)步操(cao)作(zuo)相(xiang)同）、標(biao)準孔(kong)、待(dai)測(ce)樣品孔。在酶標包(bao)被(bei)板(ban)上標準品準確加樣50μl，待(dai)測(ce)樣品孔中(zhong)先(xian)加樣品稀釋液40μl，然後再(zai)加待測(ce)樣(yang)品0μl（樣品zui終(zhong)稀釋(shi)度為5 倍(bei)）。加樣將(jiang)樣(yang)品加於酶(mei)標(biao)板(ban)孔底(di)部，盡量不觸及(ji)孔(kong)壁(bi)，輕輕晃(huang)動(dong)混勻(yun)。

3. 溫育(yu)：用封板(ban)膜封板(ban)後置(zhi)37℃溫育(yu)30 分鐘。

4. 配液(ye)：人白(bai)細(xi)胞(bao)介(jie)素(su)IL-將30 倍濃縮(suo)洗滌(di)液用蒸(zheng)餾(liu)水30 倍稀釋(shi)後備用

5. 洗滌(di)：小心(xin)揭(jie)掉封板(ban)膜，棄(qi)去液體，甩(shuai)幹(gan)，每孔(kong)加滿(man)洗(xi)滌(di)液，靜(jing)置30 秒(miao)後棄(qi)去，如此(ci)重復5 次(ci)，拍(pai)幹(gan)。

6. 加酶：每(mei)孔(kong)加入(ru)酶標(biao)試劑50μl，空(kong)白(bai)孔(kong)除外(wai)。

7. 溫育(yu)：操(cao)作(zuo)同3。

8. 洗(xi)滌(di)：操作(zuo)同5。

9. 顯色：每孔先加入(ru)顯色劑A50μl，再(zai)加入(ru)顯色劑B50μl，輕輕震(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，37℃避(bi)光顯色5 分鐘.

0.終(zhong)止(zhi)：每孔(kong)加終(zhong)止(zhi)液50μl，終(zhong)止(zhi)反應（此(ci)時(shi)藍色立(li)轉黃(huang)色）。

.測(ce)定：人白(bai)細(xi)胞(bao)介(jie)素(su)IL-以空(kong)白(bai)空(kong)調(tiao)零，450nm 波長(chang)依(yi)序(xu)測量各(ge)孔的吸光度（OD 值(zhi)）。測定應在(zai)加終(zhong)止(zhi)液後5 分鐘以內(nei)進(jin)行。

操作(zuo)程序(xu)總(zong)結：
計算
以標(biao)準(zhun)物(wu)的濃度(du)為橫坐(zuo)標，OD 值(zhi)為縱(zong)坐(zuo)標，在(zai)坐(zuo)標紙(zhi)上繪出(chu)標(biao)準曲線(xian)，根(gen)據(ju)樣(yang)品的OD 值由(you)標(biao)準曲線(xian)查(zha)出(chu)相(xiang)應的濃度(du)；再乘(cheng)以稀(xi)釋(shi)倍(bei)數；或用標準物(wu)的濃度(du)與OD 值(zhi)計算出(chu)標(biao)準曲線(xian)的直線(xian)回(hui)歸(gui)方程(cheng)式，將樣品的OD 值代(dai)入(ru)方程(cheng)式，計算出(chu)樣(yang)品濃度(du)，再乘(cheng)以稀(xi)釋(shi)倍(bei)數，即(ji)為樣(yang)品的實(shi)際(ji)濃度(du)。