人(ren)髓(sui)過(guo)氧化(hua)物酶(mei)（MPO）試(shi)劑盒操(cao)作步驟(zhou)

人髓(sui)過(guo)氧化(hua)物酶(mei)（MPO）試(shi)劑盒操(cao)作步驟(zhou)

人(ren)髓(sui)過(guo)氧化(hua)物酶(mei)MPO操(cao)作步驟(zhou)：
. 標(biao)準品的(de)稀釋與加(jia)樣(yang)：在酶(mei)標(biao)包被板上(shang)設標準品孔(kong)0孔(kong)，在*、第(di)二孔(kong)中分別(bie)加(jia)標準品00μl，然(ran)後(hou)在*、第(di)二孔(kong)中加(jia)標準品稀釋液50μl，混勻(yun)；然(ran)後(hou)從*孔(kong)、第二孔(kong)中各取(qu)00μl分別(bie)加(jia)到第(di)三(san)孔(kong)和第(di)四(si)孔(kong)，再(zai)在(zai)第(di)三(san)、第四(si)孔(kong)分別(bie)加(jia)標準品稀釋液50μl，混勻(yun)；然(ran)後(hou)在第(di)三(san)孔(kong)和第(di)四(si)孔(kong)中先(xian)各取(qu)50μl棄(qi)掉，再(zai)各取(qu)50μl分別(bie)加(jia)到第(di)五(wu)、第(di)六(liu)孔(kong)中，再(zai)在(zai)第(di)五(wu)、第(di)六(liu)孔(kong)中分別(bie)加(jia)標準品稀釋液50ul，混勻(yun)；混(hun)勻後(hou)從第(di)五(wu)、第(di)六(liu)孔(kong)中各取(qu)50μl分別(bie)加(jia)到第(di)七、第(di)八(ba)孔(kong)中，再(zai)在(zai)第(di)七、第(di)八(ba)孔(kong)中分別(bie)加(jia)標準品稀釋液50μl，混勻(yun)後(hou)從第(di)七、第(di)八(ba)孔(kong)中分別(bie)取(qu)50μl加到(dao)第(di)九、第(di)十孔(kong)中，再(zai)在(zai)第(di)九第(di)十孔(kong)分別(bie)加(jia)標準品稀釋液50μl，混勻(yun)後(hou)從第(di)九第(di)十孔(kong)中各取(qu)50μl棄(qi)掉。（稀(xi)釋後(hou)各孔(kong)加樣(yang)量都為(wei)50μl，濃(nong)度(du)分別(bie)為(wei)600U/L，400 U/L ，200 U/L，00 U/L，50 U/L）。
2. 加樣(yang)：分別(bie)設空白(bai)孔(kong)（空白(bai)對照(zhao)孔(kong)不加(jia)樣(yang)品及(ji)酶(mei)標(biao)試劑，其余(yu)各步操(cao)作相同(tong)）、待測樣(yang)品孔(kong)。在酶(mei)標(biao)包被板上(shang)待(dai)測樣(yang)品孔(kong)中先(xian)加樣(yang)品稀釋液40μl，然(ran)後(hou)再(zai)加(jia)待(dai)測樣(yang)品0μl（樣(yang)品zui終稀(xi)釋度(du)為(wei)5倍）。加(jia)樣(yang)將樣(yang)品加於酶(mei)標(biao)板孔(kong)底部，盡量不觸及(ji)孔(kong)壁，輕(qing)輕(qing)晃動(dong)混(hun)勻。
3. 溫(wen)育(yu)：用封(feng)板膜(mo)封(feng)板後(hou)置37℃溫(wen)育(yu)30分鐘。
4. 配液：將20倍濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌(di)液用蒸(zheng)餾水20倍稀(xi)釋後(hou)備用。
5. 洗(xi)滌(di)：小(xiao)心揭掉封(feng)板膜(mo)，棄(qi)去(qu)液體，甩幹，每孔(kong)加滿(man)洗滌(di)液，靜置30秒(miao)後(hou)棄(qi)去(qu)，如此重復5次(ci)，拍(pai)幹(gan)。
6. 加(jia)酶(mei)：每孔(kong)加入(ru)酶(mei)標(biao)試劑50μl，空白(bai)孔(kong)除(chu)外(wai)。
7. 溫(wen)育(yu)：操(cao)作同(tong)3。
8. 洗滌(di)：操(cao)作同(tong)5。
9. 顯色：每孔(kong)先加(jia)入顯色劑A50μl，再(zai)加(jia)入(ru)顯色(se)劑B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩混勻，37℃避(bi)光顯色(se)5分鐘. 
0.終止：每孔(kong)加終止液50μl，終止反應(ying)（此時藍(lan)色立轉黃色(se)）。
.測定：以(yi)空白(bai)空調零(ling)，450nm波(bo)長依序測量各孔(kong)的(de)吸(xi)光度(du)（OD值(zhi)）。 測定應(ying)在(zai)加終止液後(hou)5分鐘以(yi)內(nei)進(jin)行(xing)。

人(ren)髓(sui)過(guo)氧化(hua)物酶(mei)MPO樣(yang)本處理及(ji)要求(qiu)：
、血清(qing)：室(shi)溫(wen)血液自然(ran)凝固(gu)0-20分鐘，離心(xin)20分鐘左右(you)（2000-3000轉/分）。仔(zai)細(xi)收集(ji)上清(qing)，保存過(guo)程中如出現(xian)沈(chen)澱(dian)，應再(zai)次(ci)離(li)心(xin)。
2. 血漿(jiang)：應根據(ju)標本(ben)的(de)要求(qiu)選(xuan)擇EDTA或檸檬酸鈉作為(wei)抗(kang)凝劑，混合0-20分鐘後(hou)，離心(xin)20分鐘左右(you)（2000-3000轉/分）。仔(zai)細(xi)收集(ji)上清(qing)，保存過(guo)程中如有(you)沈(chen)澱(dian)形成，應該再(zai)次(ci)離(li)心(xin)。
3. 尿(niao)液：用無(wu)菌(jun)管收集(ji)，離心(xin)20分鐘左右(you)（2000-3000轉/分）。仔(zai)細(xi)收集(ji)上清(qing)，保存過(guo)程中如有(you)沈(chen)澱(dian)形成，應再(zai)次(ci)離(li)心(xin)。胸(xiong)腹水、腦脊(ji)液參照實(shi)行(xing)。
4. 細(xi)胞培養(yang)上清(qing)：檢(jian)測分泌(mi)性的(de)成份(fen)時(shi)，用(yong)無菌(jun)管(guan)收集(ji)。離心(xin)20分鐘左右(you)（2000-3000轉/分）。仔(zai)細(xi)收集(ji)上清(qing)。檢(jian)測細(xi)胞內(nei)的(de)成份(fen)時(shi)，用(yong)PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xi)胞懸液，細(xi)胞濃度(du)達(da)到(dao)00萬(wan)/ml左(zuo)右(you)。通過(guo)反復凍(dong)融(rong)，以(yi)使(shi)細(xi)胞破(po)壞並(bing)放(fang)出細(xi)胞內(nei)成(cheng)份(fen)。離心20分鐘左右(you)（2000-3000轉/分）。仔(zai)細(xi)收集(ji)上清(qing)。保存過(guo)程中如有(you)沈(chen)澱(dian)形成，應再(zai)次(ci)離(li)心(xin)。
5. 組織標(biao)本：切割(ge)標(biao)本後(hou)，稱取重(zhong)量。加入(ru)壹定量的(de)PBS，PH7.4。用液氮迅(xun)速(su)冷(leng)凍(dong)保存備用。標(biao)本(ben)融(rong)化(hua)後(hou)仍然(ran)保持(chi)2-8℃的(de)溫(wen)度(du)。加(jia)入(ru)壹定量的(de)PBS（PH7.4），用手(shou)工(gong)或(huo)勻漿(jiang)器將標(biao)本勻漿(jiang)充(chong)分。離(li)心(xin)20分鐘左右(you)（2000-3000轉/分）。仔(zai)細(xi)收集(ji)上清(qing)。分裝(zhuang)後(hou)壹份(fen)待(dai)檢(jian)測，其(qi)余冷(leng)凍(dong)備用。
6. 標(biao)本(ben)采(cai)集(ji)後(hou)盡早(zao)進(jin)行(xing)提(ti)取(qu)，提(ti)取(qu)按相關文獻進(jin)行(xing)，提(ti)取(qu)後(hou)應盡(jin)快進(jin)行(xing)實(shi)驗(yan)。若(ruo)不能(neng)馬上(shang)進行(xing)試(shi)驗(yan)，可將標(biao)本放於(yu)-20℃保存，但(dan)應避免(mian)反復凍(dong)融(rong).
7. 不能(neng)檢測含NaN3的(de)樣(yang)品，因NaN3抑(yi)制(zhi)辣(la)根過(guo)氧化(hua)物酶(mei)的(de)（HRP）活性。