人(ren)β澱粉樣(yang)蛋(dan)白(bai)-42（Ａβ-42）ELISA試劑(ji)盒(he)分析(xi)

人β澱粉樣(yang)蛋(dan)白(bai)-42(Ａβ-42)ELISA試劑(ji)盒(he)分析(xi)

本(ben)試劑(ji)僅(jin)供研(yan)究使(shi)用 標(biao)本(ben)：血清(qing)或血漿

試驗(yan)原理(li)：
人β澱粉樣(yang)蛋(dan)白(bai)Ａβ-42試劑(ji)盒(he)是(shi)固相夾心(xin)法酶(mei)聯免疫吸附實(shi)驗（ELISA）.已(yi)知Ａβ-42濃度(du)的(de)標(biao)準品、未知濃度(du)的(de)樣(yang)品加(jia)入(ru)微(wei)孔(kong)酶(mei)標(biao)板內進(jin)行(xing)檢測(ce)。先將(jiang)Ａβ-42和標(biao)記的抗體(ti)同(tong)時溫育(yu)。洗滌後，加入(ru)親和(he)素標(biao)記過(guo)的(de)HRP。再(zai)經(jing)過(guo)溫(wen)育(yu)和(he)洗滌，去除(chu)未結(jie)合(he)的酶(mei)結(jie)合(he)物(wu)，然後加入(ru)底(di)物(wu)A、B，和酶(mei)結(jie)合(he)物(wu)同時(shi)作(zuo)用。產(chan)生顏(yan)色(se)。顏色(se)的深淺(qian)和樣(yang)品中Ａβ-42的濃(nong)度(du)呈比(bi)例(li)關系。

自備(bei)材(cai)料
蒸(zheng)餾水(shui)。
加(jia)樣(yang)器：5ul、0ul、50ul、00ul、200、500ul、000ul。
振(zhen)蕩(dang)器(qi)及(ji)磁(ci)力(li)攪(jiao)拌(ban)器等。

安全性(xing)
避免直接(jie)接(jie)觸終(zhong)止液(ye)和(he)底(di)物(wu)A、B。壹旦接(jie)觸到(dao)這些(xie)液(ye)體(ti)，請盡(jin)快(kuai)用(yong)水(shui)沖(chong)洗。
實(shi)驗中不要(yao)吃喝、抽(chou)煙(yan)或使(shi)用化妝(zhuang)品。
不要(yao)用嘴(zui)吸取(qu)試劑(ji)盒(he)裏的(de)任(ren)何成份。

操作(zuo)註意事項(xiang)
試劑(ji)應按標(biao)簽說(shuo)明書儲存(cun)，使(shi)用前(qian)恢(hui)復(fu)到室溫(wen)。稀稀過(guo)後的標(biao)準品應丟(diu)棄(qi)，不可(ke)保存(cun)。
實(shi)驗中不用的板條應立(li)即放回包(bao)裝(zhuang)袋(dai)中，密封(feng)保存(cun)，以(yi)免變質。
不用的其(qi)它試劑(ji)應包(bao)裝(zhuang)好或蓋(gai)好。不同批號(hao)的試劑(ji)不要(yao)混用(yong)。保質前(qian)使(shi)用。
使(shi)用壹(yi)次(ci)性(xing)的吸頭(tou)以(yi)免交叉汙(wu)染(ran)，吸取(qu)終(zhong)止液(ye)和(he)底(di)物(wu)A、B液(ye)時(shi)，避免使(shi)用帶(dai)金屬部(bu)分的(de)加樣(yang)器。
使(shi)用幹(gan)凈的塑料容器配(pei)置洗滌液(ye)。使(shi)用前(qian)充(chong)分混勻試劑(ji)盒(he)裏的(de)各種成份及(ji)樣(yang)品。
洗滌酶(mei)標(biao)板時應充(chong)分拍幹，不要(yao)將(jiang)吸水(shui)紙(zhi)直接(jie)放入(ru)酶(mei)標(biao)反應孔(kong)中吸水(shui)。
底(di)物(wu)A應揮發(fa)，避免長時間(jian)打開蓋(gai)子(zi)。底(di)物(wu)B對光(guang)敏感，避免長時間(jian)暴(bao)露於光(guang)下(xia)。避免用手(shou)接(jie)觸，有毒(du)。實(shi)驗完(wan)成後應立(li)即讀(du)取(qu)OD值(zhi)。
加入(ru)試劑(ji)的(de)順序(xu)應壹(yi)致(zhi)，以保證(zheng)所(suo)有反應板孔溫育(yu)的時(shi)間(jian)壹(yi)樣(yang)。
按照(zhao)說明書中標(biao)明的時(shi)間(jian)、加液(ye)的(de)量及(ji)順(shun)序進(jin)行(xing)溫(wen)育操(cao)作(zuo)。

樣(yang)品收(shou)集(ji)、處(chu)理及(ji)保存(cun)方(fang)法
血清(qing)-----操(cao)作(zuo)過(guo)程中避免任(ren)何細胞(bao)刺激。使(shi)用不含熱原和(he)內毒(du)素(su)的(de)試管(guan)。收(shou)集(ji)血液(ye)後，000×g離心0分(fen)鐘(zhong)將(jiang)血清(qing)和(he)紅(hong)細胞(bao)迅速小心地(di)分(fen)離。
人β澱粉樣(yang)蛋(dan)白(bai)Ａβ-42血漿-----EDTA、檸(ning)檬酸鹽、肝素(su)血漿可(ke)用(yong)於檢測(ce)。000×g離心30分(fen)鐘(zhong)去除(chu)顆(ke)粒。
細胞(bao)上清液(ye)---000×g離心0分(fen)鐘(zhong)去除(chu)顆(ke)粒和(he)聚合物(wu)。
保存(cun)------如(ru)果樣(yang)品不立即使(shi)用，應將(jiang)其(qi)分成(cheng)小部分-70 ℃保存(cun)，避免反復(fu)冷凍。盡(jin)可(ke)能(neng)的不要(yao)使(shi)用溶(rong)血或高血脂血。如(ru)果血清(qing)中大量顆粒(li)，檢測(ce)前(qian)先離心或過(guo)濾(lv)。不要(yao)在37℃或更高的(de)溫度(du)加熱(re)解(jie)凍。應在(zai)室溫(wen)下(xia)解(jie)凍並確(que)保樣(yang)品均勻地(di)充(chong)分解(jie)凍。

試劑(ji)的(de)準備(bei)
標(biao)準品：標(biao)準品的(de)系列稀釋應在(zai)實(shi)驗時(shi)準備(bei)，不能(neng)儲存(cun)。稀釋前(qian)將(jiang)標(biao)準品振(zhen)蕩(dang)混勻。
洗滌緩沖(chong)液(ye)（50×）的(de)稀釋：蒸(zheng)餾水(shui)50倍(bei)稀釋。

操(cao)作(zuo)步驟(zhou)
使(shi)用前(qian)，將(jiang)所(suo)有試劑(ji)充(chong)分混勻。不要(yao)使(shi)液(ye)體(ti)產(chan)生大(da)量的泡(pao)沫(mo)，以免加樣(yang)時加(jia)入(ru)大量的氣(qi)泡(pao)，產(chan)生加(jia)樣(yang)上的(de)誤(wu)差(cha)。
根據(ju)待(dai)測(ce)樣(yang)品數(shu)量加上(shang)標(biao)準品的(de)數(shu)量決(jue)定所(suo)需的板條數(shu)。每個標(biao)準品和(he)空(kong)白(bai)孔建議做(zuo)復(fu)孔。每個樣(yang)品根據(ju)自(zi)己的數(shu)量來定，能(neng)使(shi)用復(fu)孔的盡(jin)量做(zuo)復(fu)孔。
加入(ru)稀釋好後的標(biao)準品50ul於反應孔(kong)、加入(ru)待測(ce)樣(yang)品50ul於反應孔(kong)內。立(li)即(ji)加(jia)入(ru)50ul的標(biao)記的抗體(ti)。蓋(gai)上膜(mo)板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育(yu)小時。
甩去孔內(nei)液(ye)體(ti)，每孔加(jia)滿洗滌液(ye)，振(zhen)蕩30秒(miao)，甩(shuai)去洗滌液(ye)，用(yong)吸水(shui)紙(zhi)拍幹。重復(fu)此操作(zuo)3次。如(ru)果用(yong)洗板機洗滌，洗滌次數(shu)增(zeng)加壹(yi)次。
每(mei)孔加入(ru)80ul的親(qin)和鏈酶(mei)素(su)-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育(yu)30分鐘(zhong)。
甩去孔內(nei)液(ye)體(ti)，每孔加(jia)滿洗滌液(ye)，振(zhen)蕩30秒(miao)，甩(shuai)去洗滌液(ye)，用(yong)吸水(shui)紙(zhi)拍幹。重復(fu)此操作(zuo)3次。如(ru)果用(yong)洗板機洗滌，洗滌次數(shu)增(zeng)加壹(yi)次。
每(mei)孔加入(ru)底(di)物(wu)A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育(yu)0分鐘(zhong)。避免光(guang)照(zhao)。
取(qu)出(chu)酶(mei)標(biao)板，迅速加入(ru)50ul終止液(ye)，加(jia)入(ru)終止液(ye)後應立(li)即測(ce)定結(jie)果。
在(zai)450nm波長處(chu)測(ce)定各孔(kong)的OD值(zhi)。

局限(xian)
6號(hao)標(biao)準品以(yi)上(shang)的結(jie)果為非(fei)線(xian)性(xing)的，根據(ju)此(ci)標(biao)準曲線(xian)無(wu)法得(de)到的(de)結(jie)果。

人(ren)β澱粉樣(yang)蛋(dan)白(bai)Ａβ-42試劑(ji)盒(he)性(xing)能(neng)
. 靈敏度：zui小的檢測(ce)濃度(du)小於號(hao)標(biao)準品。稀釋度(du)的線(xian)性(xing)。樣(yang)品線(xian)性(xing)回歸(gui)與預(yu)期(qi)濃度(du)相關系數(shu)R值為0.990。
2. 特(te)異(yi)性(xing)：不與人(ren)其(qi)它細胞(bao)因子(zi)反應。
3. 重復(fu)性(xing)：板內、板間變異(yi)系數(shu)均小於0%。

結(jie) 果 判(pan) 斷 與 分(fen) 析(xi)
、儀(yi)器值：於波(bo)長450nm的酶(mei)標(biao)儀(yi)上讀取(qu)各(ge)孔的(de)OD值(zhi)

2、以吸光(guang)度(du)OD值為縱(zong)坐標(biao)（Y），相應的(de)Ａβ-42標(biao)準品濃(nong)度(du)為橫坐(zuo)標(biao)（X），做(zuo)得(de)相應的(de)曲線(xian)，樣(yang)品的(de)Ａβ-42含(han)量可(ke)根據(ju)其(qi)OD值由(you)標(biao)準曲線(xian)換(huan)算(suan)出(chu)相應的(de)濃度(du)。

3、檢測(ce)值範(fan)圍：0-8.0ng/ml

4、敏感度(du)： 0.0 ng/ml