人抗磷脂抗體(ti)（APA）ELISA試(shi)劑(ji)盒操作(zuo)說明

人抗磷脂抗體(ti)（APA）ELISA試(shi)劑(ji)盒操作(zuo)說明

本(ben)試(shi)劑(ji)僅(jin)供(gong)研(yan)究使(shi)用  標本(ben)：血(xue)清(qing)或(huo)血(xue)漿 

試(shi)驗(yan)原(yuan)理(li)：
人抗磷脂抗體(ti)APA試(shi)劑(ji)盒是固(gu)相(xiang)夾心法(fa)酶(mei)聯免疫(yi)吸附實驗（ELISA）.已(yi)知APA濃(nong)度的標準(zhun)品(pin)、未知濃(nong)度的樣品加入微孔酶(mei)標板(ban)內(nei)進行檢(jian)測。先(xian)將APA和(he)標記(ji)的抗體(ti)同(tong)時溫(wen)育。洗(xi)滌後(hou)，加入(ru)親和(he)素標記(ji)過(guo)的HRP。再(zai)經(jing)過(guo)溫(wen)育和(he)洗(xi)滌，去(qu)除未結(jie)合(he)的酶(mei)結(jie)合(he)物(wu)，然(ran)後(hou)加入(ru)底物(wu)A、B，和酶(mei)結(jie)合(he)物(wu)同時(shi)作(zuo)用。產(chan)生(sheng)顏(yan)色(se)。顏(yan)色(se)的深(shen)淺和樣品中APA的濃(nong)度呈(cheng)比(bi)例(li)關系(xi)。

安全(quan)性
避免(mian)直接接觸終(zhong)止液和(he)底物(wu)A、B。壹旦接觸到(dao)這(zhe)些液體(ti)，請(qing)盡快(kuai)用水沖洗(xi)。
實驗中(zhong)不(bu)要(yao)吃喝(he)、抽煙或(huo)使(shi)用化妝品(pin)。
不要(yao)用嘴吸取試(shi)劑(ji)盒裏的任(ren)何(he)成份。

操(cao)作(zuo)註(zhu)意(yi)事項(xiang)
試(shi)劑(ji)應按(an)標簽(qian)說明書(shu)儲(chu)存(cun)，使用前恢復到室溫(wen)。稀(xi)稀(xi)過後(hou)的標準(zhun)品(pin)應丟(diu)棄(qi)，不可(ke)保(bao)存。
實驗中(zhong)不(bu)用的板(ban)條(tiao)應立即(ji)放回(hui)包裝(zhuang)袋(dai)中(zhong)，密(mi)封保(bao)存，以免(mian)變(bian)質。
不用的其(qi)它(ta)試(shi)劑(ji)應包(bao)裝好或(huo)蓋(gai)好。不(bu)同(tong)批號(hao)的試(shi)劑(ji)不要(yao)混用。保(bao)質前使(shi)用。
使用壹次性的吸頭以免(mian)交叉汙染(ran)，吸取終(zhong)止液和(he)底物(wu)A、B液時(shi)，避(bi)免(mian)使(shi)用帶(dai)金屬(shu)部(bu)分的加(jia)樣器。
使用幹凈(jing)的塑(su)料(liao)容器配置(zhi)洗(xi)滌液。使(shi)用前充(chong)分混(hun)勻(yun)試(shi)劑(ji)盒裏的各(ge)種(zhong)成份及(ji)樣品。
洗(xi)滌酶標板(ban)時(shi)應(ying)充(chong)分拍(pai)幹，不要(yao)將吸水紙(zhi)直接放入(ru)酶(mei)標反(fan)應(ying)孔中(zhong)吸水。
人抗磷脂抗體(ti)APA底物(wu)A應揮發，避(bi)免(mian)長(chang)時(shi)間(jian)打開蓋(gai)子。底物(wu)B對(dui)光(guang)敏感，避免(mian)長(chang)時(shi)間(jian)暴(bao)露於光下。避免(mian)用手接觸，有(you)毒(du)。實驗完成後(hou)應立即(ji)讀(du)取OD值(zhi)。
加(jia)入(ru)試(shi)劑(ji)的順(shun)序(xu)應(ying)壹致(zhi)，以保(bao)證所有(you)反(fan)應(ying)板(ban)孔(kong)溫(wen)育的時(shi)間(jian)壹樣。
按(an)照(zhao)說明書(shu)中標明的時(shi)間(jian)、加液的量(liang)及(ji)順(shun)序進行溫(wen)育操(cao)作(zuo)。

樣品收集、處理(li)及保(bao)存方(fang)法(fa)
血(xue)清(qing)-----操(cao)作(zuo)過(guo)程(cheng)中(zhong)避免任(ren)何(he)細(xi)胞刺(ci)激(ji)。使(shi)用不含熱(re)原和(he)內(nei)毒(du)素(su)的試(shi)管(guan)。收(shou)集(ji)血(xue)液後(hou)，000×g離(li)心0分鐘(zhong)將(jiang)血(xue)清(qing)和(he)紅(hong)細(xi)胞迅(xun)速小(xiao)心地(di)分離(li)。
血(xue)漿-----EDTA、檸(ning)檬(meng)酸鹽、肝(gan)素(su)血(xue)漿可(ke)用於檢測。000×g離(li)心30分鐘(zhong)去(qu)除顆粒。
細(xi)胞上清液---000×g離(li)心0分鐘(zhong)去(qu)除顆粒和(he)聚合(he)物(wu)。
組織(zhi)勻(yun)漿-----將(jiang)組(zu)織加(jia)入適量(liang)生理(li)鹽水(shui)搗(dao)碎。000×g離(li)心0分鐘(zhong)，取上清液
保(bao)存------如(ru)果樣品不立即(ji)使用，應將其分成(cheng)小(xiao)部(bu)分-70 ℃保(bao)存，避(bi)免反(fan)復冷(leng)凍(dong)。盡可(ke)能(neng)的不(bu)要(yao)使用溶血(xue)或(huo)高(gao)血(xue)脂血(xue)。如(ru)果血(xue)清(qing)中(zhong)大(da)量(liang)顆粒，檢(jian)測(ce)前先(xian)離(li)心或(huo)過(guo)濾。不要(yao)在(zai)37℃或(huo)更(geng)高(gao)的溫(wen)度(du)加(jia)熱解凍(dong)。應(ying)在(zai)室溫(wen)下解凍(dong)並確(que)保(bao)樣品均勻(yun)地(di)充(chong)分解(jie)凍(dong)。

操(cao)作(zuo)步(bu)驟
使(shi)用前，將所有(you)試(shi)劑(ji)充(chong)分混(hun)勻(yun)。不(bu)要(yao)使液體(ti)產(chan)生(sheng)大(da)量(liang)的泡(pao)沫(mo)，以免(mian)加(jia)樣時加入大(da)量(liang)的氣(qi)泡，產(chan)生(sheng)加樣上的誤差(cha)。
根(gen)據待(dai)測樣品數量加(jia)上標準(zhun)品(pin)的數(shu)量(liang)決(jue)定所需的板(ban)條(tiao)數。每(mei)個(ge)標準(zhun)品(pin)和空(kong)白孔(kong)建(jian)議(yi)做復孔(kong)。每(mei)個樣品根據自己的數(shu)量(liang)來(lai)定(ding)，能(neng)使用復孔的盡量(liang)做復孔(kong)。標本(ben)用標本(ben)稀(xi)釋液：稀(xi)釋後(hou)加入(ru)50ul於反(fan)應孔內(nei)。
加(jia)入(ru)稀(xi)釋好後(hou)的標準(zhun)品(pin)50ul於反(fan)應孔、加入待(dai)測樣品50ul於反應(ying)孔內(nei)。立即(ji)加入(ru)50ul的標記(ji)的抗體(ti)。蓋(gai)上膜板(ban)，輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，37℃溫(wen)育小(xiao)時。
甩(shuai)去(qu)孔內(nei)液體(ti)，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗(xi)滌液，振(zhen)蕩(dang)30秒(miao)，甩(shuai)去(qu)洗(xi)滌液，用吸水紙(zhi)拍(pai)幹。重(zhong)復此操作(zuo)3次(ci)。如(ru)果用洗(xi)板(ban)機洗(xi)滌，洗(xi)滌次數(shu)增加壹次。
人抗磷脂抗體(ti)APA每(mei)孔加(jia)入(ru)60ul的親(qin)和(he)鏈(lian)酶素(su)-HRP，輕輕(qing)振蕩混勻(yun)，37℃溫(wen)育30分鐘(zhong)。
甩(shuai)去(qu)孔內(nei)液體(ti)，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗(xi)滌液，振(zhen)蕩(dang)30秒(miao)，甩(shuai)去(qu)洗(xi)滌液，用吸水紙(zhi)拍(pai)幹。重(zhong)復此操作(zuo)3次(ci)。如(ru)果用洗(xi)板(ban)機洗(xi)滌，洗(xi)滌次數(shu)增加壹次。
每(mei)孔(kong)加入底物(wu)A、B各50ul，輕(qing)輕振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育0分鐘(zhong)。避(bi)免(mian)光(guang)照(zhao)。
取出酶(mei)標板(ban)，迅(xun)速加入50ul終(zhong)止液，加(jia)入(ru)終(zhong)止液後(hou)應立即(ji)測定(ding)結(jie)果。
在(zai)450nm波(bo)長(chang)處測定(ding)各(ge)孔的OD值(zhi)。

試(shi)劑(ji)盒性能(neng)
. 靈敏度：zui小(xiao)的檢(jian)測(ce)濃(nong)度小(xiao)於號(hao)標準(zhun)品(pin)。稀(xi)釋度的線性。樣品線性回(hui)歸與預(yu)期(qi)濃(nong)度相(xiang)關系數R值(zhi)為(wei)0.990。
2. 特異性：不與(yu)其它(ta)細(xi)胞因(yin)子反應(ying)。
3. 重(zhong)復性：板(ban)內(nei)、板(ban)間(jian)變異系(xi)數均小(xiao)於0%。

結(jie) 果 判(pan) 斷(duan) 與(yu) 分 析(xi)
、儀器值(zhi)：於(yu)波(bo)長(chang)450nm的酶(mei)標儀(yi)上讀(du)取各(ge)孔(kong)的OD值(zhi)

2、以吸光度(du)OD值(zhi)為(wei)縱(zong)坐(zuo)標（Y），相(xiang)應(ying)的APA標準(zhun)品(pin)濃(nong)度為(wei)橫坐(zuo)標（X），做得(de)相(xiang)應的曲(qu)線，樣品的APA含量(liang)可根(gen)據其(qi)OD值(zhi)由(you)標準(zhun)曲(qu)線換(huan)算(suan)出相(xiang)應(ying)的濃(nong)度。

3、檢(jian)測值(zhi)範圍：0-800IU/ml

4、敏感度： .0 IU/ml