牛(niu)血(xue)清在(zai)細(xi)胞(bao)培(pei)養中質(zhi)量檢(jian)查(zha)方(fang)法(fa)

檢查(zha)方(fang)法(fa)：
已(yi)證(zheng)明(ming)無外(wai)源(yuan)因(yin)子汙(wu)染的牛細胞(bao)培(pei)養(yang)物，在(zai)細(xi)胞(bao)生長(chang)液(ye)中(zhong)加(jia)5％待(dai)測血(xue)清，連(lian)傳(chuan)3代(dai)共2天(tian)。陰(yin)性對(dui)照(zhao)細(xi)胞(bao)培養(yang)液(ye)中(zhong)加(jia)5％已(yi)知(zhi)無(wu)病毒汙(wu)染的牛血(xue)清，與試(shi)驗組(zu)同條件(jian)下(xia)進行。在(zai)觀(guan)察(cha)期(qi)內(nei)註(zhu)意(yi)細(xi)胞(bao)形態(tai)變化(hua)或(huo)細胞(bao)病變。在(zai)觀(guan)察(cha)期(qi)內(nei)第(di)4天待(dai)檢(jian)樣(yang)品和對(dui)照(zhao)樣(yang)品(pin)用(yong)標(biao)準病毒檢(jian)測方(fang)法(fa)檢(jian)查(zha)。
如待檢細胞(bao)培養(yang)物經(jing)消(xiao)化(hua)後(hou)分(fen)種到6個(ge)含(han)蓋玻(bo)片的容器(qi)內(nei)。陰(yin)性(xing)對(dui)照(zhao)樣(yang)品(pin)按同樣方(fang)法(fa)。再將牛腹泄(xie)病毒、牛(niu)細(xi)小(xiao)病毒、牛(niu)腺(xian)病毒、狂犬病毒和(he)呼(hu)腸弧(hu)病毒分(fen)別(bie)加(jia)入待(dai)檢(jian)培(pei)養(yang)物蓋玻(bo)片容器(qi)內(nei)作(zuo)為(wei)陽(yang)性對(dui)照(zhao)，再培養7天，用(yong)熒(ying)光(guang)抗體技術進(jin)行檢查(zha)。
細胞病變或(huo)病毒引(yin)起(qi)的其(qi)他改(gai)變通(tong)過(guo)蘇木(mu)精(jing)或(huo)伊紅(hong)染色進行觀(guan)察(cha)。取另(ling)外(wai)壹(yi)個(ge)待檢(jian)細(xi)胞(bao)培養瓶(ping)用(yong)人(ren)“O"紅(hong)細(xi)胞、豚鼠(shu)紅(hong)細(xi)胞(bao)和(he)新鮮雞紅細胞(bao)作(zuo)血(xue)球(qiu)吸(xi)附病毒檢(jian)查(zha)。試(shi)驗在(zai)2～8℃和(he)20～24℃進(jin)行。陰性(xing)對(dui)照(zhao)細(xi)胞(bao)預先(xian)感(gan)染副(fu)流(liu)感(gan)Ⅲ型病毒作(zuo)為(wei)陽(yang)性對(dui)照(zhao)。未感染的細胞作(zuo)為(wei)陰性對(dui)照(zhao)。
3）內(nei)毒素(su)檢測
用(yong)鱟試(shi)劑(ji)檢(jian)查(zha)。
4）細菌噬菌體(ti)檢查(zha)
主要檢查(zha)E.Coli(C300 or K-2)噬菌體。
5）激(ji)素(su)含(han)量(liang)測定
每批FBS對(dui)某(mou)些激(ji)素(su)含(han)量(liang)都(dou)要進行測定，包(bao)括：雌(ci)二(er)醇(chun)、胰島(dao)素(su)、孕(yun)硐、睪(gao)丸素(su)、甲(jia)狀(zhuang)腺(xian)素(su)等(deng)。
6）血(xue)紅(hong)蛋白檢測
血(xue)紅(hong)蛋白與氧合血(xue)紅(hong)蛋白的比(bi)≥70％，血(xue)紅(hong)蛋白含(han)量(liang)≤mg5/dl。
7）細胞生果測定
a.細胞(bao)克(ke)隆(long)效果測定
細胞(bao)選擇(ze)：Sp20/Ag-4 或(huo)P3X63-Ag8.653
血(xue)清濃度(du)與細胞(bao)數:
0％血(xue)清／個(ge)細胞(bao)／孔
4％血(xue)清／5個(ge)細胞(bao)／孔
細胞(bao)培(pei)養基RPMI－640， 96孔培養(yang)盤(pan)36℃±2℃，5％二(er)氧(yang)化(hua)碳(tan)培(pei)養(yang)0～5天。試(shi)驗中選擇(ze)壹(yi)個(ge)已(yi)知(zhi)參(can)考(kao)牛血(xue)清作(zuo)對(dui)照(zhao)。
克(ke)隆(long)效率(lv)計(ji)算(suan)：
克(ke)隆(long)效率(lv)＝(陽(yang)性孔平均(jun)數/ 培養孔總數) X00％ 
相(xiang)對(dui)克(ke)隆(long)效率(lv)＝待(dai)測血(xue)清克(ke)隆(long)效率(lv)/參(can)考(kao)血(xue)清克(ke)隆(long)效率(lv)
b.貼壁效率(lv)試(shi)驗：
用(yong)人(ren)的(de)傳(chuan)代(dai)細胞作(zuo)每(mei)批血(xue)清的(de)貼壁效率(lv)試(shi)驗，A549（人肺癌(ai)細胞(bao)）該細(xi)胞(bao)可以反(fan)應(ying)出(chu)低濃度(du)血(xue)清的(de)貼壁變化(hua)。采(cai)用(yong)6孔培養(yang)盤(pan)每批血(xue)清用(yong)兩種濃度(du)和(he)兩種不(bu)同(tong)的(de)細(xi)胞(bao)接種數即0％血(xue)清――00細(xi)胞(bao)／孔，4％血(xue)清200介(jie)細(xi)胞(bao)／孔。放(fang)36℃±2℃，濕(shi)潤5％二(er)氧(yang)化(hua)碳(tan)培(pei)養(yang)箱(xiang)培養(yang)0～4天，計(ji)算(suan)著色細(xi)胞克(ke)隆，確定貼壁效率(lv)。從這兩種不(bu)同(tong)血(xue)清濃度(du)來確立實(shi)驗血(xue)清支(zhi)持細(xi)胞貼壁生長(chang)的(de)水(shui)平，分(fen)析兩種試(shi)驗條件(jian)下(xia)平均(jun)貼壁效率(lv)。
貼壁效率(lv)（％）＝(每(mei)孔克隆(long)平均(jun)數/ 每孔活存(cun)的培(pei)養細胞平均(jun)數) X00％
相(xiang)對(dui)貼壁效率(lv)＝被(bei)測血(xue)清貼壁效率(lv)/參(can)考(kao)血(xue)清貼壁效率(lv)
c. 二(er)倍(bei)體(ti)纖維細(xi)胞促(cu)生長(chang)試(shi)驗
株    WI28     MRc5
25cm2細胞培養(yang)瓶(ping)，5％血(xue)清，每(mei)瓶(ping)接種(zhong).5X05細胞連(lian)傳(chuan)3代(dai)，每代(dai)血(xue)清濃度(du)和(he)接(jie)種(zhong)細胞數相(xiang)同(tong)，每代(dai)培養7天，每(mei)代(dai)接種二(er)個(ge)細胞(bao)瓶(ping)，36℃±2℃培(pei)養。以同(tong)樣條件(jian)用(yong)已(yi)知(zhi)參(can)考(kao)血(xue)清進(jin)行平行培養(yang)。每代(dai)收獲細(xi)胞計數，計算(suan)每(mei)批待(dai)檢血(xue)清與參考(kao)血(xue)清的(de)相(xiang)對(dui)生長(chang)率(lv)（RGR）。
RGR＝(試(shi)驗血(xue)清每(mei)瓶(ping)細胞(bao)平均(jun)數/ 參考血(xue)清每(mei)瓶(ping)細胞(bao)平均(jun)數) X00％
牛血(xue)清主要質量(liang)要求(qiu)（Sigma）