ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)的(de)雙(shuang)抗體(ti)夾(jia)心法(fa)

用於檢測(ce)未(wei)知抗原(yuan)的雙抗體(ti)夾(jia)心法(fa):ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)

.　包(bao)被(bei)：用0.05MPH9.牰碳酸鹽(yan)包(bao)被(bei)緩沖液(ye)將(jiang)抗體(ti)稀(xi)釋至蛋(dan)白質(zhi)含量為(wei)～0μg/ml。在每(mei)個聚苯乙(yi)烯(xi)板的反應(ying)孔(kong)中(zhong)加0.ml，4℃ 過(guo)夜。次(ci)日(ri)，棄去(qu)孔(kong)內(nei)溶液(ye)，用洗(xi)滌(di)緩沖液(ye)洗(xi)3次(ci)，每(mei)次(ci)3分鐘。（簡稱(cheng)洗(xi)滌(di)，下(xia)同(tong)）。

2.　加(jia)樣：加(jia)壹定(ding)稀(xi)釋(shi)的待檢樣品(pin)0.ml於上(shang)述已包(bao)被(bei)之(zhi)反應(ying)孔(kong)中(zhong)，置37℃ 孵育(yu)小時(shi)。然後洗(xi)滌(di)。（同(tong)時(shi)做(zuo)空白孔(kong)，陰(yin)性對照孔(kong)及(ji)陽性(xing)對照孔(kong)）。

3.　加(jia)酶(mei)標抗體(ti)：於各反應(ying)孔(kong)中(zhong)，加入新(xin)鮮稀(xi)釋(shi)的酶(mei)標抗體(ti)（經(jing)滴定(ding)後的(de)稀釋(shi)度）0.ml。37℃ 孵(fu)育(yu)0.5～小時(shi)，洗(xi)滌(di)。

 　 4.　加(jia)底(di)物液(ye)顯(xian)色(se)：於各反應(ying)孔(kong)中(zhong)加入臨時(shi)配制的(de)TMB底(di)物溶液(ye)0.ml，37℃ 0～30分鐘。

5.　終止反應(ying)：於各反應(ying)孔(kong)中(zhong)加入2M硫(liu)酸0.05ml。ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)

6.　結(jie)果(guo)判(pan)定：可(ke)於白色(se)背(bei)景上(shang)，直接(jie)用(yong)肉(rou)眼觀(guan)察結果：反應(ying)孔(kong)內(nei)顏色(se)越深，陽性程度越強(qiang)，陰(yin)性反應(ying)為(wei)無(wu)色或(huo)極淺，依(yi)據所呈(cheng)顏色(se)的(de)深淺，以(yi)“+"、“-"號表示(shi)。也可(ke)測OD值：在ELISA檢測(ce)儀上(shang)，於450nm（若以(yi)ABTS顯(xian)色(se)，則40nm）處(chu)，以(yi)空白對照孔(kong)調(tiao)零後(hou)測各孔(kong)OD值，若大於規(gui)定的(de)陰(yin)性(xing)對照OD值的2.倍，即(ji)為陽性(xing)。

ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)