操(cao)作(zuo)的安(an)全性與簡便(bian)性

顯色

取(qu)出SDS-聚丙(bing)烯(xi)酰胺凝膠(jiao)，經(jing)超純(chun)水(shui)清洗(xi)2次(ci)，每次分鐘(zhong)，4塊膠(jiao)分別按(an)4種(zhong)不(bu)同(tong)的染色方(fang)法顯色。下列每(mei)步操(cao)作(zuo)皆在(zai)搖床(chuang)上進(jin)行。4種(zhong)染色法成份(fen)組成及操(cao)作(zuo)如(ru)下：ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)

①傳(chuan)統(tong)考馬斯(si)亮藍染色法：清洗(xi)後(hou)的凝膠(jiao)經(jing)固定(ding)液(ye)(45.4%甲醇(chun)、4.6%乙酸(suan))固(gu)定(ding)小(xiao)時，隨(sui)後(hou)用(yong)染(ran)色液(45.4%甲醇(chun)、4.6%乙酸(suan)、0.% CBB G250)著(zhe)色過(guo)夜(ye)，再(zai)經(jing)洗(xi)脫液(ye)(5%甲醇(chun)、7.5%乙酸(suan))過(guo)夜(ye)脫色至背景(jing)清(qing)晰(xi)。

②膠(jiao)體(ti)考馬斯(si)亮藍染色法(colloidal Coomassie brilliant blue，cCBB)染色法：凝膠(jiao)先(xian)經(jing)超純(chun)水(shui)漂洗(xi)後(hou)，再(zai)用(yong)colloidal Coomassie blue G250染(ran)色液(.6%磷(lin)酸(suan)、8%硫酸銨、0.02% CBB G250、20%乙醇(chun))著色過(guo)夜(ye)，洗(xi)脫液(ye)為(wei)超純(chun)水(shui)，換液3～4次(ci)直至背景(jing)清(qing)晰(xi)。ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)

③改(gai)良(liang)考(kao)馬斯(si)亮藍染色法(modified Coomassie brilliant blue，mCBB)染色法[6];操(cao)作(zuo)方(fang)法同膠(jiao)體(ti)考馬斯(si)亮藍染色法，只是染色液組(zu)成(cheng)不(bu)同(tong)(0.2% CBB G250、0%硫酸銨、0%磷(lin)酸、20%乙醇(chun))，著色小時(shi)即(ji)可。

④銀染(ran)(silver staining)：凝膠(jiao)漂洗(xi)後(hou)先被固定(ding)液(ye)(50%甲醇(chun)+ 5%乙酸(suan))固(gu)定(ding)小(xiao)時，隨(sui)後(hou)分別用(yong)50%甲醇(chun)和超純(chun)水(shui)清洗(xi)各(ge)0分鐘(zhong)，0.02 mg/L Na2S2O3 致敏(min)分鐘(zhong)，超純(chun)水(shui)清洗(xi)2次(ci)，每次分鐘(zhong)，再(zai)用(yong)預(yu)冷(leng)的0.5% AgNO3著色20分鐘(zhong)，超純(chun)水(shui)再(zai)次(ci)清(qing)洗(xi)2次(ci)，每次分鐘(zhong)，2% Na2CO3 + 0.04% 甲醛(quan)顯色20～30秒，當溶(rong)液變黃以後除(chu)去(qu)，換新鮮(xian)的溶(rong)液後(hou)繼(ji)續(xu)顯色直至顯色適度(du)後(hou)，以(yi)5%乙酸(suan)終(zhong)止顯色。

操(cao)作(zuo)的安(an)全性與簡便(bian)性

由於(yu)有機(ji)溶(rong)劑(ji)的相似作(zuo)用(yong)，我(wo)們(men)在改(gai)進(jin)的考馬斯(si)亮藍染色法裏，拋(pao)棄有毒的甲醇(chun)及氣味(wei)難(nan)聞的乙酸(suan)，同(tong)時在(zai)步驟(zhou)上(shang)，我(wo)們(men)采用(yong)染(ran)色和固(gu)定(ding)壹(yi)步法進行，減少了(le)*步固(gu)定(ding)的時間，僅(jin)用超純(chun)水(shui)清洗(xi)，縮短了(le)整個染(ran)色及人(ren)與有毒物接(jie)觸(chu)的時間。結果顯示，兩種(zhong)考馬斯(si)亮藍染色法獲(huo)得的圖像(xiang)背景(jing)不(bu)比(bi)傳(chuan)統(tong)考馬斯(si)亮藍染色法差。

通(tong)過(guo)我(wo)們(men)的摸(mo)索及比(bi)較分析(xi)認為(wei)，用低(di)毒的乙醇(chun)替代(dai)甲醇(chun)，采用(yong)高酸、高離子、快速而(er)簡便(bian)的改(gai)良(liang)考(kao)馬斯(si)亮藍染色法能獲(huo)得低(di)背景(jing)、高靈(ling)敏度(du)、兼(jian)容質譜(pu)的蛋白質顯示，能為(wei)蛋白質組研(yan)究、雙(shuang)向凝膠(jiao)電(dian)泳技術(shu)的蛋白質分析(xi)提(ti)供質量的保證(zheng)。ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)

綜上比(bi)較，作(zuo)為(wei)蛋白質染色的方(fang)法，考馬斯(si)亮藍法操(cao)作(zuo)便(bian)捷(jie)、兼(jian)容性高，但耗(hao)時(shi)較長(chang)。經(jing)改(gai)良(liang)的考馬斯(si)亮藍法的檢(jian)測靈(ling)敏性大(da)大(da)提(ti)高，甚(shen)至不(bu)輸(shu)銀染(ran)法。而(er)銀染(ran)法雖(sui)然(ran)耗(hao)時(shi)短(duan)，但步驟(zhou)較多，且(qie)兼(jian)容性低(di)。