Elisa試驗操(cao)作(zuo)中(zhong)可能(neng)影響結(jie)果的原因及(ji)解(jie)決辦(ban)法(fa)

     ELISA 試驗以靈(ling)敏(min)度(du)較(jiao)高、特(te)異(yi)性較(jiao)好的特(te)點在臨(lin)床(chuang)上(shang)得到了(le)廣(guang)泛的應(ying)用，但(dan)操(cao)作(zuo)中(zhong)的各(ge)個(ge)環(huan)節對(dui)試驗的檢(jian)測(ce)效果(guo)影響較(jiao)大(da)，如不註(zhu)意，有(you)可能(neng)導致顯(xian)色(se)不全、花(hua)板等(deng)結(jie)果。ELISA試劑(ji)盒(he)

    下面(mian)分(fen)析(xi)Elisa試驗操(cao)作(zuo)中(zhong)可能(neng)影響結(jie)果的原因，並給(gei)出相應(ying)的解(jie)決(jue)辦法(fa)

. 選擇(ze)試劑(ji)

    選(xuan)擇(ze)質量優(you)良的檢(jian)測(ce)試劑(ji)，嚴格(ge)按照(zhao)試劑(ji)說(shuo)明書(shu)進行操作(zuo)，操(cao)作(zuo)前(qian)將(jiang)試劑(ji)在室溫(wen)下平(ping)衡30-60分(fen)鐘。

2 加(jia)樣

    可能(neng)原因： ① 血(xue)清(qing)或(huo)血(xue)漿標本分(fen)離不好即進行加(jia)樣; ② 手工(gong)操作(zuo)中(zhong)，加(jia)樣板過多造成(cheng)加(jia)樣後放(fang)入(ru)孵(fu)箱前(qian)等(deng)待時間過長(chang)(特(te)別是室內(nei)溫(wen)度(du)較(jiao)高時); ③ 加(jia)完標(biao)本再(zai)加(jia)酶試劑(ji)時酶濺(jian)出孔(kong)外。解決(jue)辦法(fa)： ① 標本為(wei)血清(qing)：將血(xue)液先(xian)自然存(cun)放(fang)-2小(xiao)時後，再(zai)用3000rmp離心(xin)5分(fen)鐘;標(biao)本為(wei)血漿：必須(xu)使(shi)用含(han)抗(kang)凝劑(ji)的血(xue)液(ye)標本收(shou)集(ji)管，采血(xue)後必(bi)須(xu)立(li)即顛倒(dao)混(hun)合5-0次，放(fang)置(zhi)壹段時間後(hou)，3000rpm離心(xin)5分(fen)鐘;若(ruo)在幾(ji)天內(nei)檢測(ce)，可放(fang)在2-8℃冰(bing)箱中，若要(yao)貯存(cun)，則(ze)置於(yu)-20℃的低(di)溫(wen)冰箱(xiang)內(nei)。 ② 加(jia)樣後及(ji)時放(fang)入(ru)孵(fu)箱。 ③ 加(jia)酶試劑(ji)後(hou)用吸(xi)水(shui)紙在酶(mei)標板表面(mian)輕(qing)拭(shi)吸(xi)幹(gan)。④ 如(ru)果(guo)采用AT或(huo)其(qi)他(ta)全自動(dong)加(jia)樣，選擇(ze)FAME或(huo)其(qi)他(ta)後處(chu)理儀器(qi)加(jia)酶試劑(ji)。 ⑤ 標(biao)本較(jiao)多時，請分(fen)批操作(zuo)。

3. 孵(fu)育(yu)

    可能(neng)原因： ① 孵(fu)育(yu)時未貼封(feng)片或(huo)加(jia)蓋，使(shi)標(biao)本或(huo)稀釋液(ye)蒸(zheng)發(fa)，吸(xi)附(fu)於(yu)孔(kong)壁(bi)，難(nan)於清(qing)洗*; ② 孵(fu)育時間人(ren)為(wei)延(yan)長(chang)，導致非(fei)特(te)異(yi)性結(jie)合緊(jin)附(fu)於(yu)反(fan)應(ying)孔(kong)周圍(wei)，難以清(qing)洗*。解(jie)決辦(ban)法(fa)：① 貼封(feng)片或(huo)加(jia)蓋; ② 按說(shuo)明步(bu)驟嚴格(ge)控(kong)制(zhi)操作(zuo)時間。

4. 洗(xi)板

    可能(neng)原因： ①采用手(shou)工(gong)洗板,孔與孔(kong)之間液(ye)體(ti)交叉。 ② 采用半(ban)自(zi)動洗(xi)板機洗板時，洗液(ye)量不足，導致洗(xi)板不*;洗板針堵(du)塞(sai)，抽吸(xi)不*;洗板不暢(chang)，導致洗(xi)板效果(guo)差(cha)。 ③ 反(fan)應(ying)板過多造成(cheng)洗板等(deng)待時間長(chang)。 解(jie)決(jue)辦(ban)法(fa)： ① 保(bao)證(zheng)洗液註(zhu)滿各(ge)孔(kong)，洗板針暢(chang)通，洗(xi)完板後在吸(xi)水(shui)紙(選(xuan)擇(ze)幹凈、無(wu)或(huo)少塵的吸(xi)水(shui)材料(liao))上(shang)輕(qing)輕(qing)拍(pai)幹(gan); ② 合理安排，或(huo)多用幾(ji)臺洗板機。ELISA試劑(ji)盒(he)

5. 顯(xian)色(se)

    可能(neng)原因： ① 顯(xian)色(se)劑(ji)配(pei)制(zhi)後放(fang)置(zhi)時間過長(chang)或(huo)使(shi)用過期(qi)顯(xian)色(se)劑(ji); ②加(jia)顯(xian)色(se)劑(ji)時濺出孔(kong)外造成(cheng)液體(ti)回流(liu)。解決(jue)辦法(fa)： ① 顯(xian)色(se)劑(ji)盡(jin)量在臨(lin)用前(qian)配(pei)制(zhi)，堅持不用過期(qi)顯(xian)色(se)劑(ji)，肉(rou)眼可見淺(qian)藍色(se)的TMB顯(xian)色(se)劑(ji)不用; ② 加(jia)樣時保(bao)持顯(xian)色(se)劑(ji)不外流(liu); ③ A、B液應(ying)避(bi)免接(jie)觸金(jin)屬器(qi)械(xie)。

6. 終止(zhi)

    可能(neng)原因如(ru)加(jia)終止(zhi)液(ye)時產(chan)生(sheng)較(jiao)多氣(qi)泡，導致假陽(yang)性增加(jia)。所(suo)以在加(jia)終止(zhi)液(ye)時應(ying)避(bi)免產(chan)生(sheng)氣(qi)泡。

7. 讀板

    如讀板時板底不清(qing)潔等(deng)。應(ying)保(bao)證(zheng)酶標板清(qing)潔。

    所(suo)以在整(zheng)個操作(zuo)過程(cheng)中(zhong)保(bao)證(zheng)酶標板不接(jie)觸次氯酸;盡(jin)可能(neng)實現ELISA檢測(ce)標準自(zi)動(dong)化，有效提(ti)高檢(jian)測(ce)質量。

    在實(shi)際(ji)操(cao)作(zuo)中(zhong)，除(chu)了(le)選(xuan)擇(ze)優(you)良試劑(ji)外，必須(xu)嚴格(ge)按照(zhao)操(cao)作(zuo)步(bu)驟進行操作(zuo)，同時作(zuo)好室內(nei)質控(kong)、室間質評，以嚴謹(jin)的工(gong)作(zuo)作(zuo)風(feng)檢測(ce)每壹份標本，才(cai)能(neng)保(bao)證(zheng)檢測(ce)質量。現(xian)在國(guo)內(nei)已有(you)相當數(shu)量的單位擁(yong)有全自動(dong)酶標儀，這(zhe)對於實現ELISA標(biao)準化檢測(ce)、提(ti)高檢(jian)測(ce)質量起(qi)到(dao)了(le)重(zhong)要(yao)作(zuo)用。ELISA試劑(ji)盒(he)