不(bu)同類(lei)型的(de)樣(yang)本(ben)的(de)處(chu)理方法(fa)

     通常(chang)我(wo)們(men)可用(yong)於ELISA檢測(ce)的(de)樣(yang)本(ben)是有多(duo)種(zhong)類(lei)型的(de)，如(ru)血清、血漿(jiang)、尿(niao)液、細胞(bao)培養上清或組織(zhi)勻漿液等(deng)，不(bu)同類(lei)型的(de)檢(jian)測(ce)樣本(ben)前(qian)期的(de)處(chu)理方法(fa)是不(bu)壹樣(yang)的(de)。正(zheng)確的(de)處(chu)理樣本(ben)是保證ELISA檢測(ce)的(de)正(zheng)確性(xing)和(he)準確性(xing)的(de)*步(bu)。ELISA試劑(ji)盒(he)

、  血清

    血清是zui常(chang)用(yong)於ELISA檢測(ce)的(de)壹(yi)類(lei)樣(yang)本(ben)，處(chu)理也比(bi)較(jiao)簡(jian)單(dan)。

    用無(wu)熱原(yuan)、無(wu)內毒(du)素(su)的(de)試管或離心(xin)管采集(ji)血液標本(ben)，將試管或離心(xin)管室溫放置(zhi)2小(xiao)時(shi)或4℃壹個晚(wan)上，使(shi)血清析(xi)出(chu)。（將試管或離心(xin)管傾(qing)斜(xie)放置(zhi)，使(shi)液面橫(heng)截(jie)面增(zeng)大(da)，能使(shi)血清更大(da)程度(du)的(de)析(xi)出(chu)。）4℃ 000×g離心(xin)20分鐘，仔細收集(ji)上清。建(jian)議將血清分裝(zhuang)多(duo)份，-20℃或-80℃保(bao)存，避免反(fan)復凍融。

    采血過(guo)程中應避免溶(rong)血，因(yin)為(wei)紅(hong)細胞(bao)裂解(jie)時(shi)會(hui)釋放具(ju)有過(guo)氧(yang)化(hua)酶(mei)活(huo)性的(de)物(wu)質，在以(yi)HRP為標記的(de)ELISA檢(jian)測(ce)中會有(you)非特(te)異(yi)性的(de)顯(xian)色(se)，而(er)導(dao)致檢測(ce)的(de)不(bu)準確性(xing)。同時也(ye)應避免細菌汙(wu)染(ran)，因為(wei)菌體(ti)內可能(neng)含有(you)內(nei)源性(xing)的(de)HRP從(cong)而(er)導(dao)致檢測(ce)的(de)假陽性。

2、  血漿(jiang)

    用(yong)含抗(kang)凝(ning)劑(ji)的(de)或(huo)離(li)心(xin)管采集(ji)血液標本(ben)，標本(ben)采(cai)集(ji)後30min內4℃ 000×g離(li)心(xin)5min，取(qu)上清即血漿(jiang)。將上清分裝(zhuang)多(duo)份，-20℃或-80℃保(bao)存，避免反(fan)復凍融。避免使(shi)用溶(rong)血或(huo)高(gao)血脂(zhi)的(de)標本(ben)。

    常(chang)用(yong)的(de)抗(kang)凝(ning)劑(ji)為(wei)EDTA、和(he)等(deng)，檢(jian)測(ce)時還(hai)應仔細閱(yue)讀試劑(ji)盒(he)說(shuo)明(ming)書(shu)，檢查(zha)試劑(ji)盒(he)是否對抗(kang)凝(ning)劑(ji)有(you)特(te)殊(shu)要求。ELISA試劑(ji)盒(he)

3、  細胞(bao)培養上清

    取(qu)細胞(bao)培養上清到(dao)離心(xin)管，000×g離心(xin)20min，除去(qu)細胞(bao)碎(sui)片及雜質，取(qu)上清，-20℃或-80℃保(bao)存(cun)，避免反(fan)復凍融。

4、  細胞(bao)裂解(jie)液

）  吸去(qu)培養板內(nei)的(de)培養基，用消(xiao)化(hua)細胞(bao)，加適(shi)量(liang)培養基將細胞(bao)從(cong)培養板上吹下來(lai)。懸浮(fu)細胞(bao)可省略(lve)。

2）  收集(ji)細胞(bao)懸液，000×g離(li)心(xin)0min，棄去(qu)培養基，用預(yu)冷(leng)的(de)PBS潤(run)洗(xi)3次(ci)。

3）  加入(ru)適(shi)量(liang)的(de)預(yu)冷(leng)PBS或(huo)細胞(bao)裂解(jie)液（臨(lin)用(yong)前加(jia)入蛋白酶抑(yi)制劑(ji)）重懸細胞(bao)。通常(chang)6孔板壹(yi)個孔的(de)細胞(bao)量需要50~250μL PBS重懸。

4）  將樣(yang)品(pin)放入(ru)-20℃或(huo)-80℃，使(shi)樣品冷凍，再放室(shi)溫(wen)解(jie)凍樣品，反(fan)復凍融幾(ji)次(ci)，使(shi)細胞(bao)充分裂(lie)解(jie)。也可(ke)將樣(yang)品(pin)進行(xing)超(chao)聲(sheng)破碎(sui)，以(yi)達到(dao)裂解(jie)的(de)目(mu)的(de)。

5）  4℃ 0000×g 離(li)心(xin)0min，除去(qu)細胞(bao)碎(sui)片，取(qu)上清，-20℃或-80℃保(bao)存(cun)，避免反(fan)復凍融。

5、組織(zhi)勻漿液

）  將組織(zhi)樣本(ben)用(yong)PBS (0.0 [錨(mao)點(dian)] [錨(mao)點(dian)] M, PH 7.4) 沖(chong)洗(xi)，洗(xi)去(qu)組織(zhi)表面殘留(liu)的(de)血液或(huo)雜(za)質。

2）  將組織(zhi)塊稱重，記錄(lu)後剪(jian)碎(sui)，碎(sui)塊應盡(jin)量(liang)小(xiao)，便(bian)於勻漿得(de)更充分

3）  將組織(zhi)按壹定(ding)的(de)比(bi)例加(jia)入(ru)預(yu)冷(leng)的(de)PBS（臨(lin)用(yong)前(qian)加入蛋白酶(mei)抑(yi)制劑(ji)）勻漿，勻漿時(shi)置(zhi)於冰上或(huo)冰浴(yu)中(zhong)。（通常(chang)按組織(zhi)重量：PBS體(ti)積(ji)=:9的(de)比(bi)例勻漿，例如(ru)g的(de)組織(zhi)樣本(ben)對應9mL的(de)PBS，具(ju)體體(ti)積(ji)可(ke)根據實(shi)驗(yan)需要適(shi)當(dang)調整，檢(jian)測(ce)後計算(suan)樣品(pin)濃(nong)度(du)時應乘(cheng)以(yi)相應的(de)稀(xi)釋倍數(shu)）

4）  吸取(qu)勻漿液到(dao)離心(xin)管，4℃ 5000×g 離心(xin)5~0min，取(qu)上清，-20℃或-80℃保(bao)存(cun)，避免反(fan)復凍融。

6、  尿液、唾(tuo)液等(deng)其他液體(ti)生(sheng)物樣本(ben)

000×g離(li)心(xin)20min，取(qu)上清即可(ke)檢(jian)測(ce)。

    總(zong)的(de)來(lai)說(shuo)，因(yin)為(wei)ELISA只能檢測(ce)可溶(rong)性(xing)蛋(dan)白(bai)的(de)含(han)量(liang)，所(suo)以(yi)應保(bao)證所有(you)樣(yang)本(ben)均(jun)為澄(cheng)清的(de)液體(ti)，沈澱或(huo)懸浮(fu)物都(dou)應離(li)心(xin)去(qu)除。ELISA試劑(ji)盒(he)

    為(wei)了保(bao)證檢測(ce)的(de)準確性(xing)，保(bao)存於-20℃或-80℃的(de)樣(yang)本(ben)在(zai)~6個(ge)月內檢(jian)測(ce)；4℃保存的(de)樣(yang)本(ben)應在(zai)周(zhou)內進行(xing)檢測(ce)。

    另外，還(hai)應保(bao)證樣本(ben)不(bu)含NaN3，因(yin)為NaN3會(hui)抑(yi)制HRP的(de)活(huo)性，從(cong)而(er)導(dao)致假陰性(xing)的(de)結果(guo)。