酶標儀(yi)原(yuan)理(li)

   酶標儀(yi)實際上(shang)就是壹(yi)臺變(bian)相(xiang)的光(guang)電比色計(ji)或(huo)分光(guang)光(guang)度計(ji)，其基(ji)本(ben)工(gong)作(zuo)原(yuan)理(li)與主要(yao)結構和(he)光(guang)電比色計(ji)基(ji)本(ben)相(xiang)同(tong). 圖(tu)示(shi)是壹(yi)種(zhong)單(dan)通(tong)道(dao)自(zi)動進樣的酶標儀(yi)工(gong)作(zuo)原(yuan)理(li)圖(tu).光(guang)源燈(deng)發(fa)出(chu)的光(guang)波經(jing)過濾(lv)光(guang)片(pian)或(huo)單(dan)色器變成壹(yi)束(shu)單(dan)色光(guang)，進入(ru)塑(su)料微孔(kong)極(ji)中(zhong)的待測標(biao)本(ben).ELISA試(shi)劑盒(he)

    該(gai)單(dan)色光(guang)壹部(bu)分(fen)被(bei)標(biao)本(ben)吸(xi)收，另(ling)壹(yi)部(bu)分則透過標本(ben)照(zhao)射(she)到光(guang)電檢(jian)測(ce)器(qi)上(shang)，光(guang)電檢(jian)測(ce)器(qi)將這(zhe)壹待測標(biao)本(ben)不同而強弱不同的光(guang)信號(hao)轉換(huan)成相(xiang)應(ying)的電信號(hao).電信號(hao)經前(qian)置放大(da)，對數放大(da)，模數轉(zhuan)換(huan)等信號(hao)處理(li)後(hou)送(song)入(ru)微處(chu)理(li)器進行數據(ju)處(chu)理和計(ji)算(suan)，zui後由(you)顯(xian)示(shi)器和打印機(ji)顯(xian)示(shi)結果. 微處(chu)理(li)機還(hai)通(tong)過控制電路(lu)控(kong)制機械(xie)驅動機構X方(fang)向(xiang)和(he)Y方(fang)向(xiang)的運(yun)動來(lai)移(yi)動微孔(kong)板，從(cong)而實現自(zi)動進樣檢測過程(cheng).而另壹(yi)些(xie)酶標儀(yi)則是采用手(shou)工(gong)移動微孔(kong)板進行檢測(ce)，因(yin)此省去了X,Y方向(xiang)的機械(xie)驅動機構和(he)控(kong)制(zhi)電(dian)路(lu)，從而使(shi)儀(yi)器(qi)更小巧(qiao)，結構也(ye)更簡(jian)單(dan).
微孔(kong)板是壹(yi)種(zhong)經(jing)事先包(bao)理(li)於放置(zhi)待測樣(yang)本(ben)的透明(ming)塑(su)料板，板上(shang)有多(duo)排大(da)小(xiao)均(jun)勻壹致(zhi)的小孔(kong)，孔(kong)內(nei)都(dou)包(bao)埋(mai)著相(xiang)應(ying)的抗原(yuan)或(huo)抗(kang)體(ti)，微孔(kong)板上(shang)每(mei)個小(xiao)孔(kong)可盛放零(ling)點(dian)幾(ji)毫(hao)升(sheng)的溶液.
光(guang)是電(dian)磁(ci)波，波長(chang)00nm～400nm稱為(wei)紫外(wai)光(guang)，400nm～780nm之間的光(guang)可被(bei)人(ren)眼(yan)觀(guan)察(cha)到，大(da)於(yu)780nm稱(cheng)為(wei)紅(hong)外光(guang)。人們(men)只所(suo)以能夠看到色彩(cai)，是因(yin)為(wei)光(guang)照射(she)到物體(ti)上(shang)被(bei)物體(ti)反(fan)射(she)回來(lai)。綠(lv)色植(zhi)物之所(suo)以是綠(lv)色，是因(yin)為(wei)植(zhi)物吸(xi)收(shou)的大(da)部(bu)分(fen)為(wei)紅(hong)橙光(guang)和藍(lan)紫光(guang)，但(dan)對綠(lv)色不吸收(shou)，反(fan)射(she)出(chu)來(lai)，所(suo)以植(zhi)物呈現為(wei)綠(lv)色。酶標儀(yi)測(ce)定的原(yuan)理(li)是在(zai)特(te)定波長(chang)下，檢(jian)測(ce)被(bei)測(ce)物的吸光(guang)值。
酶標儀(yi)檢(jian)測單(dan)位(wei)
    光(guang)通(tong)過被(bei)檢(jian)測(ce)物，前(qian)後的能量差(cha)異即(ji)是被(bei)檢(jian)測(ce)物吸(xi)收(shou)掉(diao)的能量，特(te)定波長(chang)下，同(tong)壹(yi)種(zhong)被(bei)檢(jian)測(ce)物的濃度與被(bei)吸(xi)收(shou)的能量成定量關(guan)系。ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)
    檢(jian)測(ce)單(dan)位(wei)用OD值(zhi)表示(shi)， OD是optical density（光(guang)密度）的縮(suo)寫(xie)，表(biao)示(shi)被(bei)檢(jian)測(ce)物吸(xi)收(shou)掉(diao)的光(guang)密度， OD=og（/trans），其中trans為(wei)檢(jian)測物的透光(guang)值。根(gen)據(ju)Bouger-amberT-beer法(fa)則，OD值與光(guang)強度成下(xia)述關系：
E=OD=logΙ0/Ι 其中E表示(shi)被(bei)吸(xi)收(shou)的光(guang)密度， Ι0 為(wei)在(zai)檢測(ce)物之前(qian)的光(guang)強度，Ι為(wei)從(cong)被(bei)檢(jian)測(ce)物出(chu)來(lai)的光(guang)強度。
OD值(zhi)由(you)下述公式(shi)計(ji)算(suan)：
E=OD=C×D×E
C為(wei)檢(jian)測物的濃度 D為(wei)檢(jian)測物的厚(hou)度 E為(wei)摩(mo)爾(er)因(yin)子(zi)
    在(zai)特(te)定波長(chang)下測(ce)定每(mei)壹種(zhong)物質(zhi)都(dou)有(you)其特(te)定的波長(chang)，在此(ci)波長(chang)下，此(ci)物質(zhi)能夠吸收(shou)zui多的光(guang)能量。如(ru)果選(xuan)擇(ze)其它的波長(chang)段，就會(hui)造成檢(jian)測結果的不準(zhun)確(que)。因(yin)此(ci)，在測定檢測物時，我們(men)選(xuan)擇(ze)特(te)定的波長(chang)進行檢測(ce)，稱(cheng)為(wei)測(ce)量波
長(chang)。
    但(dan)是每(mei)壹種(zhong)物質(zhi)對光(guang)能量還(hai)存(cun)在壹(yi)定的非特(te)異性吸收(shou)，為(wei)了消(xiao)除(chu)這(zhe)種(zhong)非(fei)特(te)異性吸收(shou)，我們(men)再選(xuan)取壹(yi)個參(can)照(zhao)波長(chang)，以消(xiao)除(chu)這(zhe)個不準(zhun)確(que)性。在參(can)照波長(chang)下，檢(jian)測(ce)物光(guang)的吸收zui小。檢(jian)測(ce)波長(chang)和參(can)照(zhao)波長(chang)的吸光(guang)值之差(cha)可以消(xiao)除(chu)非特(te)異性吸收(shou)。
檢測(ce)值計(ji)算(suan)
儀(yi)器(qi)中的檢測器接收透過被(bei)檢(jian)測(ce)物的光(guang)能量，轉(zhuan)換(huan)成二進位(wei)數字信號(hao)，zui大(da)為(wei)4095。儀(yi)器(qi)定義沒有(you)光(guang)源下(xia)的透光(guang)值為(wei) 0%，沒有(you)檢(jian)測物的透光(guang)值為(wei)00%。則實際檢測中(zhong)，檢測(ce)物的透光(guang)值均(jun)在(zai) 0%壹(yi)00%之間。透光(guang)值
的計(ji)算(suan)如下：
T=（Meas—Min）/（Max—Min）
其中T為(wei)透光(guang)值， Meas為(wei)檢(jian)測的二進位(wei)數值(zhi)， Min為(wei)在(zai) 0%的情況下檢(jian)測(ce)的二進位(wei)數值(zhi)， Max為(wei)在(zai)00%的情況下檢(jian)測(ce)的二進位(wei)數值(zhi)，舉(ju)例(li)如下(xia)：
MaX=3600 Mn=20 Meas=30
T=（30-20）/3600-20）=0．0028
OD=og（/T）=og（/0.0028）=2.552
中(zhong)心(xin)定位(wei)
    儀(yi)器(qi)會(hui)自(zi)動對酶標孔(kong)進行中心(xin)定位(wei)，中心(xin)定位(wei)是要(yao)消(xiao)除(chu)酶標孔(kong)底(di)的凸(tu)凹(ao)引起的厚(hou)薄(bo)不均帶(dai)來(lai)檢(jian)測(ce)的不準(zhun)確(que)。在(zai)對每(mei)壹個酶標儀(yi)進行檢測(ce)時，儀(yi)器(qi)其實要(yao)進行35個點(dian)的測量，選(xuan)取zui中(zhong)間的5個點(dian)的均值為(wei)本(ben)孔(kong)的OD值。
光(guang)源的參照通(tong)道(dao)
    參(can)照通(tong)道(dao)是用(yong)來(lai)校(xiao)準(zhun)由(you)於電(dian)壓不穩或燈(deng)泡磨損(sun)帶(dai)來(lai)的影響。
用途和(he)其它提示(shi)
    用於ELISA試劑的測定，廣泛(fan)用(yong)於(yu)各(ge)種(zhong)實驗室(shi)，包(bao)括(kuo)臨(lin)床(chuang)實驗室(shi)。
質(zhi)量控(kong)制(zhi)
質(zhi)量控(kong)制(zhi)是試(shi)劑檢(jian)測的重要(yao)因素(su)。請按(an)照(zhao)試(shi)劑說(shuo)明書的要(yao)求進行質(zhi)量控(kong)制(zhi)。
空(kong)白(bai)校(xiao)正
有壹些(xie)試(shi)劑盒(he)的說陰(yin)書將(jiang)空(kong)白(bai)孔(kong)設置(zhi)為(wei)空(kong)氣(qi)，其它大(da)多(duo)數(shu)空(kong)白(bai)孔(kong)的設置(zhi)是用(yong)試劑(ji)來(lai)設置(zhi)的，請按(an)照(zhao)試(shi)劑盒(he)的說明書要(yao)求進行。
檢測(ce)結(jie)果的解釋
由(you)於有(you)相(xiang)當(dang)多(duo)的因素會(hui)影響檢測(ce)的結果，如(ru)不同的酶標板，檢(jian)測(ce)試劑的體積，都(dou)會(hui)造成OD值(zhi)的不同，因(yin)此，只有使(shi)用同(tong)壹酶標板反(fan)應(ying)的試劑檢測(ce)結(jie)果才(cai)能比較和(he)分(fen)析。對結果的臨(lin)床(chuang)解釋請依(yi)照(zhao)試(shi)劑(ji)盒(he)的說明書進行.

酶標儀(yi)結(jie)構

    規格有(you)40孔(kong)板，55孔(kong)板，96孔(kong)板等多種(zhong)，不同的儀(yi)器(qi)選(xuan)用(yong)不同規格的孔(kong)板，對其可進行壹孔(kong)壹(yi)孔(kong)地(di)檢(jian)測(ce)或(huo)壹排壹排地(di)檢(jian)測(ce).
    酶標儀(yi)所(suo)用的單(dan)色光(guang)既(ji)可通(tong)過相(xiang)幹(gan)濾(lv)光(guang)片(pian)來(lai)獲得，也(ye)可用分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)相(xiang)同(tong)的單(dan)色器來(lai)得(de)到.在使(shi)用濾(lv)光(guang)片(pian)作(zuo)濾(lv)波裝置時與普(pu)通(tong)比色計(ji)壹(yi)樣，濾(lv)光(guang)片(pian)即(ji)可放在(zai)微孔(kong)板的前(qian)面(mian)，也可放在(zai)微孔(kong)板的後面(mian)，聚光(guang)鏡，光(guang)欄(lan)後到達反(fan)射(she)鏡，經(jing)反(fan)射(she)鏡作(zuo)90°反(fan)射(she)後垂(chui)直通(tong)過比色溶液,然後(hou)再經(jing)濾(lv)光(guang)片(pian)送(song)到光(guang)電管(guan).
從(cong)酶標儀(yi)工(gong)作(zuo)框(kuang)圖(tu)和光(guang)路圖(tu)上(shang)可看出(chu)，它和(he)普(pu)通(tong)的光(guang)電比色計(ji)有(you)以下幾(ji)點(dian)差(cha)異：
（l）盛裝待測比色液的容器(qi)不再使(shi)用比色皿(min)，而是使(shi)用塑(su)料微孔(kong)板.微孔(kong)板常用(yong)透明(ming)的聚乙烯(xi)材料(liao)制成，對抗原(yuan)抗(kang)體(ti)有(you)較強(qiang)的吸附作(zuo)用(yong)，故(gu)用它(ta)作(zuo)為(wei)固相(xiang)載(zai)體(ti).
⑵由(you)於盛(sheng)樣(yang)本(ben)的塑(su)料微孔(kong)板是多(duo)排多孔(kong)的，光(guang)線只能垂直(zhi)穿過，因此酶標儀(yi)的光(guang)束(shu)都(dou)是垂(chui)直通(tong)過待測溶(rong)液(ye)和(he)微孔(kong)板的，光(guang)束(shu)既(ji)可是從(cong)上(shang)到下，也可以是從(cong)下到上(shang)穿過比色液.
⑶酶標儀(yi)通(tong)常不僅用(yong)A，有時也(ye)使(shi)用光(guang)密度OD來(lai)表(biao)示(shi)吸光(guang)度.酶標儀(yi)可分為(wei)單(dan)通(tong)道(dao)和(he)多通(tong)道(dao)2種(zhong)類(lei)型，單(dan)通(tong)道(dao)又(you)有自(zi)動和手(shou)動2種(zhong)之分(fen).自(zi)動型的儀(yi)器(qi)有X,Y方向(xiang)的機械(xie)驅動機構，可將微孔(kong)板L的小孔(kong)壹(yi)個個依(yi)次(ci)送(song)入(ru)光(guang)束(shu)下(xia)面(mian)測試(shi)，手(shou)動型則靠手(shou)工(gong)移動微孔(kong)板來(lai)進行測量.
   在(zai)單(dan)通(tong)道(dao)酶標儀(yi)的基(ji)礎(chu)上(shang)又(you)發(fa)展(zhan)了多通(tong)道(dao)酶標儀(yi)，此(ci)類(lei)酶標儀(yi)壹(yi)般都(dou)是自(zi)動化(hua)型(xing)的.它沒有(you)多(duo)個光(guang)束(shu)和(he)多(duo)個光(guang)電檢(jian)測(ce)器(qi)，如 2個通(tong)道(dao)的儀(yi)器(qi)設有(you) 2條光(guang)束(shu)或(huo) 2個光(guang)源，2個檢(jian)測(ce)器和(he)2個放大(da)器(qi)，在(zai)X方(fang)向(xiang)的機械(xie)驅動裝置的作(zuo)用(yong)下(xia)，樣品(pin)2個為(wei)壹(yi)排被(bei)檢(jian)測(ce).多(duo)通(tong)道(dao)酶標儀(yi)的檢測速(su)度快(kuai)，但(dan)其結構較復(fu)雜(za)價(jia)格也較高(gao).ELISA試(shi)劑盒(he)