人脫(tuo)氫(qing)酶(mei)（SDH）ELISA試(shi)劑盒實驗(yan)分析(xi)

人(ren)脫氫(qing)酶(mei)(SDH)ELISA試(shi)劑盒實驗(yan)分析(xi)

本(ben)試劑盒僅(jin)供(gong)研(yan)究(jiu)使用(yong)。

檢測範(fan)圍(wei)：96T
3μg/L -20μg/L

使用(yong)目的：人脫(tuo)氫(qing)酶(mei)(SDH)ELISA試(shi)劑盒用於測定(ding)大鼠(shu)血清、血漿(jiang)及相關(guan)液(ye)體樣本(ben)中(zhong)內(nei)皮(pi)素(su) （ET）含量(liang)。

實驗(yan)原理(li)
本(ben)試劑盒應(ying)用雙(shuang)抗(kang)體夾心法(fa)測定(ding)標(biao)本(ben)中(zhong)大(da)鼠內皮(pi)素(su) （ET）水(shui)平(ping)。用純化(hua)的大鼠(shu)內皮(pi)素(su) （ET）抗(kang)體包(bao)被(bei)微孔板，制成(cheng)固相(xiang)抗(kang)體，往(wang)包(bao)被(bei)單(dan)抗(kang)的微孔中(zhong)依(yi)次(ci)加(jia)入(ru)內(nei)皮(pi)素(su) （ET），再與(yu)HRP標(biao)記(ji)的內皮(pi)素(su) （ET）抗(kang)體結合(he)，形成(cheng)抗(kang)體-抗(kang)原-酶(mei)標(biao)抗(kang)體復(fu)合(he)物，經(jing)過(guo)*洗滌(di)後加(jia)底物(wu)TMB顯色。TMB在(zai)HRP酶(mei)的催(cui)化(hua)下(xia)轉化(hua)成(cheng)藍色，並(bing)在(zai)酸(suan)的作用下(xia)轉化(hua)成(cheng)zui終(zhong)的黃色。顏色的深淺(qian)和(he)樣(yang)品(pin)中(zhong)的內皮(pi)素(su) （ET）呈正(zheng)相(xiang)關(guan)。用酶(mei)標(biao)儀(yi)在(zai)450nm波(bo)長(chang)下(xia)測定(ding)吸光度（OD值），通(tong)過標(biao)準(zhun)曲(qu)線計(ji)算樣品(pin)中(zhong)大(da)鼠內皮(pi)素(su) （ET）濃度。

人脫氫(qing)酶(mei)(SDH)ELISA試(shi)劑盒標(biao)本(ben)要求
．標(biao)本(ben)采集後盡(jin)早(zao)進行(xing)提(ti)取(qu)，提(ti)取(qu)按(an)相(xiang)關(guan)文(wen)獻進(jin)行(xing)，提(ti)取(qu)後應(ying)盡快(kuai)進(jin)行(xing)實(shi)驗(yan)。若不能(neng)馬(ma)上進行試(shi)驗(yan)，可(ke)將(jiang)標(biao)本(ben)放於-20℃保存(cun)，但應(ying)避(bi)免(mian)反復(fu)凍融
2．不能(neng)檢(jian)測含NaN3的樣品(pin)，因NaN3抑制辣(la)根(gen)過(guo)氧(yang)化(hua)物(wu)酶(mei)的（HRP）活性(xing)。

操作步(bu)驟(zhou)
.標(biao)準(zhun)品(pin)的稀釋(shi)：本(ben)試劑盒提(ti)供(gong)原(yuan)倍標(biao)準(zhun)品(pin)壹支，用(yong)戶(hu)可(ke)按(an)照(zhao)下(xia)列圖(tu)表在(zai)小(xiao)試(shi)管(guan)中(zhong)進(jin)行稀釋(shi)。

20μg/L5號(hao)標(biao)準(zhun)品(pin)50μl的原倍標(biao)準(zhun)品(pin)加(jia)入(ru)50μl標(biao)準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)
60μg/L4號(hao)標(biao)準(zhun)品(pin)50μl的5號(hao)標(biao)準(zhun)品(pin)加(jia)入(ru)50μl標(biao)準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)
30μg/L3號(hao)標(biao)準(zhun)品(pin)50μl的4號(hao)標(biao)準(zhun)品(pin)加(jia)入(ru)50μl標(biao)準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)
5μg/L2號(hao)標(biao)準(zhun)品(pin)50μl的3號(hao)標(biao)準(zhun)品(pin)加(jia)入(ru)50μl標(biao)準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)
7.5μg/L號(hao)標(biao)準(zhun)品(pin)50μl的2號(hao)標(biao)準(zhun)品(pin)加(jia)入(ru)50μl標(biao)準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)

2.加(jia)樣(yang)：分別(bie)設空(kong)白(bai)孔（空(kong)白(bai)對(dui)照(zhao)孔不加(jia)樣(yang)品(pin)及(ji)酶(mei)標(biao)試劑，其余(yu)各步(bu)操作相同）、標(biao)準(zhun)孔、待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin)孔。在(zai)酶(mei)標(biao)包(bao)被(bei)板上(shang)標(biao)準(zhun)品(pin)準(zhun)確加(jia)樣(yang)50μl，待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin)孔中(zhong)先(xian)加(jia)樣(yang)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)40μl，然後再(zai)加(jia)待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin)0μl（樣(yang)品(pin)zui終(zhong)稀(xi)釋(shi)度為5倍）。加(jia)樣(yang)將(jiang)樣品(pin)加(jia)於酶(mei)標(biao)板孔底部，盡(jin)量不觸及孔壁(bi)，輕輕晃動混(hun)勻(yun)。
3.溫育：用封板膜(mo)封板後置(zhi)37℃溫育30分鐘。  
4.配(pei)液(ye)：將(jiang)30倍濃縮(suo)洗滌(di)液(ye)用蒸餾水(shui)30倍稀釋(shi)後備(bei)用(yong)
5.洗滌(di)：小(xiao)心揭掉封板膜(mo)，棄去液(ye)體，甩幹，每(mei)孔加(jia)滿(man)洗(xi)滌(di)液(ye)，靜(jing)置30秒後棄去，如(ru)此(ci)重(zhong)復(fu)5次(ci)，拍(pai)幹(gan)。
6.加(jia)酶(mei)：每(mei)孔加(jia)入(ru)酶(mei)標(biao)試劑50μl，空白(bai)孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗(xi)滌(di)：操(cao)作同5。
9.顯色：每(mei)孔先(xian)加(jia)入(ru)顯色劑A50μl，再加(jia)入(ru)顯色劑B50μl，輕輕震(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，37℃避(bi)光(guang)顯色5分鐘.
0.終(zhong)止(zhi)：每(mei)孔加(jia)終(zhong)止(zhi)液(ye)50μl，終(zhong)止(zhi)反應(ying)（此時(shi)藍色立轉(zhuan)黃(huang)色）。
.測定(ding)：以空(kong)白(bai)空(kong)調(tiao)零(ling)，450nm波長(chang)依(yi)序(xu)測(ce)量各孔的吸光度（OD值）。 測(ce)定(ding)應(ying)在(zai)加(jia)終(zhong)止(zhi)液(ye)後5分鐘以內(nei)進行(xing)。

人(ren)脫(tuo)氫(qing)酶(mei)(SDH)ELISA試(shi)劑盒註意事(shi)項
．試(shi)劑盒從冷藏(zang)環(huan)境(jing)中(zhong)取(qu)出應(ying)在(zai)室溫平(ping)衡5-30分鐘後方(fang)可(ke)使用(yong)，酶(mei)標(biao)包(bao)被(bei)板開(kai)封後如(ru)未(wei)用(yong)完(wan)，板條應(ying)裝入(ru)密封袋(dai)中(zhong)保(bao)存。
2．濃洗滌(di)液(ye)可(ke)能(neng)會(hui)有結晶(jing)析(xi)出，稀釋(shi)時(shi)可(ke)在(zai)水(shui)浴中(zhong)加(jia)溫助溶，洗滌(di)時(shi)不影響(xiang)結果(guo)。
3．各步(bu)加(jia)樣(yang)均(jun)應(ying)使用(yong)加(jia)樣(yang)器(qi)，並(bing)經(jing)常校(xiao)對(dui)其準(zhun)確性(xing)，以避(bi)免(mian)試驗(yan)誤差。壹次(ci)加(jia)樣(yang)時(shi)間(jian)控(kong)制在(zai)5分鐘內，如(ru)標(biao)本(ben)數量(liang)多，使用(yong)排(pai)槍加(jia)樣(yang)。
4．請(qing)每(mei)次(ci)測(ce)定(ding)的同時(shi)做標(biao)準(zhun)曲(qu)線，做復(fu)孔。如(ru)標(biao)本(ben)中(zhong)待(dai)測(ce)物(wu)質含量(liang)過(guo)高（樣(yang)本(ben)OD值大(da)於標(biao)準(zhun)品(pin)孔*孔的OD值），請(qing)先(xian)用樣(yang)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)稀釋(shi)壹定倍數（n倍）後再(zai)測(ce)定，計(ji)算時(shi)請zui後乘(cheng)以總(zong)稀(xi)釋(shi)倍數（×n×5）。
5．封板膜(mo)只(zhi)限(xian)壹次(ci)性(xing)使用(yong)，以避(bi)免(mian)交(jiao)叉汙(wu)染(ran)。
6．底物(wu)請(qing)避(bi)光(guang)保存。
7．嚴格按(an)照(zhao)說明(ming)書的操作進行，試驗(yan)結果(guo)判(pan)定必(bi)須(xu)以酶(mei)標(biao)儀(yi)讀數(shu)為(wei)準(zhun).
8．所(suo)有樣品(pin)，洗(xi)滌液(ye)和(he)各種(zhong)廢(fei)棄物都(dou)應(ying)按(an)傳染(ran)物(wu)處(chu)理(li)。
9．本(ben)試劑不同批(pi)號(hao)組(zu)分不得(de)混(hun)用(yong)。
0.如(ru)與(yu)英(ying)文(wen)說明(ming)書有異，以英(ying)文(wen)說明(ming)書為(wei)準(zhun)。

保(bao)存(cun)條件(jian)及有效期(qi)
．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效：6個月(yue)