細胞培(pei)養參考

實驗(yan)室
   細胞培(pei)養是壹種無(wu)菌(jun)操(cao)作(zuo)技術,要求(qiu)工(gong)作環(huan)境和(he)條件(jian)必須(xu)保(bao)證無(wu)微生物(wu)汙染和(he)不受 其(qi)它(ta)有(you)害(hai)因(yin)素(su)的影(ying)響.細(xi)胞培(pei)養室和(he)設計(ji)原則是防(fang)止(zhi)微生物(wu)汙染和(he)有(you)害(hai)因(yin)素(su)影(ying)響,要(yao)求(qiu)工(gong)作環(huan)境清潔,空氣清(qing)新(xin),幹燥(zao)和(he)無(wu)煙(yan)塵(chen).細(xi)胞培(pei)養室的設計(ji)原則壹般(ban)是無(wu)菌(jun)操(cao)作(zuo)區設在室內較少走動(dong)的內(nei)側(ce),常規操(cao)作和(he)封閉(bi)培(pei)養於壹室,而(er)洗(xi)刷(shua)消(xiao)毒(du)在另壹室.
2.常用(yong)設施(shi)及(ji)設備
  ⑴超(chao)凈(jing)工(gong)作臺：也(ye)稱(cheng)凈(jing)化(hua)工(gong)作臺,分為(wei)側(ce)流(liu)式,直(zhi)流(liu)式和(he)外(wai)流(liu)式三(san)大(da)類.
  ⑵無(wu)菌(jun)操(cao)作(zuo)間(jian)：壹般(ban)由更衣間(jian),緩沖(chong)間(jian)和(he)操作(zuo)間(jian)三部分(fen)組(zu)成.操(cao)作間(jian)放置(zhi)凈(jing)化(hua)工(gong)作臺及(ji)二氧(yang)化(hua)碳(tan)培(pei)養箱(xiang),離(li)心(xin)機(ji),倒置(zhi)顯微鏡(jing)等(deng).緩沖(chong)間(jian)可放(fang)置(zhi)電冰箱(xiang),冷藏器(qi)及(ji)消(xiao)毒(du)好(hao)的無(wu)菌(jun)物(wu)品(pin)等(deng).
  ⑶操作(zuo)間(jian)：普通(tong)培(pei)養箱(xiang),離(li)心(xin)機(ji),水浴鍋,定時(shi)鐘,普通天平及(ji)日常分析處(chu)理(li)物(wu)
  ⑷洗(xi)刷(shua)消(xiao)毒(du)間(jian)：烤(kao)箱(xiang),消(xiao)毒(du)鍋,蒸餾(liu)水處(chu)理(li)器及(ji)酸(suan)缸(gang)等(deng).
  ⑸分析間(jian)：顯微鏡(jing),計(ji)算(suan)機(ji)及(ji)打印(yin)機(ji)等(deng).
3.培(pei)養器皿(min)
   常用(yong)細(xi)胞培(pei)養器皿(min)有(you)培(pei)養瓶(ping),培(pei)養板,培(pei)養皿(min)等(deng).常準(zhun)備量(liang)是(shi)使(shi)用(yong)量(liang)的三倍.器皿(min)應選(xuan)擇透明度好,無(wu)毒(du),利於細(xi)胞粘附和(he)生長的(de)材(cai)料(liao),常用(yong)壹次(ci)性聚苯(ben)乙烯材(cai)料(liao)制(zhi)品(pin)或(huo)中(zhong)性(xing)硬(ying)度玻璃制(zhi)品(pin).常用(yong)的(de)器皿(min)有(you)下(xia)面幾(ji)種.
  ⑴液體(ti)儲存瓶(ping)：用(yong)於(yu)儲存各種配(pei)制(zhi)好的(de)培(pei)養液,血清等(deng)液體(ti),常用(yong)規(gui)格(ge)有(you)500ml,250ml,00ml等(deng)幾(ji)種.
  ⑵培(pei)養瓶(ping)：根(gen)據(ju)培(pei)養細胞種類要求(qiu)不同(tong)培(pei)養瓶(ping)的(de)形態各(ge)異(yi),用(yong)於(yu)細胞傳代(dai)培(pei)養的細胞要求(qiu)瓶(ping)壁(bi)厚簿(bu)均(jun)勻,便於(yu)細胞貼(tie)壁生長和(he)觀(guan)察,瓶(ping)口(kou)要(yao)大(da)小(xiao)壹致,口(kou)徑(jing)壹般(ban)不小(xiao)於(yu)cm,允許吸(xi)管伸入(ru)瓶(ping)內(nei)任何(he)部位(wei),規(gui)格(ge)有(you)200ml,00ml,50ml,25ml,0ml等(deng)幾(ji)種.
  ⑶培(pei)養皿(min)：用(yong)於(yu)開放式培(pei)養及(ji)其它(ta)用(yong)途(tu).分直徑30mm,60mm,20mm等(deng)幾(ji)種.
  ⑷吸管：常用(yong)的(de)有(you)長(chang)吸(xi)管和(he)短吸(xi)管兩(liang)類,長吸(xi)管也(ye)稱(cheng)刻(ke)度吸管.其改(gai)良後管上(shang)部有(you)球(qiu)型(xing)刻(ke)度稱(cheng)改(gai)良吸管,刻度吸管用(yong)於(yu)移動液體(ti).常用(yong)ml和(he)0ml兩(liang)種.短吸管也(ye)叫(jiao)滴管,分彎(wan)頭和(he)直頭兩(liang)種.
  ⑸離心(xin)管：離心(xin)管是細(xi)胞培(pei)養中(zhong)使(shi)用(yong)zui廣(guang)泛的(de)器(qi)皿(min),根(gen)據(ju)用(yong)途(tu)不同(tong)形態各(ge)樣,常用(yong)於(yu)細胞培(pei)養的離心(xin)管有(you)大(da)腹(fu)式尖底離(li)心(xin)管和(he)普通(tong)尖底離(li)心(xin)管兩(liang)類.前者分別為(wei)50ml,30ml,5ml；後者則多為(wei)0ml和(he)5ml.
  ⑹其它(ta)：如三角燒(shao)瓶(ping),燒(shao)杯(bei),量筒(tong),漏(lou)鬥(dou),註射器(qi)等(deng).
4.細胞培(pei)養溫度
    維持(chi)培(pei)養細胞旺盛(sheng)生長,必須(xu)有(you)恒(heng)定而(er)適宜的(de)溫(wen)度.不同(tong)種類的細(xi)胞對培(pei)養溫度要求(qiu)也(ye)不同(tong).人體細胞培(pei)養的標準(zhun)溫度為(wei)36.5℃±0.5℃,偏(pian)離這壹溫度範(fan)圍(wei),細胞的正常代(dai)謝會(hui)受到(dao)影(ying)響,甚至死(si)亡(wang).培(pei)養細胞對低(di)溫的(de)耐受力較對高溫(wen)強(qiang),溫度上(shang)升不超(chao)過(guo)39℃時(shi),細(xi)胞代(dai)謝與(yu)溫(wen)度成正比；人體細胞在39-40℃小(xiao)時(shi),即能(neng)受到(dao)壹定損(sun)傷,但(dan)仍(reng)有(you)可(ke)能(neng)恢(hui)復；在40-4℃小(xiao)時(shi),細(xi)胞會(hui)普遍(bian)受到(dao)損(sun)傷,僅小半(ban)數(shu)有(you)可(ke)能(neng)恢(hui)復；4-42℃小時(shi),細(xi)胞受到(dao)嚴(yan)重損傷,大(da)部分(fen)細(xi)胞死(si)亡(wang),個(ge)別細胞仍(reng)有(you)恢(hui)復可能(neng)；當(dang)溫度在43℃以(yi)上(shang)小時(shi),細(xi)胞全部死(si)亡(wang).相(xiang)反(fan),溫(wen)度不低(di)於0℃時(shi),對細胞代(dai)謝雖有(you)影(ying)響,但(dan)並無(wu)傷(shang)害(hai)作(zuo)用(yong)；把細胞放入(ru)25-35℃時(shi),細(xi)胞仍(reng)能生存和(he)生長,但(dan)速度減(jian)慢；放(fang)在4℃數(shu)小(xiao)時(shi)後,再回(hui)到(dao)37℃培(pei)養,細胞仍(reng)能繼(ji)續(xu)生長.細(xi)胞代(dai)謝隨(sui)溫(wen)度降低(di)而(er)減(jian)慢.當(dang)溫度降至(zhi)冰點以(yi)下(xia)時(shi),細(xi)胞可因(yin)胞質結冰受損(sun)而(er)死(si)亡(wang).但(dan)是,如果(guo)向培(pei)養液中(zhong)加(jia)入(ru)壹定量(liang)的冷凍保(bao)護劑(ji)（二甲(jia)亞碸(feng)或甘(gan)油(you)）,可(ke)在深(shen)低(di)溫下(xia)如-80℃或-96℃（液氮(dan)）保(bao)存.
5.合(he)適的氣(qi)體(ti)環境
   氣(qi)體是(shi)哺(bu)乳(ru)動(dong)物(wu)細(xi)胞培(pei)養生存必需條(tiao)件(jian)之壹,所需氣(qi)體(ti)主要有(you)氧(yang)氣和(he)二氧(yang)化(hua)碳(tan).氧(yang)氣參與(yu)三羧(suo)酸(suan)循(xun)環(huan),產(chan)生供給(gei)細胞生長增(zeng)殖(zhi)的能量(liang)和(he)合(he)成(cheng)細(xi)胞生長所需用(yong)的(de)各種成分.開放(fang)培(pei)養時(shi)壹般(ban)把細胞置(zhi)於95%空(kong)氣加(jia)5%二氧(yang)化(hua)碳(tan)混(hun)合(he)氣(qi)體(ti)環(huan)境中(zhong).二氧(yang)化(hua)碳(tan)既(ji)是(shi)細(xi)胞代(dai)謝產(chan)物(wu),也(ye)是(shi)細(xi)胞生長繁(fan)殖(zhi)所需成(cheng)分(fen),它(ta)在細(xi)胞培(pei)養中(zhong)的(de)主(zhu)要(yao)作(zuo)用(yong)在於(yu)維持(chi)培(pei)養基(ji)的(de)pH值(zhi).大(da)多(duo)數(shu)細(xi)胞的適宜pH為(wei)7.2-7.4,偏(pian)離這壹範(fan)圍(wei)對細胞培(pei)養將產(chan)生有(you)害(hai)的(de)影(ying)響.但(dan)細胞耐酸(suan)性(xing)比(bi)耐堿(jian)性大(da)壹些,在偏(pian)酸(suan)環(huan)境(jing)中(zhong)更利於細(xi)胞生長.但(dan)有(you)壹些細(xi)胞也(ye)喜(xi)歡(huan)偏(pian)堿(jian)環境中(zhong)生長,如成纖維細(xi)胞pH是7.4-7.6.每種細胞都(dou)有(you)其(qi)zui適pH值.