ELISA試(shi)劑盒(he)的底(di)物

ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)的底(di)物
HRP催(cui)化過(guo)氧化(hua)物(wu)的氧化(hua)反(fan)應，代表(biao)性的過(guo)氧化(hua)物(wu)為H2O2，其(qi)反(fan)應式如(ru)下：
DH2+ H2O2 D+ H2O
上式中(zhong)，DH2為(wei)供(gong)氧體，H2O2為(wei)受(shou)氫體。在(zai)ELISA中(zhong)，DH2壹般(ban)為(wei)無(wu)色化合物(wu)，經酶(mei)作(zuo)用後成(cheng)為有(you)色的產(chan)物(wu)，以便(bian)作比色測定。常用的供(gong)氫體有(you)鄰苯(ben)二(er)胺(an)（O-phenylenediamine,OPD）、四(si)甲(jia)基(ji)聯(lian)苯(ben)胺(an)（3,3,5,5-tetramethylbenzidine,TMB）和ABTS[2,2-azino-di-（3-ethylbenziazobine sulfonate-6）]。
OPD氧化(hua)後(hou)的產(chan)物(wu)呈橙(cheng)紅色，用酸終止酶(mei)反(fan)應後，在(zai)492nm處(chu)有zui高吸(xi)收峰，靈(ling)敏(min)度(du)高，比色方便，是HRP結合物(wu)zui常(chang)用的底(di)物。OPD本(ben)身難(nan)溶於(yu)水，OPD·2HCL為水溶性(xing)。曾(zeng)有報道OPD有致(zhi)異(yi)變(bian)性(xing)，操作時應(ying)予註意。OPD見(jian)光易變(bian)質(zhi)，與(yu)過(guo)氧化(hua)氫混合成(cheng)底(di)物應(ying)用液(ye)後更(geng)不穩(wen)定，須現(xian)配置(zhi)現(xian)用。在(zai)試(shi)劑盒(he)中(zhong)，OPD和H2O2壹(yi)般(ban)分(fen)成(cheng)二組(zu)分(fen)，OPD可制(zhi)成(cheng)壹定(ding)量(liang)的粉(fen)劑(ji)或片(pian)劑(ji)形(xing)式，片(pian)劑(ji)中(zhong)含(han)有發泡助(zhu)溶(rong)劑，使用更為(wei)方便(bian)。過(guo)氧化(hua)氫則配入(ru)底(di)物緩(huan)沖(chong)液(ye)中，有(you)制成(cheng)易保存(cun)的濃縮液(ye)，使用時用(yong)蒸(zheng)餾水稀釋(shi)。先(xian)進的ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)中(zhong)則直(zhi)接配成(cheng)含(han)保護劑的工(gong)作(zuo)濃度為0.02% H2O2的應(ying)用(yong)液(ye),只需加入OPD後即(ji)可作為(wei)底(di)物應(ying)用液(ye)。