如(ru)何(he)降低(di)國產(chan)ELISA試劑(ji)盒的背景因(yin)素的(de)影(ying)響

如(ru)何(he)降低(di)國產(chan)ELISA試劑(ji)盒的背景因(yin)素的(de)影(ying)響
洗滌(di)很(hen)重(zhong)要
洗滌(di)步(bu)驟(zhou)看似(si)很(hen)無聊(liao)，國(guo)產(chan)ELISA試劑(ji)盒其實(shi)很(hen)重(zhong)要，因(yin)為(wei)如(ru)果(guo)未(wei)結合(he)的材(cai)料(如(ru)非(fei)特異結合(he)的抗(kang)體(ti)或(huo)檢測(ce)試劑(ji))殘留(liu)在微孔板(ban)中(zhong)，那(na)麽它(ta)會增加(jia)背景噪(zao)音。如(ru)有(you)必(bi)要，可(ke)增加洗滌(di)液(ye)中(zhong)的(de)鹽濃(nong)度(du)，這(zhe)會阻止非(fei)特異結合(he)反應。如(ru)果(guo)背景過高(gao)，而您(nin)懷疑(yi)洗滌(di)不(bu)夠(gou)時(shi)，可(ke)以嘗試增(zeng)加洗滌(di)次(ci)數(shu)。
封(feng)閉(bi)更關鍵
封(feng)閉(bi)液的作用(yong)是讓(rang)不(bu)相關的(de)蛋白(bai)占據(ju)微孔板(ban)中(zhong)潛(qian)在的(de)結(jie)合(he)位點。這(zhe)就降低(di)了可(ke)產生信號的抗(kang)體(ti)非(fei)特異結合(he)的機(ji)會。您(nin)當然(ran)也(ye)希望抗(kang)體(ti)只與(yu)目的(de)蛋白(bai)結合(he)吧。如(ru)果(guo)您(nin)的背景過高(gao)，懷疑(yi)封(feng)閉(bi)不充(chong)分，那(na)麽您(nin)可(ke)以嘗試使(shi)用(yong)更(geng)高(gao)濃(nong)度(du)的(de)封(feng)閉(bi)液，或(huo)適當延長封(feng)閉(bi)時間。
如(ru)果(guo)您(nin)壹(yi)直(zhi)被背景問(wen)題(ti)所(suo)困擾(rao)，那(na)麽也(ye)許您(nin)該花(hua)些(xie)時(shi)間來優化封(feng)閉(bi)液。這(zhe)可(ke)能需(xu)要(yao)時間(jian)，但(dan)也(ye)是值(zhi)得(de)的。目(mu)前主要有兩(liang)種類(lei)型(xing)的(de)封(feng)閉(bi)液：蛋白(bai)和非(fei)離(li)子(zi)型去(qu)汙(wu)劑(ji)。您(nin)使用(yong)的(de)類(lei)型(xing)須(xu)取(qu)決(jue)於(yu)多個(ge)因(yin)素，包括(kuo)微孔板(ban)的表(biao)面試劑(ji)、吸(xi)附(fu)的抗(kang)原(yuan)、您(nin)的抗(kang)體(ti)和檢測(ce)試劑(ji)。好的(de)封(feng)閉(bi)液應降低(di)非(fei)特異性結合(he)，但(dan)它(ta)不(bu)應當與(yu)抗(kang)原(yuan)、抗(kang)體(ti)或(huo)檢測(ce)試劑(ji)發生相互(hu)作(zuo)用(yong)。
zui常用(yong)的(de)非(fei)離(li)子(zi)型去(qu)汙(wu)劑(ji)是Tween-20。這(zhe)種(zhong)封(feng)閉(bi)液便(bian)宜、穩(wen)定(ding)，在去(qu)除洗滌(di)過程(cheng)中(zhong)的(de)壹(yi)些(xie)非(fei)特異結合(he)上很(hen)有用(yong)。但(dan)它(ta)們只在存(cun)在時(shi)起(qi)作用(yong)，因(yin)為(wei)很(hen)容易(yi)被(bei)洗掉。因(yin)此所(suo)有洗滌(di)液(ye)中(zhong)也(ye)必須(xu)添加封(feng)閉(bi)液。請勿使用(yong)高(gao)濃(nong)度(du)(正常濃(nong)度(du)為(wei)0.0-0.%)，它會降低(di)特異結合(he)，產生(sheng)假(jia)陰(yin)性。另壹(yi)個(ge)選擇是使(shi)用(yong)蛋白(bai)和非(fei)離(li)子(zi)型去(qu)汙(wu)劑(ji)這(zhe)兩(liang)種(zhong)封(feng)閉(bi)液，後者(zhe)可(ke)協(xie)助洗滌(di)過程(cheng)中(zhong)的(de)封(feng)閉(bi)。
蛋白(bai)封(feng)閉(bi)液則有所(suo)不同(tong)，是*的(de)。它(ta)們與(yu)開放位點結合(he)並(bing)封(feng)閉(bi)，同時穩(wen)定(ding)與(yu)微孔板(ban)結合(he)的抗(kang)原(yuan)分子(zi)。國產(chan)ELISA試劑(ji)盒常用(yong)的(de)蛋白(bai)封(feng)閉(bi)液包括(kuo)牛血清白(bai)蛋白(bai)(BSA)、脫(tuo)脂奶(nai)粉(fen)、正常血清和魚(yu)明膠。血清組(zu)分的(de)內在多(duo)樣(yang)性可(ke)使它有效攔截許多(duo)不同(tong)類(lei)型(xing)的(de)分子(zi)相互(hu)作(zuo)用(yong)。不(bu)過，它(ta)的缺(que)點在於(yu)能與(yu)Protein A和IgG抗(kang)體(ti)相互(hu)作(zuo)用(yong)。解(jie)決(jue)這(zhe)個(ge)問(wen)題(ti)的壹(yi)種(zhong)方(fang)法是使(shi)用(yong)雞(ji)或(huo)魚(yu)的正常血清。
抗(kang)體(ti)濃(nong)度(du)須(xu)優化
但(dan)是如(ru)果(guo)試劑(ji)稍有不同(tong)，則(ze)可(ke)能需(xu)要(yao)優化抗(kang)體(ti)的量。記住，非(fei)特異的抗(kang)體(ti)結合(he)會增加(jia)背景。為(wei)了防(fang)止(zhi)這(zhe)壹(yi)點，切勿(wu)使用(yong)過多(duo)的壹(yi)抗(kang)或(huo)二(er)抗(kang)。
檢測(ce)試劑(ji)要適量
另(ling)壹(yi)點也很(hen)顯而易見(jian)：切勿(wu)使用(yong)過多(duo)的檢(jian)測(ce)試劑(ji)。如(ru)果(guo)濃(nong)度(du)過高(gao)，或(huo)者(zhe)未(wei)正確稀釋(shi)，則(ze)會導(dao)致(zhi)高(gao)背景。也(ye)不要(yao)顯色過度(du)，如(ru)有(you)必(bi)要，優化壹(yi)下(xia)何(he)時(shi)應加入終止(zhi)液(ye)。