進口ELISA試(shi)劑盒(he)間接法(fa)測抗(kang)體(ti)

進口ELISA試(shi)劑盒(he)間接法(fa)是檢(jian)測抗(kang)體(ti)常用(yong)的方(fang)法(fa)。其(qi)原(yuan)理為利用酶標(biao)記(ji)的抗(kang)抗(kang)體(ti)（抗抗(kang)體(ti)）以檢(jian)測與(yu)固相抗原(yuan)結合(he)的受(shou)檢(jian)抗體(ti)，故稱(cheng)為(wei)間接法(fa)。

進口ELISA試(shi)劑盒(he)操作步(bu)驟如下：
）將特異(yi)性(xing)抗(kang)原(yuan)與固相載體(ti)聯結，形(xing)成(cheng)固(gu)相(xiang)抗(kang)原(yuan)。洗滌除(chu)去(qu)未結(jie)合(he)的抗(kang)原(yuan)及雜(za)質(zhi)。
2）加(jia)稀(xi)釋的受(shou)檢(jian)血(xue)清(qing)，保(bao)溫反應(ying)。血(xue)清(qing)中的特(te)異(yi)抗體(ti)與固(gu)相抗(kang)原(yuan)結合(he)，形(xing)成(cheng)固(gu)相(xiang)抗(kang)原(yuan)抗體(ti)復合(he)物。經(jing)洗滌後，固相(xiang)載(zai)體(ti)上(shang)只(zhi)留下特(te)異(yi)性抗體(ti)，血(xue)清(qing)中的其(qi)他成(cheng)份(fen)在(zai)洗滌過程中被(bei)洗去(qu)。
3）加(jia)酶(mei)標(biao)抗(kang)抗(kang)體(ti)。可用(yong)酶標(biao)抗(kang)人(ren)Ig以檢(jian)測總(zong)抗體(ti)，但壹(yi)般多(duo)用酶(mei)標(biao)抗(kang)人(ren)IgG檢(jian)測IgG抗(kang)體(ti)。固相(xiang)免(mian)疫(yi)復合(he)物中的抗(kang)體(ti)與酶(mei)標(biao)抗(kang)體(ti)抗體(ti)結合(he)，從(cong)而間接地(di)標(biao)記(ji)上(shang)酶。洗滌後，固相(xiang)載(zai)體(ti)上(shang)的酶(mei)量(liang)與標(biao)本(ben)中受檢(jian)抗體(ti)的量(liang)正相(xiang)關(guan)。
4）加(jia)底物(wu)顯(xian)色(se)本法(fa)主要用(yong)於(yu)對(dui)病(bing)原(yuan)體(ti)抗體(ti)的檢(jian)測而進行傳染(ran)病(bing)的診(zhen)斷。
間接法(fa)的優(you)點(dian)是只(zhi)要變換包被(bei)抗(kang)原(yuan)就(jiu)可利(li)用同壹(yi)酶標(biao)抗(kang)抗(kang)體(ti)建立檢(jian)測相(xiang)應(ying)抗體(ti)的方(fang)法(fa)。間接法(fa)成(cheng)功(gong)的關(guan)鍵(jian)在(zai)於(yu)抗(kang)原(yuan)的純度。雖(sui)然(ran)有(you)時(shi)用(yong)粗提(ti)抗原(yuan)包被(bei)也(ye)能(neng)取(qu)得實際(ji)有效(xiao)的結(jie)果，但應(ying)盡(jin)可能(neng)予(yu)以純化(hua)，以提(ti)高試(shi)驗的特(te)異(yi)性。特別(bie)應(ying)註意(yi)除(chu)去(qu)能(neng)與(yu)壹(yi)般健康人(ren)血(xue)清(qing)發生(sheng)反(fan)應(ying)的雜(za)質(zhi)，例(li)如以 E.Coli為工(gong)程酶的重(zhong)組抗原(yuan)，如其(qi)中含(han)有(you)E.Coli成(cheng)份(fen)，很(hen)可能(neng)與(yu)受(shou)過E.Coli感(gan)染(ran)者(zhe)血(xue)甭中的抗(kang)E.Coli抗(kang)體(ti)發生(sheng)反(fan)應(ying)。抗原(yuan)中也不(bu)能(neng)含(han)有(you)與酶標(biao)抗(kang)人(ren)Ig反(fan)應(ying)的物(wu)質(zhi)，例(li)如來自人血(xue)漿或(huo)人體(ti)組織的抗(kang)原(yuan)，如不將其(qi)中的Ig去(qu)除(chu)，試(shi)驗中也發生(sheng)假(jia)陽(yang)性(xing)反(fan)應(ying)。另外如抗原(yuan)中含(han)有(you)無(wu)關(guan)蛋白(bai)，也會(hui)因(yin)竟爭(zheng)吸附而影響(xiang)包被(bei)效(xiao)果。間(jian)接法(fa)中另壹(yi)種幹(gan)擾因(yin)素(su)為正(zheng)常(chang)血(xue)清(qing)中所含(han)的高(gao)濃度的非特異性(xing)。病(bing)人(ren)血(xue)清(qing)中受檢(jian)的特(te)異(yi)性IgG只(zhi)占(zhan)總(zong)IgG中的壹(yi)小部(bu)分。IgG的吸附性很(hen)強，非特異IgG可直(zhi)接吸附到固相載(zai)體(ti)上(shang)，有時(shi)也(ye)可吸附到包被(bei)抗(kang)原(yuan)的表面。因(yin)此在(zai)間(jian)接法(fa)中，抗原(yuan)包被(bei)後壹(yi)般用(yong)無(wu)關(guan)蛋白(bai)質(zhi)（例(li)如牛血(xue)清(qing)蛋白(bai)）再(zai)包被(bei)壹(yi)次(ci)，以封閉(bi)（blocking）固相(xiang)上(shang)的空余間(jian)隙(xi)。另外，進(jin)口ELISA試(shi)劑盒(he)在(zai)檢(jian)測過程中標(biao)本(ben)須先(xian)行稀(xi)釋（:40~:200），以避(bi)免(mian)過高(gao)的陰(yin)性(xing)本底影響(xiang)結果的判(pan)斷。