魚(yu)脂(zhi)多(duo)糖(tang)（LPS）ELISA試劑盒操(cao)作步驟及保存方(fang)法

魚脂(zhi)多(duo)糖(tang)(LPS)ELISA試劑盒 操(cao)作步驟
）使用前(qian)，將所(suo)有(you)試劑充(chong)分混(hun)勻(yun)。不要使液體產(chan)生大量(liang)的(de)泡沫，以免(mian)加樣時(shi)加入大量(liang)的(de)氣泡，產(chan)生加樣上的(de)誤差(cha)。
2）根(gen)據(ju)待(dai)測樣品(pin)數(shu)量(liang)加上標準(zhun)品(pin)的(de)數(shu)量(liang)決定(ding)所(suo)需(xu)的(de)板(ban)條(tiao)數(shu)。每(mei)個標準(zhun)品(pin)和空(kong)白(bai)孔建議做復(fu)孔。每(mei)個樣品(pin)根(gen)據(ju)自己(ji)的(de)數(shu)量(liang)來定(ding)，能使用復(fu)孔的(de)盡量(liang)做復(fu)孔。標(biao)本用(yong)標(biao)本(ben)稀釋液：稀釋(shi)後(hou)加入50ul於(yu)反應孔內(nei)。
3）加入稀(xi)釋好(hao)後(hou)的(de)標準(zhun)品(pin)50ul於(yu)反應孔、加入待(dai)測樣品(pin)50ul於(yu)反應孔內(nei)。立(li)即(ji)加入50ul的(de)標記(ji)的(de)抗(kang)體(ti)。蓋(gai)上膜板(ban)，輕輕振蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃溫育小(xiao)時。
4）甩(shuai)去(qu)孔內(nei)液(ye)體(ti)，每(mei)孔加滿洗(xi)滌(di)液，振蕩(dang)30秒，甩(shuai)去(qu)洗(xi)滌(di)液，用(yong)吸(xi)水(shui)紙拍幹。重復(fu)此(ci)操(cao)作3次(ci)。如果用(yong)洗(xi)板(ban)機(ji)洗(xi)滌(di)，洗(xi)滌(di)次(ci)數(shu)增加壹(yi)次(ci)。
5）每(mei)孔加入80ul的(de)親和鏈酶素(su)-HRP，輕輕振蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃溫育30分鐘。
6）甩(shuai)去(qu)孔內(nei)液(ye)體(ti)，每(mei)孔加滿洗(xi)滌(di)液，振蕩(dang)30秒，甩(shuai)去(qu)洗(xi)滌(di)液，用(yong)吸(xi)水(shui)紙拍幹。重復(fu)此(ci)操(cao)作3次(ci)。如果用(yong)洗(xi)板(ban)機(ji)洗(xi)滌(di)，洗(xi)滌(di)次(ci)數(shu)增加壹(yi)次(ci)。
7）每(mei)孔加入底(di)物A、B各(ge)50ul，輕輕振蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃溫育0分鐘。避免光照(zhao)。
8）取出(chu)酶(mei)標(biao)板(ban)，迅(xun)速(su)加入50ul終止(zhi)液，加入終止(zhi)液後(hou)應(ying)立(li)即(ji)測定(ding)結(jie)果。
9）在450nm波(bo)長處(chu)測定(ding)各(ge)孔的(de)OD值。

魚(yu)脂(zhi)多(duo)糖(tang)(LPS)ELISA試劑盒樣品(pin)收(shou)集(ji)、處(chu)理(li)及保存方(fang)法
）血清-----操(cao)作過程(cheng)中避(bi)免任何(he)細胞(bao)刺激。使用不含(han)熱(re)原和(he)內(nei)毒(du)素(su)的(de)試管。收(shou)集(ji)血液(ye)後(hou)，000×g離(li)心0分鐘將血清和(he)紅細胞(bao)迅(xun)速(su)小(xiao)心地(di)分離。
2）血漿(jiang)-----EDTA、檸檬(meng)酸(suan)鹽、肝素(su)血漿(jiang)可(ke)用於(yu)檢測。000×g離心30分鐘去除顆粒(li)。
3）細胞(bao)上清液(ye)---000×g離(li)心0分鐘去除顆粒(li)和(he)聚合(he)物。
4）組織(zhi)勻漿(jiang)-----將組織(zhi)加入適(shi)量(liang)生理(li)鹽(yan)水(shui)搗碎(sui)。000×g離(li)心0分鐘，取上清液(ye)
5）保存------如(ru)果樣(yang)品(pin)不立即(ji)使用，應將其分成小(xiao)部分-70 ℃保存，避(bi)免(mian)反復(fu)冷凍(dong)。盡可(ke)能的(de)不要使用溶血或(huo)高(gao)血脂(zhi)血。如(ru)果血清中(zhong)大量(liang)顆粒，檢測前(qian)先離心或過濾。不要在37℃或(huo)更(geng)高(gao)的(de)溫度(du)加熱解凍(dong)。應在室溫(wen)下(xia)解凍(dong)並確保樣品(pin)均勻地(di)充(chong)分解凍(dong)。