大鼠腫瘤壞死(si)因(yin)子α（TNF-α）酶聯(lian)免疫(yi)分(fen)析試(shi)劑(ji)盒

大(da)鼠腫瘤壞死(si)因(yin)子α（TNF-α）酶聯(lian)免疫(yi)分(fen)析試(shi)劑(ji)盒標(biao)本要(yao)求(qiu) 

．標(biao)本采(cai)集後盡(jin)早進(jin)行(xing)提(ti)取，提(ti)取按相(xiang)關(guan)文獻(xian)進(jin)行(xing)，提(ti)取後應(ying)盡(jin)快(kuai)進(jin)行(xing)實驗(yan)。若(ruo)不能(neng)馬上進(jin)行(xing)試(shi)驗(yan)，可將標(biao)本放(fang)於(yu)-20℃保存，但(dan)應(ying)避免(mian)反復(fu)凍融

2．不(bu)能(neng)檢測含(han)NaN3的樣(yang)品(pin)，因NaN3抑制辣(la)根(gen)過氧(yang)化(hua)物(wu)酶的（HRP）活性(xing)。

操(cao)作步(bu)驟(zhou)

.標(biao)準品(pin)的稀釋(shi)：本試(shi)劑(ji)盒提(ti)供原倍(bei)標(biao)準品(pin)壹(yi)支，用(yong)戶可按(an)照下(xia)列圖表(biao)在(zai)小(xiao)試(shi)管(guan)中(zhong)進(jin)行(xing)稀釋(shi)。

360ng/L 5號標(biao)準品(pin) 50μl的原倍(bei)標(biao)準品(pin)加入50μl標(biao)準品(pin)稀釋(shi)液(ye)

80ng/L 4號標(biao)準品(pin) 50μl的5號標(biao)準品(pin)加入50μl標(biao)準品(pin)稀釋(shi)液(ye)

90ng/L 3號標(biao)準品(pin) 50μl的4號標(biao)準品(pin)加入50μl標(biao)準品(pin)稀釋(shi)液(ye)

45ng/L 2號標(biao)準品(pin) 50μl的3號標(biao)準品(pin)加入50μl標(biao)準品(pin)稀釋(shi)液(ye)

22.5ng/L 號標(biao)準品(pin) 50μl的2號標(biao)準品(pin)加入50μl標(biao)準品(pin)稀釋(shi)液(ye)

2.加(jia)樣(yang)：分(fen)別(bie)設空白(bai)孔(kong)（空白(bai)對照(zhao)孔(kong)不加(jia)樣(yang)品(pin)及酶標(biao)試(shi)劑(ji)，其(qi)余各步(bu)操(cao)作相(xiang)同(tong)）、標(biao)準孔(kong)、待測樣(yang)品(pin)孔(kong)。在(zai)酶(mei)標(biao)包(bao)被板(ban)上標(biao)準品(pin)準確(que)加樣(yang)50μl，待(dai)測樣(yang)品(pin)孔(kong)中(zhong)先(xian)加(jia)樣(yang)品(pin)稀釋(shi)液(ye)40μl，然後再(zai)加待測樣(yang)品(pin)0μl（樣(yang)品(pin)終稀釋(shi)度為(wei)5倍(bei)）。加(jia)樣(yang)將樣(yang)品(pin)加於酶標(biao)板(ban)孔(kong)底(di)部(bu)，盡(jin)量不(bu)觸及孔(kong)壁(bi)，輕輕晃動混勻。

3.溫(wen)育：用(yong)封(feng)板(ban)膜封(feng)板(ban)後置37℃溫(wen)育30分(fen)鐘。   

4.配液(ye)：將30倍(bei)濃縮(suo)洗(xi)滌液(ye)用(yong)蒸(zheng)餾水(shui)30倍(bei)稀釋(shi)後備用(yong)

5.洗(xi)滌：小心(xin)揭掉(diao)封(feng)板(ban)膜，棄去(qu)液(ye)體(ti)，甩(shuai)幹，每孔(kong)加滿(man)洗(xi)滌液(ye)，靜(jing)置30秒(miao)後棄去(qu)，如(ru)此重(zhong)復(fu)5次，拍幹(gan)。

6.加(jia)酶：每孔(kong)加入(ru)酶標(biao)試(shi)劑(ji)50μl，空(kong)白孔(kong)除外(wai)。 

7.溫育：操(cao)作同3。

8.洗(xi)滌：操(cao)作同5。

9.顯色(se)：每孔(kong)先(xian)加(jia)入顯色(se)劑(ji)A50μl，再(zai)加入顯色(se)劑(ji)B50μl，輕(qing)輕震(zhen)蕩混勻，37℃避光(guang)顯色(se)0分(fen)鐘.

0.終止(zhi)：每(mei)孔(kong)加終(zhong)止(zhi)液(ye)50μl，終(zhong)止(zhi)反應(ying)（此時(shi)藍(lan)色(se)立轉(zhuan)黃色(se)）。

.測定(ding)：以(yi)空白孔(kong)調(tiao)零，450nm波(bo)長依序(xu)測量各孔(kong)的吸(xi)光(guang)度（OD值(zhi)）。 測定(ding)應(ying)在(zai)加(jia)終(zhong)止(zhi)液(ye)後5分(fen)鐘以(yi)內進(jin)行(xing)。

標(biao)本要(yao)求(qiu) 

．標(biao)本采(cai)集後盡(jin)早進(jin)行(xing)提(ti)取，提(ti)取按相(xiang)關(guan)文獻(xian)進(jin)行(xing)，提(ti)取後應(ying)盡(jin)快(kuai)進(jin)行(xing)實驗(yan)。若(ruo)不能(neng)馬上進(jin)行(xing)試(shi)驗(yan)，可將標(biao)本放(fang)於(yu)-20℃保存，但(dan)應(ying)避免(mian)反復(fu)凍融

2．不(bu)能(neng)檢測含(han)NaN3的樣(yang)品(pin)，因NaN3抑制辣(la)根(gen)過氧(yang)化(hua)物(wu)酶的（HRP）活性(xing)。

保存條(tiao)件(jian)及有效期
．試(shi)劑(ji)盒保存：；2-8℃。
2．有效(xiao)期：6個月