為(wei)什(shen)麽ELISA檢測試劑盒(he)反(fan)應(ying)總(zong)是需(xu)要壹定(ding)時間的溫育

     ELISA屬(shu)固(gu)相(xiang)，抗原、抗體的結(jie)合(he)只(zhi)在(zai)固(gu)相(xiang)表面(mian)上(shang)發(fa)生(sheng)。以抗體包被(bei)的夾心(xin)法(fa)為(wei)例，加入板孔(kong)中的(de)標本(ben)，其(qi)中的(de)抗原並不是都(dou)有均等(deng)的和(he)固相(xiang)抗結(jie)合(he)的(de)機(ji)會，只(zhi)有(you)貼近孔(kong)壁(bi)的壹(yi)層(ceng)溶液(ye)中(zhong)的抗原直接(jie)與抗體接(jie)觸。這(zhe)是(shi)壹(yi)個(ge)逐步平衡的(de)過(guo)程(cheng)，因此需(xu)經擴散(san)
才能(neng)達(da)到反應(ying)的終(zhong)點(dian)。在(zai)其(qi)後(hou)加(jia)入的酶(mei)標記(ji)抗體與固相(xiang)抗原的結(jie)合(he)也(ye)同(tong)樣如(ru)此。這(zhe)就(jiu)是(shi)為(wei)什(shen)麽ELISA反(fan)應總是需(xu)要壹定(ding)時間的溫育。

ELISA檢測試劑盒(he)中(zhong)壹(yi)般有(you)3次(ci)加(jia)樣(yang)步聚，即加標本(ben)，加(jia)酶(mei)結(jie)合(he)物(wu)，加(jia)底(di)物(wu)。加(jia)樣(yang)時(shi)應(ying)將所加物(wu)加(jia)在(zai)ELISA試劑盒(he)板孔(kong)的底(di)部，避(bi)免(mian)加(jia)在(zai)孔(kong)壁(bi)上(shang)部(bu)，並(bing)註意不可濺出，不可產生(sheng)氣泡(pao)。

加標(biao)本(ben)壹(yi)般用微(wei)量加(jia)樣(yang)器(qi)，按規定(ding)的量(liang)加(jia)入板孔(kong)中。每(mei)次(ci)加(jia)標(biao)本(ben)應(ying)更換(huan)吸嘴(zui)，以(yi)免(mian)發(fa)生(sheng)交叉汙(wu)染(ran)，也(ye)可用壹(yi)次(ci)性(xing)的(de)定(ding)量塑(su)料(liao)管(guan)加(jia)樣。有此測定(ding)（如(ru)間接(jie)法(fa) ELISA）需(xu)用稀(xi)釋的(de)血(xue)清(qing)，可在(zai)試管中(zhong)按規定(ding)的稀(xi)釋度稀(xi)釋後(hou)再加樣。也(ye)可在(zai)板孔(kong)中加(jia)入稀(xi)釋液(ye)，再在(zai)其(qi)中(zhong)加入血(xue)清(qing)標本(ben)，然後(hou)在(zai)微(wei)型震蕩器(qi)上(shang)震(zhen)蕩分(fen)鐘以(yi)保(bao) 證混(hun)和(he)。加(jia)酶(mei)結(jie)合(he)物(wu)應(ying)用液(ye)和(he)底物(wu)應(ying)用液(ye)時(shi)可用定(ding)量多(duo)道加(jia)液(ye)器(qi)，使(shi)加液(ye)過(guo)程(cheng)迅(xun)速(su)完(wan)成。在(zai)ELISA檢測試劑盒(he)中(zhong)壹(yi)般有(you)兩次(ci)抗原抗體反應，即加標本(ben)和(he)加酶(mei)結(jie)合(he)物(wu)後(hou)。抗原抗體反應的完(wan)成需(xu)要有壹(yi)定的(de)溫度和時間，這(zhe)壹(yi)保(bao)溫過(guo)程(cheng)稱(cheng)為(wei)溫育（incubation），有人稱(cheng)之為(wei)孵育，在(zai)ELISA中(zhong)似(si)不恰當。

溫育常采(cai)用的(de)溫度有43℃、37℃、室溫和4℃（冰箱溫度）等。37℃是實驗(yan)室(shi)中(zhong)常用的(de)保(bao)溫溫度，也(ye)是(shi)大多(duo)數(shu)抗原抗體結(jie)合(he)的(de)合(he)適溫度。在(zai)建(jian)立ELISA方法(fa)作(zuo)反(fan)應(ying)動(dong)力(li)學研(yan)究(jiu)時(shi)，實驗(yan)表明，兩次(ci)抗原抗體反應壹般在(zai)37℃經(jing)-2小時(shi)，ELISA檢測試劑盒(he)產(chan)物(wu)的(de)生(sheng)成可達。為(wei)加速反(fan)應(ying)，可提(ti)高反(fan)應(ying)的(de)溫度，有些(xie)試驗(yan)在(zai)43℃進行，但不宜采(cai)用更(geng)高的(de)溫度。抗原抗體反應4℃更為(wei)*，在(zai)放(fang)射(she)免(mian)疫(yi)測(ce)定中多(duo)使(shi)反應(ying)在(zai)冰箱中，以形成(cheng)多(duo)的沈澱。但因所需(xu)時間太長，在(zai)ELISA中(zhong)壹(yi)般不予采(cai)用。