中華枝睪(gao)吸蟲(chong)PCR檢測試劑盒反(fan)應(ying)五(wu)要(yao)素(su)

 
中華枝睪(gao)吸蟲(chong)PCR檢測試劑盒反(fan)應(ying)五(wu)要(yao)素(su)：

參加PCR反(fan)應(ying)的(de)物(wu)質(zhi)主要(yao)有(you)五(wu)種即引(yin)物(wu)、酶、dNTP、模(mo)板(ban)和(he)Mg2+
引(yin)物(wu)：引(yin)物(wu)是PCR特(te)異性反(fan)應(ying)的(de)關(guan)鍵(jian)，PCR 產物(wu)的特(te)異性取決(jue)於引(yin)物(wu)與(yu)模(mo)板(ban)DNA互補(bu)的(de)程度。理論(lun)上，只(zhi)要(yao)知(zhi)道任(ren)何壹段(duan)模(mo)板(ban)DNA序列(lie)， 就能按(an)其(qi)設(she)計(ji)互補(bu)的(de)寡(gua)核(he)苷(gan)酸鏈(lian)做(zuo)引(yin)物(wu)，利用(yong)PCR就可將模(mo)板(ban)DNA在(zai)體外(wai)大(da)量(liang)擴增。設(she)計(ji)引(yin)物(wu)應遵(zun)循(xun)以(yi)下原則(ze)：
①引(yin)物(wu)長度： 5-30bp，常用(yong)為20bp左右。
②引(yin)物(wu)擴增跨度： 以200-500bp為(wei)宜，特(te)定條(tiao)件(jian)下可擴增長至0kb的片段(duan)。
③引(yin)物(wu)堿基：G+C含(han)量(liang)以(yi)40-60%為宜，G+C太少(shao)擴增效果不佳(jia)，G+C過多易(yi)出(chu)現(xian)非(fei)特(te)異條(tiao)帶。ATGC*隨機分(fen)布，避(bi)免5個(ge)以上(shang)的嘌(piao)呤(ling)或(huo)嘧(mi)啶核(he)苷(gan)酸的(de)成串排列(lie)。
④避(bi)免引(yin)物(wu)內部(bu)出(chu)現(xian)二級(ji)結(jie)構(gou)，避(bi)免兩(liang)條(tiao)引(yin)物(wu)間(jian)互(hu)補(bu)，特(te)別是3'端的互(hu)補(bu)，否(fou)則(ze)會(hui)形(xing)成引(yin)物(wu)二聚(ju)體，產生非(fei)特(te)異的擴增條(tiao)帶。
⑤引(yin)物(wu)3'端的堿(jian)基，特(te)別是末(mo)及倒數第二個堿基，應(ying)嚴(yan)格(ge)要(yao)求配對(dui)，以避(bi)免因末(mo)端堿基不配(pei)對(dui)而(er)導致PCR失敗(bai)。
⑥引(yin)物(wu)中有(you)或(huo)能加(jia)上合(he)適的(de)酶切(qie)位點， 被擴增的靶序列(lie)*有(you)適宜的酶切(qie)位點， 這(zhe)對(dui)酶切(qie)分(fen)析或(huo)分(fen)子(zi)克隆(long)很(hen)有好(hao)處(chu)。
⑦引(yin)物(wu)的特(te)異性：引(yin)物(wu)應與(yu)核(he)酸序列(lie)數(shu)據庫的其(qi)它序列(lie)無明顯(xian)同(tong)源(yuan)性。
引(yin)物(wu)量：每條(tiao)引(yin)物(wu)的濃(nong)度0.～umol或(huo)0～00pmol，以(yi)*引(yin)物(wu)量產生所需(xu)要(yao)的(de)結(jie)果(guo)為(wei)好(hao)，引(yin)物(wu)濃(nong)度偏高(gao)會(hui)引(yin)起錯配和(he)非(fei)特(te)異性擴增，且可增加引(yin)物(wu)之間(jian)形(xing)成二聚(ju)體的(de)機(ji)會(hui)。