鮑球狀(zhuang)病毒PCR定量(liang)試(shi)劑盒(he)組(zu)成及試(shi)劑配(pei)制(zhi)

 鮑球狀(zhuang)病毒PCR定量(liang)試(shi)劑盒(he)組(zu)成及試(shi)劑配(pei)制(zhi):

、酶(mei)標板(ban)：壹(yi)塊(kuai)（96孔(kong)）

2、 標準品(pin)（凍(dong)幹品(pin)）： 2瓶(ping)，請臨(lin)用(yong)前(qian)5分鐘內(nei)配制(zhi)。每瓶(ping)以樣(yang)品(pin)稀(xi)釋(shi)液稀(xi)釋(shi)至(zhi)0.5ml，蓋好後室溫(wen)靜置(zhi)大(da)約(yue)0分鐘，同時反復(fu)顛(dian)倒(dao)/搓動(dong)以助溶(rong)解，其(qi)濃(nong)度為(wei)200 U/L，然後做(zuo)系(xi)列(lie)倍(bei)比(bi)稀(xi)釋(shi)（註：不要(yao)直(zhi)接(jie)在(zai)板(ban)中(zhong)進(jin)行(xing)倍(bei)比(bi)稀(xi)釋(shi)），分別配制成200 U/L，00 U/L，50 U/L，25 U/L，2.5 U/L，6.25 U/L，3.2 U/L，樣(yang)品(pin)稀(xi)釋(shi)液直(zhi)接(jie)作(zuo)為(wei)空白孔(kong) 0 U/L。如配(pei)制00 U/L標準品(pin)：取(qu)0.3ml （不要(yao)少於(yu)0.3ml ）200 U/L的上述(shu)標準品(pin)加(jia)入(ru)含有0.3ml樣(yang)品(pin)稀(xi)釋(shi)液的Eppendorf管(guan)中(zhong)，混勻即(ji)可(ke)，其余濃(nong)度以此類推。

3、 樣(yang)品(pin)稀(xi)釋(shi)液：×20ml。

4、 檢(jian)測稀(xi)釋(shi)液A：×0ml。

5、 檢(jian)測稀(xi)釋(shi)液B：×0ml。

技(ji)術(shu)原(yuan)理(li):

DNA的半保留復(fu)制(zhi)是(shi)生(sheng)物(wu)進(jin)化(hua)和(he)傳代(dai)的重要(yao)途徑(jing)。雙(shuang)鏈DNA在(zai)多(duo)種酶(mei)的作用下(xia)可(ke)以變(bian)性解鏈成單(dan)鏈，在(zai)DNA聚合酶(mei)與啟動子(zi)的參與下(xia)，根(gen)據(ju)堿(jian)基(ji)互補配(pei)對原(yuan)則復(fu)制(zhi)成(cheng)同(tong)樣(yang)的兩分子(zi)挎(kua)貝。

在(zai)聚合酶(mei)鏈式(shi)反應(ying)實(shi)驗中(zhong)發(fa)現，DNA在(zai)高溫(wen)時也(ye)可(ke)以發(fa)生(sheng)變(bian)性解鏈，當(dang)溫度降低(di)後(hou)又(you)可(ke)以復(fu)性成為(wei)雙(shuang)鏈。因(yin)此，通(tong)過溫(wen)度變(bian)化(hua)控制DNA的變(bian)性和(he)復(fu)性，並(bing)設計(ji)引(yin)物(wu)做(zuo)啟(qi)動(dong)子(zi)，加(jia)入(ru)DNA聚合酶(mei)、dNTP就可(ke)以完(wan)成特(te)定基因(yin)的體(ti)外(wai)復(fu)制(zhi)。（ DNA高(gao)溫(wen)變(bian)性低溫復(fu)性）

發(fa)現耐(nai)熱(re)DNA聚合同酶(mei)--Taq酶(mei)對於PCR的應用有裏程碑(bei)的意義(yi)，該(gai)酶(mei)可(ke)以耐(nai)受(shou)90℃以上的高溫而(er)不(bu)失(shi)活，不(bu)需要(yao)每個循(xun)環加(jia)酶(mei)，使PCR技術(shu)變(bian)得非(fei)常簡捷(jie)、同時也(ye)大(da)大(da)降低了(le)成本(ben)，PCR技術(shu)得以大量(liang)應(ying)用，並(bing)逐(zhu)步(bu)應(ying)用(yong)於(yu)臨(lin)床(chuang)。