山(shan)羊(yang)痘病(bing)毒（GTPV）核(he)酸(suan)檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒反應五要(yao)素(su)

山(shan)羊(yang)痘病(bing)毒(GTPV)核(he)酸(suan)檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒反應五要(yao)素(su)：
參(can)加(jia)PCR反(fan)應的物質主(zhu)要(yao)有(you)五種(zhong)即引物、酶(mei)、dNTP、模板(ban)和(he)Mg2+
引物：引物是PCR特(te)異(yi)性反應的關鍵(jian)，PCR 產(chan)物的特(te)異(yi)性取決(jue)於(yu)引物與模板(ban)DNA互補的(de)程(cheng)度(du)。理(li)論(lun)上(shang)，只(zhi)要(yao)知道任何壹段模板(ban)DNA序(xu)列， 就(jiu)能(neng)按其(qi)設計互補的(de)寡核(he)苷酸(suan)鏈做引物，利用(yong)PCR就可(ke)將(jiang)模板(ban)DNA在(zai)體(ti)外(wai)大量(liang)擴增。設計引物應遵循以(yi)下(xia)原則(ze)：
①引物長度(du)： 5-30bp，常(chang)用(yong)為(wei)20bp左(zuo)右(you)。
②引物擴增(zeng)跨(kua)度： 以(yi)200-500bp為(wei)宜(yi)，特定條件(jian)下(xia)可(ke)擴(kuo)增(zeng)長(chang)至(zhi)0kb的片(pian)段。
③引物堿基(ji)：G+C含(han)量(liang)以(yi)40-60%為(wei)宜(yi)，G+C太少擴增(zeng)效(xiao)果不(bu)佳(jia)，G+C過(guo)多易出現非特(te)異條(tiao)帶(dai)。ATGC隨(sui)機(ji)分(fen)布(bu)，避(bi)免5個以(yi)上的(de)嘌呤或嘧啶核(he)苷酸(suan)的成串排(pai)列。
④避(bi)免引物內(nei)部出現二(er)級結構，避(bi)免兩(liang)條(tiao)引物間互補，特(te)別(bie)是(shi)3'端的(de)互補，否(fou)則(ze)會(hui)形(xing)成(cheng)引物二(er)聚體(ti)，產(chan)生(sheng)非特(te)異(yi)的擴(kuo)增(zeng)條(tiao)帶(dai)。
⑤引物3'端的(de)堿基(ji)，特(te)別(bie)是(shi)末及倒數(shu)第(di)二(er)個堿(jian)基(ji)，應嚴格要(yao)求配對，以(yi)避(bi)免因末(mo)端堿(jian)基(ji)不(bu)配(pei)對而導致(zhi)PCR失(shi)敗(bai)。
⑥引物中有(you)或(huo)能(neng)加(jia)上(shang)合適(shi)的(de)酶(mei)切位(wei)點， 被擴(kuo)增的靶序(xu)列有(you)適(shi)宜(yi)的(de)酶(mei)切位(wei)點， 這對酶(mei)切分(fen)析或(huo)分(fen)子(zi)克隆(long)很(hen)有好處。
⑦引物的特(te)異(yi)性：引物應與核(he)酸(suan)序(xu)列數(shu)據(ju)庫(ku)的其(qi)它(ta)序(xu)列無(wu)明顯(xian)同(tong)源(yuan)性。
引物量(liang)：每條引物的濃(nong)度0.～umol或(huo)0～00pmol，以(yi)低(di)引物量(liang)產(chan)生(sheng)所需(xu)要(yao)的(de)結(jie)果為(wei)好(hao)，引物濃(nong)度偏(pian)高會(hui)引起錯(cuo)配和(he)非特(te)異性擴增(zeng)，且(qie)可(ke)增(zeng)加(jia)引物之(zhi)間(jian)形成二(er)聚體(ti)的(de)機會。