殘留(liu)elisa試劑(ji)盒實(shi)驗(yan)操作流(liu)程

殘留(liu)elisa試劑(ji)盒操作流(liu)程如下：

（）待測樣品(pin)孔(kong)中(zhong)每(mei)孔(kong)加入待測樣品(pin)00μl，每(mei)種樣品(pin)設3個(ge)平行(xing)孔(kong)；設兩個陰(yin)性(xing)對照(zhao)孔(kong)，每(mei)孔(kong)加未處(chu)理(li)組的細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye)00μl；另(ling)設壹個空(kong)白對照孔(kong)，加入純(chun)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye)00μl。
（2）酶標(biao)板(ban)置(zhi)4℃，包被(bei)過夜。
（3）洗(xi)板：吸(xi)幹(gan)孔(kong)內反(fan)應(ying)液，用洗(xi)滌液過洗(xi)壹遍(bian)（將洗(xi)滌液註(zhu)滿(man)板孔(kong)後，即甩去），之後(hou)將(jiang)洗(xi)滌液註(zhu)滿(man)板孔(kong)，浸泡-2分鐘，間(jian)歇搖動(dong)。甩(shuai)去孔(kong)內液體後在(zai)吸水(shui)紙上(shang)拍(pai)幹(gan)。重復(fu)洗(xi)滌3-4次。
（4）陰(yin)性(xing)對照(zhao)孔(kong)每(mei)孔(kong)加入PBS 50μl，樣品(pin)孔(kong)及空白孔(kong)每(mei)孔(kong)加入:500稀(xi)釋(shi)的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
（5）酶標(biao)板(ban)置(zhi)37℃培養箱(xiang)的(de)濕(shi)盒內(nei)，孵(fu)育60min。
（6）洗(xi)板，同(tong)（4）。
（7）每(mei)孔(kong)加:5000稀釋(shi)的HRP-標(biao)記的山(shan)羊抗兔抗體工作液 00μl。
（8）酶標(biao)板(ban)置(zhi)37℃培養箱(xiang)的(de)濕(shi)盒內(nei)，孵(fu)育60min。
（9）洗(xi)板，同(tong)（4）。
（0）每(mei)孔(kong)加TMB顯(xian)色(se)液(ye) 00μl，輕輕混勻0s，置(zhi)37℃暗(an)處(chu)反(fan)應(ying)5-20min。
（）每(mei)孔(kong)加00μl 2mol/L H2SO4終(zhong)止(zhi)反(fan)應(ying)。
（2）分別測(ce)450nm 吸(xi)光值W和(he)630nm吸(xi)光(guang)值W2，zui終(zhong)測(ce)得(de)的OD值為兩者之差(cha)（W-W2），以(yi)減(jian)少(shao)由(you)容器上(shang)的(de)劃(hua)痕(hen)或指(zhi)印等造(zao)成(cheng)的(de)光(guang)幹(gan)擾。
（3）數據處(chu)理(li)：在(zai)得(de)出標(biao)本（S）和(he)陰(yin)性(xing)對照(zhao)（N）的(de) OD值後(hou)，計(ji)算(suan)S/N值。S/N≥2.為陽性(xing)判定(ding)標(biao)準(zhun)。