耶(ye)爾(er)森菌(jun)通(tong)用PCR檢測(ce)試劑盒(he)產(chan)生非(fei)特異(yi)性(xing)條(tiao)帶(dai)原因

耶(ye)爾(er)森(sen)菌(jun)通(tong)用PCR檢測(ce)試劑盒(he)產(chan)生非(fei)特異(yi)性(xing)條(tiao)帶(dai)：

)用RT陰(yin)性(xing)對(dui)照(zhao)檢測(ce)是否(fou)被(bei)基(ji)因組(zu)DNA汙(wu)染。如(ru)果(guo)RT陰(yin)性(xing)對(dui)照(zhao)的(de)PCR結(jie)果(guo)也顯示(shi)同(tong)樣(yang)條(tiao)帶(dai)，則需要用DNase I重新(xin)處理樣(yang)品。

2)在PCR反應(ying)中(zhong)，非特異(yi)的(de)起(qi)始擴(kuo)增將導(dao)致(zhi)產(chan)生非(fei)特異(yi)性(xing)結(jie)果(guo)。在(zai)低(di)於(yu)引物Tm 2至5℃的(de)溫(wen)度(du)下(xia)進(jin)行退(tui)火(huo)，降(jiang)低(di)鎂離(li)子(zi)或(huo)是(shi)目的(de)DNA的(de)量(liang)將(jiang)減(jian)少(shao)非特異(yi)性(xing)結(jie)果(guo)的(de)產(chan)生。

3)由(you)於(yu)mRNA剪切(qie)方式(shi)的(de)不(bu)同(tong)，根據(ju)選擇(ze)引(yin)物的(de)不(bu)同(tong)將導(dao)致(zhi)產(chan)生不(bu)同(tong)的(de)RT-PCR結(jie)果(guo)。

產(chan)生彌散（smear）條(tiao)帶(dai)

)在(zai)PCR反(fan)應(ying)體(ti)系中壹(yi)鏈產(chan)物的(de)含(han)量(liang)過(guo)高

2)減(jian)少(shao)引物的(de)用量

3)優(you)化PCR反(fan)應(ying)條(tiao)件/減(jian)少(shao)PCR的(de)循(xun)環(huan)次(ci)數(shu)

4)在(zai)用DNase處理被(bei)DNA汙染的(de)RNA樣(yang)品時(shi)，其(qi)產(chan)生的(de)寡(gua)核苷(gan)酸片(pian)段會(hui)產(chan)生非(fei)特異(yi)性(xing)擴(kuo)增，壹(yi)般(ban)會(hui)顯示(shi)為(wei)彌散背(bei)景。

產(chan)生大(da)分子(zi)量的(de)彌散條(tiao)帶(dai)

)大(da)多(duo)數(shu)情(qing)況(kuang)下是(shi)由(you)於(yu)退(tui)火(huo)溫(wen)度(du)過(guo)低(di)而導(dao)致(zhi)的(de)非(fei)特異(yi)性(xing)的(de)起(qi)始及(ji)延(yan)伸產(chan)生的(de)

2)對(dui)於(yu)長片(pian)段的(de)PCR，建(jian)議(yi)將(jiang)反(fan)應(ying)體(ti)系中cDNA的(de)濃度(du)稀(xi)釋至:0（或(huo):00-:200）

6. 在(zai)無(wu)反轉(zhuan)錄酶(mei)的(de)情(qing)況(kuang)下，對(dui)照(zhao)RNA獲得(de)擴(kuo)增結果詳(xiang)細(xi)解析(xi)關(guan)於(yu)Elisa試劑盒(he)的(de)儲存(cun)於(yu)有效期(qi)多(duo)久(jiu)