牛莫拉(la)氏(shi)菌(jun)探(tan)針法熒(ying)光(guang)定量(liang)PCR試劑(ji)盒(he)準(zhun)備(bei)試劑(ji)

牛莫拉(la)氏(shi)菌(jun)探(tan)針法熒(ying)光(guang)定量(liang)PCR試劑(ji)盒(he)準(zhun)備(bei)試劑(ji)與(yu)收(shou)集血(xue)樣(yang)：

雙(shuang)重(zhong)核(he)酸(suan)試劑(ji)盒(he)（熒(ying)光(guang)PCR法） .  收(shou)集標本：血(xue)清、血漿（EDTA 、檸(ning)檬酸(suan)鹽(yan)、肝(gan)素(su)抗凝(ning)）、細(xi)胞(bao)培養(yang)上清液(ye)、組織(zhi)勻漿等盡(jin)早(zao)檢測， 2-8 ℃ 保(bao)存(cun)48 小時(shi)；更長時(shi)間(jian)須(xu)冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保(bao)存(cun)，避(bi)免(mian)反(fan)復凍融。
2.  標準(zhun)品(pin)液(ye)配制(zhi)：使用(yong)前(qian)加入(ru)0.5ml 蒸(zheng)餾(liu)水(shui) 混勻，配成(cheng) 20 0ng/ml 的溶(rong)液(ye) 。 設標準(zhun) 管(guan) 8 管(guan)，管(guan)加標本稀(xi)釋(shi)液(ye) 900ul ，第二(er)至(zhi)第八(ba)管(guan)加入(ru)標本稀(xi)釋(shi)液(ye) 500ul 。在(zai)管(guan)中加入(ru) 20 0ng/ml 的標準(zhun)品(pin)溶(rong)液(ye) 00ul 混勻後(hou)用(yong)加樣(yang)器(qi)吸(xi)出 500ul ，移(yi)至第二(er)管(guan) 。如(ru)此反(fan)復作對倍(bei)稀(xi)釋(shi)，從第七(qi) 管(guan) 中吸(xi)出 500ul 棄(qi)去(qu)。第八(ba) 管(guan) 為空白(bai)對(dui)照。
3.  0× 標本稀(xi)釋(shi)液(ye)用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水作 : 0 倍稀(xi)釋(shi)（ 示例(li)： ml濃(nong)稀(xi)釋(shi)液(ye) +9ml 蒸餾(liu)水(shui)）。
4.  洗(xi)滌液(ye)：用(yong)重(zhong)蒸(zheng)水 :20 稀(xi)釋(shi)（示例(li)：ml 濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌液(ye)加入(ru) 9ml 的重蒸(zheng)水(shui)）
檢測程序：
.  加樣(yang)：每孔(kong)各(ge)加入(ru)標準(zhun)品(pin)或待測樣(yang)品(pin) 00ul ，將反應(ying)板(ban)充分(fen)混勻後(hou)置(zhi) 37 ℃ 20 分(fen)鐘。
2.  洗(xi)板(ban)：用(yong)洗(xi)滌液(ye)將反應(ying)板(ban)充分(fen)洗(xi)滌 4-6 次(ci)，向濾紙(zhi)上印(yin)幹(gan)。
3.  每孔(kong)中加入(ru)抗體工作(zuo)液(ye)0 0ul 。將反應(ying)板(ban)充分(fen)混勻後(hou)置(zhi) 37 ℃ 6 0 分(fen)鐘。
4.  洗(xi)板(ban)：同(tong)前(qian)。
5.  每孔(kong)加酶(mei)標抗體工作(zuo)液(ye)00ul 。將反應(ying)板(ban)置(zhi) 37 ℃ 3 0 分(fen)鐘。
6.  洗(xi)板(ban)：同(tong)前(qian)。
7.  每孔(kong)加入(ru)底(di)物工作(zuo)液(ye)00ul ，置(zhi) 37   ℃ 暗處反應(ying)5 分(fen)鐘。
8.  每孔(kong)加入(ru)00ul 終(zhong)止(zhi)液(ye)混勻。
9.  30分(fen)鐘內用(yong)酶(mei)標儀在(zai) 45 0 nm 處測 吸(xi)光值(zhi)。
性能：
. 準(zhun)確(que)性：標準(zhun)品(pin)線性回(hui)歸與(yu)預期濃度(du)相(xiang)關(guan)系(xi)數(shu)R值(zhi)，大於等於0.9900。
2. 靈敏(min)度(du)：檢測濃(nong)度(du)小於0. U/mL。
3. 特異(yi)性：不與(yu)其(qi)它可(ke)溶(rong)性(xing)結(jie)構(gou)類似物交(jiao)叉(cha)反(fan)應(ying)。
4. 重復性：板(ban)內、板(ban)間(jian)變(bian)異(yi)系數均小於5%。
5. 貯藏：2-8℃，避(bi)光(guang)防(fang)潮保(bao)存(cun)。
6. 有效(xiao)期：6個(ge)月(yue)