小鼠(shu)細(xi)胞周(zhou)期(qi)素D3（Cyclin-D3）檢測試(shi)劑(ji)盒(he)樣本實(shi)驗前(qian)準備步(bu)驟(zhou)

小(xiao)鼠(shu)細(xi)胞周(zhou)期(qi)素D3(Cyclin-D3)檢測試(shi)劑(ji)盒(he)樣本實(shi)驗前(qian)準備步(bu)驟(zhou)：

ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)液體(ti)樣本：包括血清(qing)、血漿(jiang)、尿(niao)液、胸(xiong)腹(fu)水(shui)、腦(nao)脊液、細(xi)胞培養上清(qing)等。
（）血清(qing)
室(shi)溫(wen)血液自然凝(ning)固0-20分鐘後，離(li)心(xin)20分鐘左(zuo)右(you)（2000-3000轉(zhuan)/分）。仔(zai)細(xi)收集上清(qing)。保(bao)存(cun)過(guo)程(cheng)中如(ru)有(you)沈澱(dian)形(xing)成(cheng)，應(ying)再(zai)次離(li)心(xin)。
（2）血漿(jiang)：
應根據標本的(de)要求(qiu)選擇(ze)EDTA、檸(ning)檬(meng)酸(suan)鈉(na)或肝(gan)素作(zuo)為抗(kang)凝(ning)劑(ji)，混(hun)合0-20分鐘後，離(li)心(xin)20分鐘左(zuo)右(you)（2000-3000轉(zhuan)/分）。仔(zai)細(xi)收集上清(qing)。保(bao)存(cun)過(guo)程(cheng)中如(ru)有(you)沈澱(dian)形(xing)成(cheng)，應(ying)再(zai)次離(li)心(xin)。
（3）尿(niao)液：
用無(wu)菌管收集(ji)。離心(xin)20分鐘左(zuo)右(you)（2000-3000轉(zhuan)/分）。仔(zai)細(xi)收集上清(qing)。保(bao)存(cun)過(guo)程(cheng)中如(ru)有(you)沈澱(dian)形(xing)成(cheng)，應(ying)再(zai)次離(li)心(xin)。胸(xiong)腹(fu)水(shui)、腦(nao)脊液參(can)照此(ci)實行(xing)。
（4）細胞培養上清(qing)：
檢測分泌(mi)性(xing)的成份(fen)時，用無(wu)菌管收集(ji)。離心(xin)20分鐘左(zuo)右(you)（2000-3000轉(zhuan)/分）。仔(zai)細(xi)收集上清(qing)。
（5）培養細胞
檢測細(xi)胞內(nei)的(de)成(cheng)份(fen)時，用PBS（PH7.2-7.4）稀(xi)釋細胞懸(xuan)液(ye)，細(xi)胞濃(nong)度(du)達(da)到(dao)00萬(wan)/ml左(zuo)右(you)。通(tong)過反復(fu)凍(dong)融(rong)或加入(ru)組織(zhi)蛋白萃取試(shi)劑(ji)，以(yi)使細胞破(po)壞(huai)並放出(chu)細胞內(nei)成(cheng)份(fen)。離心(xin)20分鐘左(zuo)右(you)（2000-3000轉(zhuan)/分）。仔(zai)細(xi)收集上清(qing)。保(bao)存(cun)過(guo)程(cheng)中如(ru)有(you)沈澱(dian)形(xing)成(cheng)，應(ying)再(zai)次離(li)心(xin)。
（6）組(zu)織(zhi)標(biao)本
切割標本後，稱取重量(liang)。加(jia)入(ru)壹(yi)定量(liang)的(de)PBS，PH7.4。用液(ye)氮(dan)迅速冷(leng)凍(dong)保(bao)存(cun)備(bei)用。標(biao)本融(rong)化後仍(reng)然保(bao)持(chi)2-8℃的(de)溫(wen)度(du)。加(jia)入(ru)壹(yi)定量(liang)的(de)PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試(shi)劑(ji), 用手工或勻(yun)漿(jiang)器(qi)將標(biao)本勻(yun)漿(jiang)化。離(li)心(xin)20分鐘左(zuo)右(you)（2000-3000轉(zhuan)/分）。仔(zai)細(xi)收集上清(qing)。分裝(zhuang)後壹(yi)份(fen)待(dai)檢測，其(qi)余(yu)冷(leng)凍(dong)備(bei)用。