等孢球蟲通(tong)用PCR檢測(ce)試劑(ji)盒(he)準(zhun)備(bei)試劑(ji)與(yu)收集血(xue)樣(yang)

等孢球蟲通(tong)用PCR檢測(ce)試劑(ji)盒(he)準(zhun)備(bei)試劑(ji)與(yu)收集血(xue)樣(yang)：
雙重(zhong)核(he)酸試劑(ji)盒(he)（熒(ying)光PCR法(fa)） .  收集標(biao)本(ben)：血(xue)清(qing)、血(xue)漿(jiang)（EDTA 、檸檬酸鹽、肝(gan)素抗凝）、細胞(bao)培養上(shang)清(qing)液、組(zu)織勻漿等盡早(zao)檢測(ce)， 2-8 ℃ 保存(cun)48 小(xiao)時(shi)；更(geng)長(chang)時(shi)間須冷凍（ -20   ℃或(huo) -70   ℃ ）保存(cun)，避免(mian)反(fan)復(fu)凍融。
2.  標準(zhun)品(pin)液(ye)配(pei)制：使用(yong)前(qian)加(jia)入(ru)0.5ml 蒸餾水 混(hun)勻，配成 20 0ng/ml 的溶液(ye) 。 設標準(zhun) 管(guan) 8 管(guan)，管(guan)加(jia)標(biao)本(ben)稀釋液(ye) 900ul ，第二(er)至(zhi)第八管(guan)加(jia)入(ru)標(biao)本稀(xi)釋液(ye) 500ul 。在(zai)管(guan)中加(jia)入(ru) 20 0ng/ml 的標準(zhun)品(pin)溶(rong)液(ye) 00ul 混(hun)勻後用加(jia)樣(yang)器(qi)吸(xi)出(chu) 500ul ，移至(zhi)第二(er)管(guan) 。如此反(fan)復(fu)作對倍稀(xi)釋，從(cong)第七 管(guan) 中吸(xi)出(chu) 500ul 棄去。第八 管(guan) 為(wei)空白(bai)對照(zhao)。
3.  0× 標(biao)本稀釋液(ye)用(yong)蒸餾水作 : 0 倍稀(xi)釋（ 示例： ml濃稀釋液(ye) +9ml 蒸餾水）。
4.  洗滌液：用(yong)重(zhong)蒸水(shui) :20 稀(xi)釋（示例：ml 濃縮(suo)洗滌液加(jia)入(ru) 9ml 的重(zhong)蒸水(shui)）
檢測(ce)程序：
.  加(jia)樣(yang)：每(mei)孔各加(jia)入(ru)標(biao)準(zhun)品(pin)或(huo)待測(ce)樣品 00ul ，將反(fan)應板(ban)充(chong)分(fen)混勻後置(zhi) 37 ℃ 20 分(fen)鐘。
2.  洗板(ban)：用洗滌液將(jiang)反(fan)應板(ban)充(chong)分(fen)洗滌 4-6 次，向濾(lv)紙(zhi)上(shang)印(yin)幹。
3.  每孔中加(jia)入(ru)抗(kang)體工作液0 0ul 。將(jiang)反(fan)應板(ban)充(chong)分(fen)混勻後置(zhi) 37 ℃ 6 0 分(fen)鐘。
4.  洗板(ban)：同前(qian)。
5.  每孔加(jia)酶(mei)標抗體(ti)工作液00ul 。將(jiang)反(fan)應板(ban)置(zhi) 37 ℃ 3 0 分(fen)鐘。
6.  洗板(ban)：同前(qian)。
7.  每孔加(jia)入(ru)底(di)物(wu)工作液00ul ，置(zhi) 37   ℃ 暗處反(fan)應5 分(fen)鐘。
8.  每孔加(jia)入(ru)00ul 終(zhong)止液(ye)混勻。
9.  30分(fen)鐘內用(yong)酶(mei)標儀在 45 0 nm 處測(ce) 吸(xi)光(guang)值(zhi)。
 非特(te)異(yi)產(chan)物(wu)及電(dian)泳呈(cheng)塗布(bu)狀
.Mg2 濃度
2.調整引(yin)物(wu)、模(mo)板(ban)、聚合酶(mei)的用量(liang)
3.適(shi)當減(jian)少(shao)循(xun)環數(shu)
4.適(shi)當提(ti)高(gao)退(tui)火(huo)溫度，縮(suo)短(duan)退火(huo)或(huo)延伸(shen)時(shi)間(jian)