足(zu)馬(ma)杜拉分(fen)枝(zhi)菌PCR檢測(ce)試劑(ji)盒反應五(wu)要(yao)素(su)

足(zu)馬(ma)杜拉分(fen)枝(zhi)菌PCR檢測(ce)試劑(ji)盒反應五(wu)要(yao)素(su)：
足(zu)馬(ma)杜拉分(fen)枝(zhi)菌PCR檢測(ce)試劑(ji)盒供(gong)應商參(can)加PCR反(fan)應的(de)物質(zhi)主(zhu)要(yao)有(you)五(wu)種(zhong)即引物、酶(mei)、dNTP、模(mo)板和(he)Mg2+
引物：引物是(shi)PCR特異性(xing)反(fan)應的(de)關鍵，PCR 產(chan)物的(de)特異性(xing)取決於(yu)引物與模板(ban)DNA互(hu)補(bu)的(de)程度(du)。理論(lun)上(shang)，只要(yao)知(zhi)道任(ren)何壹(yi)段(duan)模板DNA序(xu)列(lie)， 就(jiu)能(neng)按其設(she)計互補(bu)的(de)寡核(he)苷酸鏈做引物，利用(yong)PCR就(jiu)可(ke)將(jiang)模(mo)板(ban)DNA在(zai)體外(wai)大量(liang)擴增(zeng)。設(she)計引物應遵循以(yi)下(xia)原則：
①引物長度： 5-30bp，常用(yong)為(wei)20bp左右。
②引物擴增(zeng)跨(kua)度(du)： 以(yi)200-500bp為(wei)宜(yi)，特定條(tiao)件下(xia)可(ke)擴增(zeng)長至0kb的(de)片(pian)段(duan)。
③引物堿(jian)基(ji)：G+C含量(liang)以(yi)40-60%為(wei)宜(yi)，G+C太(tai)少擴增(zeng)效果(guo)不(bu)佳(jia)，G+C過(guo)多(duo)易出現(xian)非(fei)特異條(tiao)帶(dai)。ATGC隨機(ji)分布，避免5個以(yi)上(shang)的(de)嘌呤(ling)或嘧啶(ding)核(he)苷酸的(de)成串(chuan)排列(lie)。
④避(bi)免引物內(nei)部(bu)出現(xian)二(er)級結構，避免兩條(tiao)引物間(jian)互(hu)補(bu)，特別是(shi)3'端的(de)互補(bu)，否則會(hui)形成(cheng)引物二(er)聚(ju)體，產(chan)生(sheng)非(fei)特異的(de)擴增(zeng)條(tiao)帶(dai)。
⑤引物3'端(duan)的(de)堿基(ji)，特別是(shi)末及倒(dao)數(shu)第二(er)個堿基(ji)，應嚴(yan)格(ge)要(yao)求配(pei)對，以(yi)避(bi)免因末端堿基(ji)不(bu)配(pei)對而(er)導致(zhi)PCR失(shi)敗。
⑥引物中有(you)或(huo)能(neng)加上(shang)合適的(de)酶切(qie)位點(dian)， 被擴增(zeng)的(de)靶序(xu)列(lie)有(you)適(shi)宜(yi)的(de)酶切(qie)位點(dian)， 這(zhe)對(dui)酶(mei)切(qie)分析(xi)或分子克(ke)隆很有(you)好處(chu)。
⑦引物的(de)特異性(xing)：引物應與核(he)酸序(xu)列(lie)數(shu)據庫的(de)其它序(xu)列(lie)無明(ming)顯同源性(xing)。
引物量(liang)：每(mei)條(tiao)引物的(de)濃度0.～umol或(huo)0～00pmol，以(yi)引物量(liang)產(chan)生(sheng)所(suo)需(xu)要(yao)的(de)結果(guo)為(wei)好，引物濃度偏高(gao)會引起錯配(pei)和(he)非(fei)特異性(xing)擴增(zeng)，且可(ke)增(zeng)加引物之(zhi)間(jian)形(xing)成(cheng)二(er)聚(ju)體的(de)機會(hui)。