當(dang)前(qian)位置:首頁(ye) > 技(ji)術(shu)文(wen)章 > 堪(kan)薩(sa)斯分枝桿(gan)菌PCR檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒反應(ying)特點
堪薩(sa)斯分枝桿(gan)菌PCR檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒反應(ying)特點:
() 特異(yi)性(xing)強(qiang)
PCR反應(ying)的特異(yi)性(xing)決定(ding)因(yin)素為:
①引物(wu)與模板(ban)DNA特(te)異(yi)正確(que)的結(jie)合;
②堿基配(pei)對原則(ze);
③Taq DNA聚合(he)酶(mei)合(he)成反應(ying)的忠實性(xing);
④靶(ba)基(ji)因(yin)的(de)特(te)異(yi)性(xing)與保(bao)守(shou)性(xing)。
其中(zhong)引物(wu)與模板(ban)的(de)正確(que)結(jie)合是關(guan)鍵(jian)。引(yin)物(wu)與模板(ban)的(de)結(jie)合及(ji)引物(wu)鏈(lian)的延伸(shen)是遵(zun)循(xun)堿基配(pei)對原則(ze)的。聚(ju)合(he)酶(mei)合成反應(ying)的忠實性(xing)及(ji)Taq DNA聚合酶(mei)耐高(gao)溫性(xing),使反應(ying)中(zhong)模板(ban)與(yu)引物(wu)的結(jie)合(復(fu)性(xing))可以(yi)在較(jiao)高(gao)的(de)溫度下(xia)進行,結(jie)合的(de)特(te)異(yi)性(xing)大大增加,被擴增(zeng)的靶(ba)基(ji)因(yin)片(pian)段(duan)也(ye)就(jiu)能(neng)保(bao)持(chi)很(hen)高(gao)的(de)正(zheng)確(que)度。再通過(guo)選擇(ze)特(te)異(yi)性(xing)和保(bao)守(shou)性(xing)高(gao)的(de)靶(ba)基(ji)因(yin)區(qu),其(qi)特異(yi)性(xing)程度就更(geng)高(gao)。
(2) 靈(ling)敏度高(gao)
PCR產(chan)物(wu)的生(sheng)成量是以(yi)指(zhi)數(shu)方(fang)式(shi)增(zeng)加(jia)的(de),能(neng)將(jiang)皮(pi)克(ke)(pg=0-2g)量級的(de)起始待測模板(ban)擴(kuo)增到微(wei)克(ke)(ug=0-6g)水(shui)平(ping)。能(neng)從(cong)00萬(wan)個(ge)細(xi)胞中(zhong)檢(jian)出(chu)壹(yi)個(ge)靶(ba)細(xi)胞;在病(bing)毒(du)的檢(jian)測(ce)中(zhong),PCR的靈(ling)敏度可達3個(ge)RFU(空(kong)斑形成單(dan)位);在細(xi)菌(jun)學中(zhong)zui小檢(jian)出(chu)率(lv)為(wei)3個(ge)細(xi)菌(jun)。
(3) 簡便、快(kuai)速
PCR反應(ying)用(yong)耐高(gao)溫的(de)Taq DNA聚(ju)合(he)酶,壹次(ci)性(xing)地將反應(ying)液(ye)加(jia)好(hao)後,即(ji)在DNA擴(kuo)增(zeng)液(ye)和(he)水(shui)浴(yu)鍋上(shang)進(jin)行變(bian)性(xing)-退(tui)火(huo)-延(yan)伸(shen)反(fan)應(ying),壹般在2~4 小(xiao)時(shi)完(wan)成擴(kuo)增反(fan)應(ying)。擴增產(chan)物(wu)壹般(ban)用(yong)電(dian)泳分析,不壹(yi)定(ding)要(yao)用(yong)同(tong)位素,無放(fang)射(she)性(xing)汙染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不(bu)需要分離病毒或細(xi)菌(jun)及(ji)培(pei)養(yang)細胞,DNA 粗(cu)制(zhi)品(pin)及(ji)總(zong)RNA均(jun)可作為(wei)擴(kuo)增模板(ban)。可直接(jie)用(yong)臨(lin)床(chuang)標本如血液(ye)、體(ti)腔(qiang)液(ye)、洗(xi)嗽液(ye)、毛發、細胞、活(huo)PCR技(ji)術(shu)概論。
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