乙醛脫(tuo)氫(qing)酶(mei)（ALDH）測(ce)定(ding)步(bu)驟

乙醛脫(tuo)氫(qing)酶(mei)（ALDH）測(ce)定(ding)步(bu)驟：

、分(fen)光光度計(ji)或(huo)酶(mei)標(biao)儀(yi)預(yu)熱(re)30min以(yi)上，調節波(bo)長至(zhi)600nm，蒸(zheng)餾水(shui)調零(ling)。

2、樣(yang)本(ben)測定(ding)

（）試劑(ji)四(si)於37℃（哺乳(ru)動(dong)物）或(huo)25℃（其它(ta)物種(zhong)）孵(fu)育5min。

（2）在(zai)微(wei)量(liang)石(shi)英(ying)比色(se)皿(min)或96孔(kong)板中加入0μL樣(yang)本(ben)、200μL試劑(ji)四(si)和(he)40μL試劑(ji)五，混(hun)勻，記錄(lu)600nm處(chu)20s時(shi)吸光值(zhi)A和(he)min20s後(hou)的(de)吸光值(zhi)A2，計(ji)算(suan)ΔA=A-A2。

NOX 活(huo)力(li)單位的(de)計算(suan)

a. 用微(wei)量(liang)石(shi)英(ying)比色(se)皿(min)測定(ding)的(de)計算(suan)公(gong)式(shi)如下

、血清（漿）NOX活力的(de)計算(suan):

單位的(de)定義(yi)：每mL血清（漿）在每mL反應體(ti)系中每分(fen)鐘A600變(bian)化0.0定(ding)義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶(mei)活力單位。

NOX（U/mL）＝ΔA×V反總(zong)÷V樣(yang)÷0.0÷T=2500×ΔA

2、組織(zhi)、細(xi)菌(jun)或細胞(bao)中NOX活力(li)的(de)計算(suan):

（）按(an)樣(yang)本(ben)蛋白(bai)濃度(du)計(ji)算(suan)：

單位的(de)定義(yi)：每mg組(zu)織(zhi)蛋白在每mL反應體(ti)系中每分(fen)鐘A600變(bian)化0.0定(ding)義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶(mei)活力單位。

NOX（U/mg prot）=ΔA×V反總(zong)÷（V樣(yang)×Cpr）÷0.0÷T=2500×ΔA÷Cpr

此法(fa)需(xu)要(yao)自(zi)行(xing)測(ce)定(ding)樣(yang)本(ben)蛋白(bai)質濃度(du)。

（2）按(an)樣(yang)本(ben)鮮重(zhong)計(ji)算(suan)：

單位的(de)定義(yi)：每g組(zu)織(zhi)在每mL反應體(ti)系中每分(fen)鐘A600變(bian)化0.0定(ding)義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶(mei)活力單位。

NOX（U/g鮮重(zhong)）=ΔA×V反總(zong)÷(W×V樣(yang)÷V樣(yang)總(zong))÷0.0÷T=505×ΔA÷W

（3）按(an)細(xi)菌(jun)或細胞(bao)密(mi)度(du)計算(suan)：

單位的(de)定義(yi)：每萬(wan)個(ge)細菌(jun)或細胞(bao)在(zai)每mL反應體(ti)系中每分(fen)鐘A600變(bian)化0.0定(ding)義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶(mei)活力單位。

NOX（U/04cell）=ΔA×V反總(zong)÷(500×V樣(yang)÷V樣(yang)總(zong))÷0.0÷T=.0×ΔA

V 反總(zong)：反應體(ti)系總(zong)體(ti)積，0.25mL；V樣(yang)：加入樣(yang)本(ben)體積，0.0mL；V樣(yang)總(zong)：加入提取(qu)液(ye)體(ti)積，0.202mL；T：反應時(shi)間(jian)，min；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋白(bai)質濃度(du)，mg/mL；W：樣(yang)本(ben)質量(liang)；500：細胞(bao)或細(xi)菌(jun)總(zong)數(shu)，500萬(wan)。